2015년 6월에 살구나무(Modern과 Alexander 품종)에 잿빛무늬병이 발생하였으며, 과실에 대한 발병률은 5% 정도였다. 잿빛무늬병은 발생 초기 살구 과실의 표면에 작은 갈색 반점이 생기다가 병이 진전된 후에는 점차 확대되어 수침상의 병반이 퍼지고, 시간이 더 지나면 갈변된 원형의 병반 위에 백색의 포자 덩어리가 밀생하여 결국에는 과실 전체가 부패하였다. 특히, 수확기 1-2주를 앞두고 잿빛무늬병 발생이 더욱 심하였다. M. fructicola 분생포자는 분지된 염주상으로 사슬모양을 나타냈으며, 단생, 투명하고, 난형-레몬형으로 크기는 $14.6-18.0{\times}8.5-11{\mu}m$였다. 살구 잿빛무늬병을 일으키는 병원균의 형태적 특징, 병원성 검정, rDNA의 ITS 영역의 염기서열 분석을 기초로 M. fructicola로 동정하였으며, NCBI에서 BLAST search한 결과 M. fructicola로 등록된 GenBank accession Nos. KC544809, JN176564, FJ515894, KM279616 등과 100% 일치하는 것으로 확인되었다.
2015년 6월에 살구나무(Modern과 Alexander 품종)에 잿빛무늬병이 발생하였으며, 과실에 대한 발병률은 5% 정도였다. 잿빛무늬병은 발생 초기 살구 과실의 표면에 작은 갈색 반점이 생기다가 병이 진전된 후에는 점차 확대되어 수침상의 병반이 퍼지고, 시간이 더 지나면 갈변된 원형의 병반 위에 백색의 포자 덩어리가 밀생하여 결국에는 과실 전체가 부패하였다. 특히, 수확기 1-2주를 앞두고 잿빛무늬병 발생이 더욱 심하였다. M. fructicola 분생포자는 분지된 염주상으로 사슬모양을 나타냈으며, 단생, 투명하고, 난형-레몬형으로 크기는 $14.6-18.0{\times}8.5-11{\mu}m$였다. 살구 잿빛무늬병을 일으키는 병원균의 형태적 특징, 병원성 검정, rDNA의 ITS 영역의 염기서열 분석을 기초로 M. fructicola로 동정하였으며, NCBI에서 BLAST search한 결과 M. fructicola로 등록된 GenBank accession Nos. KC544809, JN176564, FJ515894, KM279616 등과 100% 일치하는 것으로 확인되었다.
In June 2015, an exhibited typical signs and symptoms of brown rot was observed on fruit of Apricot cvs. Modern and Alexander at an incidence of 5% of fruit in Jeonju, Korea. Early symptoms on fruit showed small, circular, light brown spots that eventually destroyed the entire fruit. Small sporodoch...
In June 2015, an exhibited typical signs and symptoms of brown rot was observed on fruit of Apricot cvs. Modern and Alexander at an incidence of 5% of fruit in Jeonju, Korea. Early symptoms on fruit showed small, circular, light brown spots that eventually destroyed the entire fruit. Small sporodochia appeared on the fruit surface. Fruit susceptibility to brown rot increases during the 1 to 2 weeks period prior to harvest. The conidia were one-celled, hyaline, lemon-shaped, $14.6-18.0{\times}8.5-11{\mu}m$, and borne in branched monilioid chains. Based on the morphological characteristics and phylogenetic analysis of internal transcribed spacer (ITS), the fungus was identified as Monilinia fructicola. A BLAST search revealed that sequences of the fungus shared 100% identity to those of M. fructicola. Pathogenicity of a representative isolate was proved by artificial inoculation, fulfilling Koch's postulates. To our knowledge, this is the first confirmed report on the occurrence of M. fructicola on apricot in Korea.
In June 2015, an exhibited typical signs and symptoms of brown rot was observed on fruit of Apricot cvs. Modern and Alexander at an incidence of 5% of fruit in Jeonju, Korea. Early symptoms on fruit showed small, circular, light brown spots that eventually destroyed the entire fruit. Small sporodochia appeared on the fruit surface. Fruit susceptibility to brown rot increases during the 1 to 2 weeks period prior to harvest. The conidia were one-celled, hyaline, lemon-shaped, $14.6-18.0{\times}8.5-11{\mu}m$, and borne in branched monilioid chains. Based on the morphological characteristics and phylogenetic analysis of internal transcribed spacer (ITS), the fungus was identified as Monilinia fructicola. A BLAST search revealed that sequences of the fungus shared 100% identity to those of M. fructicola. Pathogenicity of a representative isolate was proved by artificial inoculation, fulfilling Koch's postulates. To our knowledge, this is the first confirmed report on the occurrence of M. fructicola on apricot in Korea.
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문제 정의
fructicola로 동정되었으며, 건전한 살구 과실에 인공 접종하여 병원성을 확인하였다. 따라서 본 연구는 이전에 기록된 살구 잿빛무늬병에 대하여 병징, 균학적 특징, 병원성 검정 및 염기서열 분석결과를 포함하는 균학적 및 분자생물학적인 자료를 보고하고자 한다.
그러나 우리나라의 경우 발생 생태 및 병징에 관한 기록만 확인된다. 따라서 살구에서 잿빛무늬증상을 일으키는 병원균을 분리하여 균학적 특성, 병원성 검정, ITS rDNA 염기서열 비교분석 등의 결과를 바탕으로 M. fructicola로 동정되었으며, 국내에 보고된 자료를 좀 더 보완하는 자료로 제출하고자한다.
제안 방법
fructicola 병원균 (KACC48000)을 감자한천배지에서 1주일 동안 배양한 균사를 ribosomal DNA (rDNA)의 internal transcribed spacer (ITS) 영역의 염기서열에 사용하였다. Genomic DNA는 DNeasy Plant Mini kit (QIAGEN, Valencia, Canada)를 이용하여 분리하였고, ITS1/ITS4 (White 등, 1990) primer를 이용하여 PCR로 증폭하였다. 증폭시킨 PCR 산물은 1.
cgi)에서 확인하였다. 계통수 분석은 GenBank 데이터베이스에 올라와 있는 ITS의 염기서열들을 이용하였다. 계통수는 MEGA 6.
KACC48000), 병원성 검정 및 염기서열 분석에 사용하였다. 또한 병원균의 특성비교를 위하여 잿빛무늬병이 감염된 다른 살구에서 같은 방법으로 단포자를 분리하여 JBARES37 균주를 확보하였다. 병원성 검정은 Alexander 품종에서 실시하였다.
병원균을 3일간 암배양하여 단포자의 끝부분을 떼어 감자한천배지에 옮긴후 25°C 항온기에서 5일간 배양한 뒤 병원균의 균학적 특성을 조사하였다.
병원균의 균학적 특징 및 염기서열 분석.
병원균의 단포자를 분리하기 위하여 발병포장에서 이병과를 채집하여 실험실에서 분생포자 덩어리를 떼어내어 멸균수가 들어있는 1.5 ml eppendorf 튜브에 넣고 볼텍스믹서로 30초 동안 흔들었다. 분생포자가 들어있는 멸균수를 루프로 찍어 감자한천배지(Difco, Sparks, MD, USA)에 치상하였다.
병원균의 형태적 특징을 관찰하기 위해 KACC48000 균주를 감자한천배지에 치상하여 25ºC에서 1주일 동안 배양하였다.
또한 병원균의 특성비교를 위하여 잿빛무늬병이 감염된 다른 살구에서 같은 방법으로 단포자를 분리하여 JBARES37 균주를 확보하였다. 병원성 검정은 Alexander 품종에서 실시하였다. 병원성 접종원은 KACC48000 균주를 감자한천배지에서 1주일간 배양한 후 멸균수를 넣고 메스 (scalpel)로 포자를 수거한 포자현탁액을 3×105 conidia/ml로준비하였다.
병원성 접종원은 KACC48000 균주를 감자한천배지에서 1주일간 배양한 후 멸균수를 넣고 메스 (scalpel)로 포자를 수거한 포자현탁액을 3×105 conidia/ml로준비하였다. 병원성 검정은 건전한 과실 5개 위에 포자현탁액을 분무하였으며, 대조과는 멸균수를 분무하였다. 접종과와 대조과를 밀폐된 플라스틱 박스에 넣고 박스 안쪽표면에 멸균수를 분무하여 상대습도를 100% 유지하였으며, 25°C±1°C의 인큐베이터에 보관하였다.
5 ml eppendorf 튜브에 넣고 볼텍스믹서로 30초 동안 흔들었다. 분생포자가 들어있는 멸균수를 루프로 찍어 감자한천배지(Difco, Sparks, MD, USA)에 치상하였다. 병원균을 3일간 암배양하여 단포자의 끝부분을 떼어 감자한천배지에 옮긴후 25°C 항온기에서 5일간 배양한 뒤 병원균의 균학적 특성을 조사하였다.
5% agarose gel에서 전기영동하여 band를 확인한 후, PCR purification kit (CoreOneTM; CoreBio, Seoul, Korea)를 이용하여 정제하였다. 염기서열은 autosequencer (ABI 3030)로 분석하였으며, 최종 획득한 ITS의 염기서열들은 GenBank database (National Center for Biotechnology Information [NCBI] US National Institute of Health Bethesda; http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)에서 확인하였다. 계통수 분석은 GenBank 데이터베이스에 올라와 있는 ITS의 염기서열들을 이용하였다.
접종과와 대조과를 밀폐된 플라스틱 박스에 넣고 박스 안쪽표면에 멸균수를 분무하여 상대습도를 100% 유지하였으며, 25°C±1°C의 인큐베이터에 보관하였다.
Genomic DNA는 DNeasy Plant Mini kit (QIAGEN, Valencia, Canada)를 이용하여 분리하였고, ITS1/ITS4 (White 등, 1990) primer를 이용하여 PCR로 증폭하였다. 증폭시킨 PCR 산물은 1.5% agarose gel에서 전기영동하여 band를 확인한 후, PCR purification kit (CoreOneTM; CoreBio, Seoul, Korea)를 이용하여 정제하였다. 염기서열은 autosequencer (ABI 3030)로 분석하였으며, 최종 획득한 ITS의 염기서열들은 GenBank database (National Center for Biotechnology Information [NCBI] US National Institute of Health Bethesda; http://blast.
형태적 특징은 differential interference contrast (DIC) 광학현미경으로 200–1,000배에서 관찰하였다.
형태적 특징을 기초로 한 병원균의 동정을 뒷받침하고자 염기서열 분석을 실시하였다. M.
대상 데이터
2015년 6월에 전라북도 전주시의 세 개 농가포장에서 재배되고 있는 살구 과실에 잿빛무늬병 증상이 관찰되었다. 발병된 살구 과실에서 병원균을 순수 분리하여 균학적 특성 및 DNA 염기서열을 분석한 결과 M.
0프로그램을 이용하여 neighbor-joining 방법으로 작성하였으며, sequence distance는 Tajima-Nei parameter model로 계산하였다(Saitou와 Nei, 1987; Tamura 등, 2013). Botrytis cinerea (GenBank accession No. KM016553)를 계통수 분석 outgroup으로 사용하였다.
병원균이 감염된 표본은 고려대학교 표본실 (Korea University Herbarium, KUS)에 보존하였다. KUS-F29117로부터 대표 균주가 분리되어 농업유전자원정보센터 (Korean Agricultural Culture Collection, KACC)에 기탁하였으며 (accession No. KACC48000), 병원성 검정 및 염기서열 분석에 사용하였다. 또한 병원균의 특성비교를 위하여 잿빛무늬병이 감염된 다른 살구에서 같은 방법으로 단포자를 분리하여 JBARES37 균주를 확보하였다.
형태적 특징을 기초로 한 병원균의 동정을 뒷받침하고자 염기서열 분석을 실시하였다. M. fructicola 병원균 (KACC48000)을 감자한천배지에서 1주일 동안 배양한 균사를 ribosomal DNA (rDNA)의 internal transcribed spacer (ITS) 영역의 염기서열에 사용하였다. Genomic DNA는 DNeasy Plant Mini kit (QIAGEN, Valencia, Canada)를 이용하여 분리하였고, ITS1/ITS4 (White 등, 1990) primer를 이용하여 PCR로 증폭하였다.
병원균을 3일간 암배양하여 단포자의 끝부분을 떼어 감자한천배지에 옮긴후 25°C 항온기에서 5일간 배양한 뒤 병원균의 균학적 특성을 조사하였다. 병원균이 감염된 표본은 고려대학교 표본실 (Korea University Herbarium, KUS)에 보존하였다. KUS-F29117로부터 대표 균주가 분리되어 농업유전자원정보센터 (Korean Agricultural Culture Collection, KACC)에 기탁하였으며 (accession No.
이론/모형
계통수 분석은 GenBank 데이터베이스에 올라와 있는 ITS의 염기서열들을 이용하였다. 계통수는 MEGA 6.0프로그램을 이용하여 neighbor-joining 방법으로 작성하였으며, sequence distance는 Tajima-Nei parameter model로 계산하였다(Saitou와 Nei, 1987; Tamura 등, 2013). Botrytis cinerea (GenBank accession No.
성능/효과
fructicola로 등록된 GenBank accession Nos. KC544809, JN176564, FJ515894, KM279616 등과 100% 일치하는 것으로 확인되었다.
KC544809, JN176564, FJ515894, KM279616 등과 100% 일치하였다. 또한 계통수작성 결과 KC544809의 염기서열은 M. fructicola와 같은 계통군에 속함을 확인할 수 있었다(Fig. 2). 최근에 ITS 염기서열을 이용한 Monilinia종 간 구분을 위하여, Hu 등(2011) 이 중국에서 복숭아 잿빛곰팡이병을 일으키는 M.
2015년 6월에 전라북도 전주시의 세 개 농가포장에서 재배되고 있는 살구 과실에 잿빛무늬병 증상이 관찰되었다. 발병된 살구 과실에서 병원균을 순수 분리하여 균학적 특성 및 DNA 염기서열을 분석한 결과 M. fructicola로 동정되었으며, 건전한 살구 과실에 인공 접종하여 병원성을 확인하였다. 따라서 본 연구는 이전에 기록된 살구 잿빛무늬병에 대하여 병징, 균학적 특징, 병원성 검정 및 염기서열 분석결과를 포함하는 균학적 및 분자생물학적인 자료를 보고하고자 한다.
5–11 μm였다. 살구 잿빛무늬병을 일으키는 병원균의 형태적 특징, 병원성 검정, rDNA의 ITS 영역의 염기서열 분석을 기초로 M. fructicola로 동정하였으며, NCBI에서 BLAST search한 결과 M. fructicola로 등록된 GenBank accession Nos. KC544809, JN176564, FJ515894, KM279616 등과 100% 일치하는 것으로 확인되었다.
2). 최근에 ITS 염기서열을 이용한 Monilinia종 간 구분을 위하여, Hu 등(2011) 이 중국에서 복숭아 잿빛곰팡이병을 일으키는 M. fructicola, M. yunnanensis, M. fructigena, M. laxa를 분리하여 ITS 유전분석을 한 결과 100% 종 간 구분이 되었으며, 4종 간에 상당한 유전적 변이가 있음을 확인하였다. 그러나 과거에는 M.
질의응답
핵심어
질문
논문에서 추출한 답변
살구나무의 분류학적 위치 및 활용 용도는?
살구나무(Prunus armeniaca L., Rosaceae)는 장미과 벚나무 속에 속하고, 식용이나 약용, 정원수로 이용된다. 중국이 원산지로한국, 일본, 몽골 등 아시아와 미국, 유럽등지에 널리 분포한다.
살구나무의 원산지와 분포지는?
, Rosaceae)는 장미과 벚나무 속에 속하고, 식용이나 약용, 정원수로 이용된다. 중국이 원산지로한국, 일본, 몽골 등 아시아와 미국, 유럽등지에 널리 분포한다. 살구나무의 과실인 살구는 구형의 핵과이며, 융모가 있고 6월에 황색으로 익어 수확하게 된다(Kim, 1975).
살구나무에 발생하는 주요 진균병에는 어떤 것들이 있는가?
국내에서 살구나무에 발생하는 주요 진균병으로는 Podosphaera tridactyla (powdery mildew), Cladosporium carpophilum (scab), Blastospora smilacis (rust), Phomopsis vexans (brown rot), Phyllosticta circumscissa, Septoria cerasina (leaf spot), Monilinia fructicola (brown rot), Taphrina mume (leaf curl) 등이 보고되어 있다(The Korean Society of Plant Pathology, 2009). 특히, Monilinia균은 살구를 비롯하여 복숭아, 자두, 매실, 체리, 사과, 배 등 여러 과수류에 잿빛무늬병을 일으키는 병원균으로 전 세계적으로 M.
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