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문제 정의
- 이와 같이 경옥고가 한방제제 중에서 중요한 위치를 차지하고 있으나, 중탕 방식에 의한 제조과정에 어려움이 있어 다양한 방식의 개선방안이 연구되었음에도 불구하고 획기적인 제조방식이 개발되지 않았다. 이에 저자는 히팅 맨틀이 중탕과 유사한 효과를 나타낼 수 있다는 점에 착안하여, 히팅 맨틀을 이용하여 제조시간이 단축되고 제조과정이 편리하게 되는 경옥고를 제조하였고, 이의 효능을 검증하고자 시중 유통 경옥고 (K0)와 인삼 경옥고 (K1), 히팅 맨틀로 제조한 인삼경옥고 (K1)와 인삼발효경옥고 (KF), 흑삼경옥고 (BK), 흑삼발효경옥고 (BKF)을 실험군으로 구분하여, DPPH 라디칼 소거능에 의한 항산화 활성, Raw 264.74 세포에 대한 항산화 및 항염효과를 살펴본 바 유의성 있는 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 이에 특별히 히팅 맨틀에 의한 제조방식이 중탕의 방식과 유사한 효과를 나타낼 수 있다는 점에 착안하여 제조시간이 단축되고 복잡한 제조과정을 개선하여 효율성 있는 히팅 맨틀을 이용한 가미 경옥고을 제조하여 항산화와 항염증작용의 효능을 검증하고자 하였다.
제안 방법
- DPPH free radical 소거능에 의한 항산화 활성 시험을 위하여 DPPH 16 mg을 100 mL 에탄올 용액에 용해하고 20초간 진탕한 후 517 ㎚에서 흡광도가 0.93∼0.97이 되도록 에탄올을 가하였다.
- 97이 되도록 에탄올을 가하였다. DPPH 용액 2 ㎖과 K0, K1, KF, BK, BKF 추출물 (0, 10, 50, 100, 200 ㎍/㎖) 각각 2 ㎖을 시험관에 취하고 vortex mixer로 5초간 진탕하여 517 ㎚ 에서 반응시간에 따른 K0, K1, KF, BK, BKF 추출물의 환원성을 측정하였다11). 양성 대조용 시료로서는 동일 농도로 제조한 ascorbic acid (0, 10, 50, 100, 200, 400 ㎍/㎖)를 사용하였다.
- LPS를 처리한 RAW 264.74 세포내의 ROS를 측정하기 위하여 24 well plate의 각 well에 5×105 cells씩 첨가하고, K0, K1, KF, BK, BKF 추출물 (각각 100 ㎍/㎖)을 처리한 후 세포를 37℃에서 24시간 배양하였다.
- LPS를 처리한 RAW 264.74 세포내의 염증 사이토카인을 측정하기 위하여 24 well plate의 각 well에 5×105 cells씩 분주하고, K0, K1, KF, BK, BKF 추출물 (각각 100 ㎍/㎖)을 처리한 후 세포를 37℃에서 6시간 동안 배양하였다.
- RAW 264.74 대식세포를 배양한 후 LPS로 자극하여 NO를 유발하였다. 그 후 NO 생산량을 ELISA로 측정한 결과, LPS를 처리하지 않은 정상군은 7.
- RAW 264.74세포를 37℃, 5% CO2 배양기에서 1시간 배양한 후 K0, K1, KF, BK, BKF 추출물 (최종 농도 10, 50, 100, 200, 400 ㎍/㎖)를 24시간, 48시간, 72시간 동안 처리하였다. 배양 종료 6시간 전에 EZ-Cytox 용액 10 ㎕씩 각 well에 가하고 실험 종료 시까지 배양하였으며 이 plate를 plate shaker에서 3.
- Raw 264.74 대식세포에서 추출된 total RNA 3 ㎍을 75℃에서 10분 동안 변성시킨 다음 이에 2.5 ㎖의 10 mM dNTPs mix, 1 mL random sequence hexanucleotides (25 pmole/ 25 ㎖), RNA inhibitor로서 1 ㎖ RNase inhibitor (20 U/㎖), 1 ㎖ 100 mM DTT, 4.5 ㎖ 5 × RT buffer (250 mM tris-HCl, pH 8.3, 375 mM KCl, 15 mM MgCl2)를 가한 후, 1 ㎖의 M-MLV RT (200 U/㎖)를 다시 가하고 DEPC 처리된 증류수로서 최종 부피가 20 ㎖가 되도록 하였다.
- Real-time quantitative PCR은 Applied Biosystems 7,500 Real-Time PCR system (Applied Biosystems, USA)을 이용하여 수행하였고 실험에 사용한 primer sequence는 Table 2와 같다.
- 배양이 종료된 후 DCFH- DA 50 µM을 처리하고 5분간 배양하고 2회 수세한 후 Flow cytometer로 세포내 형광 DCF (2’, 7’-dichlorofluorescein)또는 ROS를 FACS를 이용하여 측정하였다.
- 본 연구에서는 히팅 맨틀로 제조한 경옥고와 기존의 경옥고의 효능을 비교하였을 뿐아니라, 제조의 방법을 다양화하여 항산화 및 항염증 효능을 검증하였다. 실험 방법에는 DPPH 라디칼 소거능에 의한 항산화 활성 및 RAW 264.
- 본 연구에서는 히팅 맨틀로 제조한 경옥고와 기존의 경옥고의 효능을 비교하였을 뿐아니라, 제조의 방법을 다양화하여 항산화 및 항염증 효능을 검증하였다. 실험 방법에는 DPPH 라디칼 소거능에 의한 항산화 활성 및 RAW 264.74 세포주를 배양하여 세포에 미치는 항산화 및 항염작용를 사용하였으며 실험 결과를 고찰 분석하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
- Real time quantitative PCR의 조건은 pre-denaturation은 50 ℃에서 2 분간, 94 ℃에서 10 분간, 그리고 40 cycles을 95 ℃에서 15초간 및 60 ℃에서 1분간 수행하였다. 실험군과 대조군은 internal standard로 GAPDH를 사용하였다.
- 74 세포 (2×10⁶ cells/well)를 6-well cultureplate에 넣고 standard incubator conditions (37℃, 5% CO2 / 95% air environment)에서 24시간 배양한 다음, 상층액을 제거했다. 여기에 1 ㎍/㎖의 농도로 LPS를 처리하여 NO를 유발하였고, K0, K1, KF, BK, BKF 추출물 (각각 100 ㎍/㎖)을 포함한 DMEM 배지를 각 2 mL씩 넣고, 다시 24시간 배양한 후 상층액을 분리하였다. 이때, 양성대조군으로는 cyclosporin A (10 ㎍/㎖)를 사용하였다.
- 74 세포에 K0, K1, KF, BK, BKF 추출물을 농도별 (10, 50, 100, 200, 400 ㎍/㎖)로 처리하여 각각 24시간, 48시간, 72시간 배양한 결과, 대조군에 비하여 큰 세포독성이 나타나지 않았다. 이러한 결과들로 RAW 264.74 세포에서 K0, K1, KF, BK, BKF 추출물은 400 ㎍/㎖ 농도까지 세포독성이 없는 것으로 판단하여 항염증 실험을 진행하였다.
- 혼합된 시료는 히팅 맨틀에 스테인리스 용기 하부와 반응조상부 뚜껑을 부착하고 중앙에 냉각기 및 에에 캡을 설치하여 전탕과 농축이 편리하도록 하였다. K1과 BK 등은 히팅 맨틀 외부온도 90℃로 설정하여 끓어 넘치지 않는 정도로 약 18-22시간 가열하였고, 농축은 동일한 온도에서 반응조 상부캡을 모두 제거하여 약 1시간 40분 내외로 농축하였다.
대상 데이터
- 2의 mRNA 유전자 발현은 TaqMan probe (FAM dye-labeled, ABi, USA)를, internal standard를 마우스 GAPDH probe set; Endogenous Control (VIC® / MGB Probe, Probe limited) from Applied Biosystems (4352339E) 를 사용하였고, primer의 최종 농도가 200 nM이 되게 반응시켰다.
- IL-4 (R4000) ELISA kit는 R&D system (MN, USA)제품을, IL-13 (ab100766) ELISA kit는 AbCam (Cambridge, UK)제품을, 우태아혈청 (fetal bovine serum, FBS)은 Gibco (Paisley, UK)제품을, RNase inhibitor과 M-MLV RT는 Invitrogen (CA, USA) 제품을, RNAsolB는 Tel-Test (TX, USA) 제품을 사용하였다.
- K1과 BK 등은 히팅 맨틀 외부온도 90℃로 설정하여 끓어 넘치지 않는 정도로 약 18-22시간 가열하였고, 농축은 동일한 온도에서 반응조 상부캡을 모두 제거하여 약 1시간 40분 내외로 농축하였다. KF와BKF 등은 발효 후 K1과 BK 등과 같은 과정을 거쳐 제조되었는데, 발효는 올리고당 30g과 이스트 3g을 투입한 후 히팅맨틀 외부 온도 30℃에서 2시간 40분 반응시키는 과정을 통하여 시료 제조에 사용되었다.
- 실험에 사용된 人蔘, 白茯苓 등은 한약규격품을 대전대학교 본초학교실에서 감정한 후 분쇄하여 시료 제조에 사용하였으며 黑蔘은 금산지역에서 재배된 4년생 수삼을 생산자 증명이 확인된 금산인삼농협에서 구입한 후, 90 ℃에서 2시간 증숙 하는 과정을 9회 반복하여 제조하였다. 地黃은 금산지역에서 생산된 生地黃을 구입하였고 녹즙기 (Angelia 7700, Angel co., Busan, Korea)로 汁을 취하여 시료 제조에 사용하였다. 실험에 사용될 경옥고는 人蔘 50g, 白茯苓 100g, 地黃 600g, 꿀 300g 등의 비율로 혼합하여 제조하였고, 실험 시료에 따라 黑蔘으로 제조하는 경우, 발효과정을 거친 경우 등으로 구분하였으며, 실험 대조를 위하여 시중에서 중탕 방식으로 생산되어 유통 중인 경옥고를 구입하여 사용하였다 (Table.
- 마우스 대식세포주 (RAW 264.74)는 한국 세포주은행(Seoul National University, Seoul, Korea)에서 분양받아 사용하였다. 생쥐 대식세포주 (RAW 264.
- 본 실험에 사용된 시약은 2.2-diphenyl-1-picrylhydrezyl (DPPH), diethyl pyrocarbonate (DEPC), Naphthylethylene diamine dihydrochloride, Sulfonylamide, 2′, 7′-Dichlorofluorescin diacetate, Sodium Nitrite, chloroform, trichloroacetic acid, isopropanol, Tris-HCl, KCl, MgCl2, Dubecco's modified Eagle's medium (DMEM) 배양액, dulbecco's phosphate buffered saline (D-PBS), sulforhodamin B (SRB), 2-isopropanol, sodium dodecyl sulfate (SDS), Streptomycin은 Sigma Aldrich (MO, USA) 제품을 사용하였다.
- 74)는 한국 세포주은행(Seoul National University, Seoul, Korea)에서 분양받아 사용하였다. 생쥐 대식세포주 (RAW 264.74)를 10 % FBS과 1 % penicillin이 첨가된 DMEM 배지에서 37 ℃의 온도와 5 % CO2 조건이 유지되는 CO2 배양기 (Forma Sci, OH, USA)에서 배양하였다.
- 실험에 사용된 人蔘, 白茯苓 등은 한약규격품을 대전대학교 본초학교실에서 감정한 후 분쇄하여 시료 제조에 사용하였으며 黑蔘은 금산지역에서 재배된 4년생 수삼을 생산자 증명이 확인된 금산인삼농협에서 구입한 후, 90 ℃에서 2시간 증숙 하는 과정을 9회 반복하여 제조하였다. 地黃은 금산지역에서 생산된 生地黃을 구입하였고 녹즙기 (Angelia 7700, Angel co.
- , Busan, Korea)로 汁을 취하여 시료 제조에 사용하였다. 실험에 사용될 경옥고는 人蔘 50g, 白茯苓 100g, 地黃 600g, 꿀 300g 등의 비율로 혼합하여 제조하였고, 실험 시료에 따라 黑蔘으로 제조하는 경우, 발효과정을 거친 경우 등으로 구분하였으며, 실험 대조를 위하여 시중에서 중탕 방식으로 생산되어 유통 중인 경옥고를 구입하여 사용하였다 (Table.1).
- DPPH 용액 2 ㎖과 K0, K1, KF, BK, BKF 추출물 (0, 10, 50, 100, 200 ㎍/㎖) 각각 2 ㎖을 시험관에 취하고 vortex mixer로 5초간 진탕하여 517 ㎚ 에서 반응시간에 따른 K0, K1, KF, BK, BKF 추출물의 환원성을 측정하였다11). 양성 대조용 시료로서는 동일 농도로 제조한 ascorbic acid (0, 10, 50, 100, 200, 400 ㎍/㎖)를 사용하였다.
- 여기에 1 ㎍/㎖의 농도로 LPS를 처리하여 NO를 유발하였고, K0, K1, KF, BK, BKF 추출물 (각각 100 ㎍/㎖)을 포함한 DMEM 배지를 각 2 mL씩 넣고, 다시 24시간 배양한 후 상층액을 분리하였다. 이때, 양성대조군으로는 cyclosporin A (10 ㎍/㎖)를 사용하였다. NO 생성량을 측정하기 위한 시약인 Griess 시약은 용액 A (0.
데이터처리
- 모든 실험 결과의 통계처리는 SAS 통계 프로그램을 이용하여 분석하였으며, 그 결과는 평균값과 표준오차로 표시하고 통계적 유의성(p<0.05)은 ANOVA로 검증하였다.
성능/효과
- 1. DPPH 소거능에 의한 항산화 활성은 기존의 경옥고 보다히팅 맨틀로 제조한 경옥고가 더 높은 효능을 나타내었고,흑삼을 가미하고 발효하였을 때, 이보다 더 높은 항산화효능을 나타내었다.
- 2. RAW 264.74 세포에서 NO 생성량 측정 결과 또한 DPPH 라디칼 소거능 결과와 일치하게 기존의 경옥고보다 히팅 맨틀로 제조하였을 때 NO 생성량이 감소하였고 인삼과 흑삼을 가미하여 발효시킨 후 처리했을 때더 크게 NO 생산량이 감소하였다.
- 3. RAW 264.74 세포에서 ROS 생성량은 흑삼가미발효경옥고에서 양성 대조군과 유사한 수준으로 현저하게 감소되었다,
- 4. 염증 사이토카인 인자인 NOS-II, COX-2, IL-1β, IL-6, mRNA 유전자 분석 결과에서 기존의 경옥고와히팅 맨틀로 제조한 경옥고가 유전자 발현이 유사하게감소하였으나 유의성이 없었고, 흑삼가미발효경옥고는유의한 감소를 보여 뛰어난 항염증 효능을 나타내었다.
- Ascorbic acid 및 K0, K1, BK, KF, BKF 추출물의 농도별 (10, 50, 100, 200 ㎍/㎖) DPPH 라디칼 소거활성을 측정한 결과, 양성 대조군인 Ascorbic acid 처리군은 50 ㎍/㎖ 이상부터 100% 이상 (p<0.001)의 활성이 나타났고, K0와 K1의 전자공여능을 비교해보았을 때, 기존 경옥고인 K0보다 히팅 맨틀을 이용하여 제조한 경옥고인 K1이 50, 100, 200 ㎍/㎖에서 농도 의존적으로 유의성 있게 증가하였다 (p<0.001).
- COX-2 mRNA 유전자는 RAW264.74 세포보다도 LPS 처리군에서 4배 이상 증가하였고, 양성대조군인 CsA (10 ㎍/㎖)은 대조군 (LPS-CTL)에 비하여 3배 이상 COX-2 mRNA 유전자 발현이 감소하였다 (p<0.01).
- DPPH 라디칼 소거능을 이용한 항산화 활성 분석결과 BKF, BK, KF, K1 순으로 50, 100, 200 ㎍/㎖에서 농도 의존적으로 유의성있는 DPPH 라디칼 소거능을 나타내었다. 특히 흑삼가미발효경옥고가 유의성 있는 전자공여능을 나타냈으며, 이는 인삼을 발효하였을 때 항산화 활성이 증가한다는 도 등15)의 연구결과를 보았을 때, 흑삼가미 경옥고가 발효의 영향으로 항산화 효능이 증가된 것으로 사료된다.
- IL-1β mRNA 유전자 발현은 정상 RAW 264.74 세포에 비해 LPS 처리군이 6배 이상 증가하였고, 양성대조군인 CsA (10 ㎍/㎖은 대조군 (LPS-CTL)에 비하여 2배 이상 IL-1β mRNA 유전자 발현이 감소하였다 (p<0.01).
- IL-6 mRNA 유전자 발현은 정상 RAW264.74 세포보다도 LPS 처리군에서 IL-6가 5배 이상 증가하였고, 양성대조군인 CsA (10 ㎍/㎖)은 대조군 (LPS-CTL)에 비하여 4배 이상 유전자 발현이 감소하였다 (p<0.001).
- 74 세포 배양 후 LPS로 자극하여 ROS를 유발한 뒤, FACS를 이용하여 ROS 생산량를 측정한 결과, LPS를 처리하지 않은 정상군에 비하여 LPS를 처리한 대조군에서 유의성 있게 증가되었다. K0, K1 처리군에서 ROS 생성량은 모두 감소하였으나, 기존의 경옥고인 K0보다 히팅 맨틀을 사용하여 제조한 경옥고인 K1이 비교적 더 크게 감소한 것으로 나타났다 (Fig. 5A). 또한 경옥고 가미방인 BK, BKF, KF 모두 ROS 생성량이 대조군에 비하여 감소하였으며 그 중 흑삼가미발효 경옥고인 BKF가 가장 크게 감소한 것을 확인 할 수 있었다 (Fig.
- K0와 K1에서 TNF-a mRNA 유전자발현은 유의성이 없었고, 경옥고 가미방 처리군 모두에서 TNF-α mRNA 유전자발현은 감소하였으나 유의성은 나타나지 않았다 (Fig. 7).
- LPS를 처리한 RAW 264.74 대식세포에 경옥고 추출물을 적용하였을 때, 모든 군에서 유의성 있는 감소를 보였으며, 흑삼을 가미하여 발효시킨 경옥고인 BKF (p <0.001)군에서 가장 큰 감소를 나타내었다 (Fig. 2).
- RAW 264.74 세포 배양 후 LPS로 자극하여 ROS를 유발한 뒤, FACS를 이용하여 ROS 생산량를 측정한 결과, LPS를 처리하지 않은 정상군에 비하여 LPS를 처리한 대조군에서 유의성 있게 증가되었다. K0, K1 처리군에서 ROS 생성량은 모두 감소하였으나, 기존의 경옥고인 K0보다 히팅 맨틀을 사용하여 제조한 경옥고인 K1이 비교적 더 크게 감소한 것으로 나타났다 (Fig.
- 세포내에서 산화되어진 DCFH는 polyphenol을 처리 후 510㎚에서 FACScan (Becton Dickinson, Mountain View, CA)로 측정이 되어 진다22). RAW 264.74 세포를 LPS로 자극한 후 추출물을 처리하여 ROS 생성량을 분석한 결과, K0와 K1을 비교하였을 때 기존 경옥고인 K0처리군보다 히팅 맨틀로 제조한 경옥고인 K1 처리군에서 ROS가 감소하였으며, 가미 경옥고 중 BKF 처리군은 양성대조군인 CsA군 과 유사하게 ROS 생산량을 유의하게 감소시켰다. 항산화 활성 관련 실험 결과를 종합적으로 보았을 때, 기존 경옥고 보다 히팅 맨틀로 제조한 경옥고가 더 높은 항산화 활성을 가지는 것으로 확인되었으며, 가미 경옥고 중 흑삼기마발효경옥고가 가장 높은 항산화 활성을 보이는 것으로 나타났다.
- RAW 264.74 세포를 LPS로 자극한 후, 추출물을 처리하여 NO 생성량을 측정한 결과 기존 경옥고인 K0 보다 히팅 맨틀로 제조한 경옥고인 K1 처리군에서 NO 생성량이 감소하였고 가미경옥고 중에서는 BKF 처리군에서 가장 크게 감소한 것을 확인 할 수 있었다. 이는 흑삼이 NO 생성량을 감소시킨다는 기존의 연구 결과20)과 일치하며, 기존 경옥고보다 흑삼을 가미하거나 발효하였을 때 항산화 작용이 증가됨을 알 수 있다.
- TNF-α mRNA 유전자 발현을 분석한 결과, 정상 RAW 264.74 세포보다도 LPS 처리군에서 TNF-α가 3배 이상 증가하였고, 양성대조군인 CsA (10 ㎍/㎖)처리군은 대조군 (LPS- CTL)에 비하여 3배 이상 TNF-α mRNA 유전자 발현이 감소하였다 (p<0.05).
- 결과적으로 경옥고 각각은 항산화와 항염증 작용을 갖고 있으며 기존의 경옥고 보다 히팅 맨틀로 제조하였을 때 더 높은 효능을 나타내었다. 히팅 맨틀로 제조한 경옥고 중 특히 흑삼가미발효경옥고는 뛰어난 항산화 및 항염증 효능을 나타내어 천연 항염증 작용제로서 충분하다고 판단되어 질병의 예방 및 치료약물로 이용하고 제조의 편리성을 갖춘 경옥고 제조가 기대된다.
- 경옥고 처리군 K0와 K1에서 IL-1β mRNA 유전자 발현은 유의성이 없었고, 경옥고 가미방 처리군에서는 BK (p<0.05)가 가장 크게 감소하였고, BKF (p<0.01), KF (p<0.05) 순으로 유의성 있게 IL-1β mRNA 유전자 발현 감소를 확인하였다 (Fig. 6).
- 경옥고 처리군인 K0와 K1에서 COX-2 mRNA 유전자 발현은 감소하였으나 유의성이 없었고, 경옥고 가미방은 BK (p<0.01), BKF (p<0.01), KF (p<0.05) 순으로 유의성 있게 COX-2 mRNA유전자 발현이 감소하였다 (Fig. 5).
- 그 후 NO 생산량을 ELISA로 측정한 결과, LPS를 처리하지 않은 정상군은 7.2±0.42 µM이었고, LPS를 처리한 대조군은 72.3±5.84 µM로 정상군에 비해 약 10배 이상 증가되었다.
- 또한 K1, KF, BK, BKF (50, 100, 200 ㎍/㎖) 추출물은 농도 의존적으로 DPPH 라디칼 소거능이 유의성 있게 증가하였으며 (p<0.001), BKF가 가장 높은 DPPH 라디칼 소거능을 가지는 것을 알 수 있었다 (p<0.001)(Fig. 1).
- 5A). 또한 경옥고 가미방인 BK, BKF, KF 모두 ROS 생성량이 대조군에 비하여 감소하였으며 그 중 흑삼가미발효 경옥고인 BKF가 가장 크게 감소한 것을 확인 할 수 있었다 (Fig. 5B).
- 본 실험 결과를 종합하여 보면 기존의 유통되고 있는 경옥고인 K0 보다 히팅 맨틀로 제조한 경옥고인 K1은 높은 항산화 활성을 나타내는 것으로 확인되었으나 항염증 효능을 유사하게 나타났다. 또한 히팅 맨틀로 제조한 경옥고 중에서도 제조의 가열 방법보다는 재료 및 재료의 가공방법(흑삼, 발효 등)에서 효능의 차이가 발생하는 것으로 나타났다. 이에 흑삼을 가미한 경옥고나 발효를 한 경옥고가 항산화 효능 및 항염증작용이 증대하였음을 알 수 있었고 특히 흑삼가미발효경옥고의 항산화 효능 및 항염증작용이 증가되었음을 확인하였다.
- 본 실험 결과를 종합하여 보면 기존의 유통되고 있는 경옥고인 K0 보다 히팅 맨틀로 제조한 경옥고인 K1은 높은 항산화 활성을 나타내는 것으로 확인되었으나 항염증 효능을 유사하게 나타났다. 또한 히팅 맨틀로 제조한 경옥고 중에서도 제조의 가열 방법보다는 재료 및 재료의 가공방법(흑삼, 발효 등)에서 효능의 차이가 발생하는 것으로 나타났다.
- 본 실험에서는 LPS로 자극한 RAW 264.74 세포에 경옥고 추출물을 처리하여 염증 사이토카인 유전자 발현을 분석한 결과, 기존 연구결과와 일치하게 TNF-α 생성량은 유의성이 없었다.
- 염증성 사이토카인 유전자 발현 분석을 위해 정상 RAW 264.74 세포를 LPS로 활성화 시킨 후 Quantitative real time PCR을 사용하여 측정하였으며 그 결과 NOS-II mRNA는 LPS 처리군에서 3배 이상 증가하였고, 양성대조군인 CsA 10 ㎍/㎖ 처리군은 대조군 (LPS-CTL)에 비하여 2배 이상 NOS-II mRNA 유전자 발현이 감소하였다 (p<0.01).
- 또한 히팅 맨틀로 제조한 경옥고 중에서도 제조의 가열 방법보다는 재료 및 재료의 가공방법(흑삼, 발효 등)에서 효능의 차이가 발생하는 것으로 나타났다. 이에 흑삼을 가미한 경옥고나 발효를 한 경옥고가 항산화 효능 및 항염증작용이 증대하였음을 알 수 있었고 특히 흑삼가미발효경옥고의 항산화 효능 및 항염증작용이 증가되었음을 확인하였다.
- 74 세포를 LPS로 자극한 후 추출물을 처리하여 ROS 생성량을 분석한 결과, K0와 K1을 비교하였을 때 기존 경옥고인 K0처리군보다 히팅 맨틀로 제조한 경옥고인 K1 처리군에서 ROS가 감소하였으며, 가미 경옥고 중 BKF 처리군은 양성대조군인 CsA군 과 유사하게 ROS 생산량을 유의하게 감소시켰다. 항산화 활성 관련 실험 결과를 종합적으로 보았을 때, 기존 경옥고 보다 히팅 맨틀로 제조한 경옥고가 더 높은 항산화 활성을 가지는 것으로 확인되었으며, 가미 경옥고 중 흑삼기마발효경옥고가 가장 높은 항산화 활성을 보이는 것으로 나타났다.
후속연구
- 결과적으로 경옥고 각각은 항산화와 항염증 작용을 갖고 있으며 기존의 경옥고 보다 히팅 맨틀로 제조하였을 때 더 높은 효능을 나타내었다. 히팅 맨틀로 제조한 경옥고 중 특히 흑삼가미발효경옥고는 뛰어난 항산화 및 항염증 효능을 나타내어 천연 항염증 작용제로서 충분하다고 판단되어 질병의 예방 및 치료약물로 이용하고 제조의 편리성을 갖춘 경옥고 제조가 기대된다.
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