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문제 정의
- 미생물이 부착하는 기전과 미치는 영향에 대한 연구는 그동안 많이 진행되었으나, 시각적인 영상을 통한 담체들과 장내 유익균의 부착여부와 부착방식에 대한 연구가 더 필요한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 공초점 주사현미경(confocal laser scanning microscope, CLSM)을 활용하여 장내 유익균과 국산 통곡물 소재들과의 부착을 통해 생육 환경에 있어 도움이 될 수 있는 서식공간을 제공받는 것을 시각적으로 제시하고, 소재들의 프리바이오틱스 효과를 in vitro 배양을 통해 확인하여 통곡물 소재들로 제조된 프리바이오틱스 팽화식품을 개발하는 것을 목표로 한다.
- 본 연구에서는 공초점 주사현미경(CLSM)을 활용하여 장내 유익균과 국산 통곡물(whole grain) 소재들과의 부착을 통해 생육환경에 있어 도움이 될 수 있는 서식공간을 제공받는 것을 시각화하고, 소재들의 프리바이오틱스 효과를 in vitro 배양을 통해 확인하여 통곡물 소재들로 제조된 프리바이오틱스 팽화식품을 개발하는 것을 목표하였고, 그 결과 장 속에서 장내 유익균 균총을 향상시켜 인체의 건강증진에 유익한 팽화과자 제조에 필요한 기초 자료를 확보하였다. 선정곡물들의 일반성분 함량은 수분이 8.
제안 방법
- 5 mL를 접종한 후 37°C에서 24시간 동안 배양하였다. 24시간 배양 후 균 증식도를 spectrophotometer를 이용하여 650 nm에서 흡광도를 측정하였다.
- 그리고 조지방은 Soxhlet 추출법을 사용하여 분석하였다. 곡물 소재의 식이섬유 함량은 AOAC method를 응용하여 실험을 실시하였다. 시료 1 g에 MES/TRIS 완충용액(0.
- 곡물 추출물은 분쇄된 곡물분말에 10배의 증류수를 가한 후 55°C에서 24 시간 온수 추출하였다.
- 5 cm인 원형을 사용하였고, 운전조건은 예비실험을 통하여 가열온도 220~230°C에서 제조하였다. 곡물팽화과자의 기호도를 증진시키기 위해 10%의 치즈 맛 시즈닝(Dongbang Foodmaster Co., Ltd., Chungbuk, Korea)을 첨가하였고, 대조군으로 첨가하지 않은 100% 곡물팽화과자를 제조하였다(Table 1).
- thermophilus KCTC 3658, Bifidobacterium bifidum KCTC 3357 4종의 균주를 사용하였다. 균주의 생육배지로는 MRS broth(Difco, Detroit, MI, USA)를 사용하였고, B. bifidum 배양을 위한 배지로는 MRS broth에 L-cysteine을 0.05% 첨가한 배지를 사용하였다.
- 그 뒤 약 100 µm 두께의 슬라이스 글라스와 커버 글라스 사이 공간에 염색된 균과 곡물분말 혼합물을 분주하여 CLSM을 이용해 광학적 절편(optical sectioning)으로 연속적 영상을 재구성하여 관찰하였다.
- 수용성 식이섬유 함량은 앞서 90% ethanol과 acetone의 순으로 각각 15mL씩 2회 세척 전 얻은 여액에 90% ethanol 200 mL를 가하고(미리 중탕) 60°C에서 1시간 동안 정치하여 침전물을 형성하고, 105°C 수분건조로 항량을 구한 셀라이트를 넣은 유리 도가니에 다시 여과하여, 여과 후 남은 잔사를 90% ethanol과 acetone의 순으로 각각 15 mL로 2회 세척한 후 무게를 측정하였다. 그 뒤 잔사량에서 잔사의 회분량과 단백질량을 감하여 수용성 식이섬유 함량을 구하였다. 총 식이섬유 함량은 측정된 불용성 식이섬유 함량과 수용성 식이섬유 함량의 합을 구하여 분석하였다.
- 그 뒤 잔사는 70°C의 물 10 mL로 2회 씻은 후 세척액은 여액에 합쳤다(여과액+물세척용액 20 mL). 그 잔사를 다시 90% ethanol과 acetone의 순으로 각각 15 mL씩 2회 세척한 후 무게를 측정하고, 이 잔사량에서 잔사의 회분량과 단백질량을 감하여 불용성 식이섬유 함량을 구하였다. 수용성 식이섬유 함량은 앞서 90% ethanol과 acetone의 순으로 각각 15mL씩 2회 세척 전 얻은 여액에 90% ethanol 200 mL를 가하고(미리 중탕) 60°C에서 1시간 동안 정치하여 침전물을 형성하고, 105°C 수분건조로 항량을 구한 셀라이트를 넣은 유리 도가니에 다시 여과하여, 여과 후 남은 잔사를 90% ethanol과 acetone의 순으로 각각 15 mL로 2회 세척한 후 무게를 측정하였다.
- 동결건조 추출물은 분쇄된 곡물분말에 10배의 증류수를 가한 후 55°C에서 24시간 온수 추출하였다.
- acidophilus는 곳곳에 산재되어 있었지만 주변 유동액 층보다 상대적으로 곡물분말 주변에 부착되어 존재하였다. 또한, 균체들이 곡물분말 표면과 틈사이로 골고루 부착되어 있는지 확인하기 위해 광학적 절편 이미지를 통해 초점거리에 따른 균주의 위치를 확인하였다(Fig. 2). 관찰 결과 초점거리에 따라 발현되는 염색된 박테리아 intensity의 강도와 위치가 변하는 것을 관찰할 수 있었고, 이는 균주가 곡물분말 표면상에만 부착되어 있는 것이 아니라 입체적으로 곡물의 틈 사이와 안쪽에도 부착되어 존재하는 것으로 확인하였는데, 이는 Jang 등(37)이 조직 등 담체의 주름진 틈 사이에 안쪽으로 들어가 부착되거나 수분에 의해 포집되어 존재한다고 보고한 것과 유사한 결과를 보였다.
- 생균수는 배양액을 0.85% NaCl(Junsei Chemical Co., Ltd., Tokyo, Japan) 용액을 이용해 십진법으로 희석 후 MRS agar(Difco) 배지에 평판도말법으로 접종한 뒤 37°C 배양기에 배양되어 나오는 집락수로 측정하였으며, 유효 집락수는 30~300개로 하여 계산하였다.
- 선정곡물 소재별 장내 유익균에 대해 미치는 영향을 비교하기 위해 MRS broth에서 37°C, 24시간 동안 배양 후 2회계대한 균주를 사용하여, 멸균된 MRS broth 8.5 mL와 농도가 50 mg/mL인 곡물 소재 동결건조 추출물 1.0 mL를 가하여 균 농도를 650 nm에서 흡광도가 0.3~0.4가 되게 한 시험균액 0.5 mL를 접종한 후 37°C에서 24시간 동안 배양하였다.
- 선정곡물 소재의 장내 유익균에 대한 생육 활성에 미치는 영향을 검증하기 위해 MRS broth에서 37°C, 24시간 동안 배양 후 2회 계대한 균주를 사용하여, 멸균된 4.5 mL MRS broth에 각각의 멸균된 곡물 추출물 4.5 mL를 혼합하고 1:1로 만든 배지에 시험균액을 멸균식염수로 균 현탁액을 만들어 균 농도를 650 nm에서 흡광도가 0.3~0.4가 되게 한 시험균액 1.0 mL를 접종하였다.
- 선정곡물 소재의 장내 유익균에 대한 생육 활성에 미치는 영향을 검증하기 위해 MRS broth에서 37°C, 24시간 동안 배양 후 2회 계대한 균주를 사용하여, 멸균된 4.5 mL MRS broth에 동일비율로 혼합된 6종의 곡물 추출물 4.5 mL를 혼합하여 1:1로 만든 배지에 시험균액을 멸균식염수로 균 현탁액을 만들어 균 농도를 650 nm에서 흡광도가 0.3~0.4가 되게 한 시험균액 1.0 mL를 접종한 다음 37°C에서 24시간 동안 배양하였다.
- 17 g)(30), 건강을 위해서는 하루 5~25 g의 수용성 식이섬유 섭취를 권장하였다(31, 32). 식이섬유 함량은 불용성 식이섬유와 수용성 식이섬유의 함량을 구한 후 합으로 총 식이섬유 함량을 분석하였다. 선정곡물별 식이섬유 함량은 불용성 식이섬유가 3.
- 이를 pH 6.5로 조정 후 거름종이(No. 3, Whatman International Ltd.)를 이용하여 1차로 감압여과 하고, 여과 된 추출물을 회전감압농축기(Rotavapor R-215, BUCHI, Flawil, Switzerland)로 감압농축 하였고, -85°C의 deep freezer(Ultra-low temperature freezer, MDF-192, Sanyo Electric Biomedical Co., Ltd., Osaka, Japan)에 2시간 동안 예비 동결시킨 후 freeze dryer(Model FD5508, Ilshin Lab Co., Gyeonggi, Korea)를 사용하여 동결건조 하여 사용하였다.
- 조직감은 texture analyser(TA.XT Express Texture Analyser, Stable Micro Systems, Godalming, UK)로 3-Point Bending Rig(HDP/3PB)를 사용하여 sample size 5×5×1.0 cm, pre-test speed 2.0 mm/s, test speed 3.0 mm/s, posttest speed 10.0 mm/s, distance 100%, force 100 g의 조건으로 시료당 10회 이상 측정하였다.
- 조회분은 직접건식회화법을 이용하여 시료 3 g을 회화기에서 550°C로 완전 회화시켜 구하였다.
- 그 뒤 잔사량에서 잔사의 회분량과 단백질량을 감하여 수용성 식이섬유 함량을 구하였다. 총 식이섬유 함량은 측정된 불용성 식이섬유 함량과 수용성 식이섬유 함량의 합을 구하여 분석하였다.
- 팽화식품 제조 시 배합에 사용될 6종 혼합곡물의 장내 유익균 활성 효과를 검증하기 위해 동일비율로 혼합한 6종의 혼합곡물 열수 추출물과 1:1로 MRS와 배합하여 생균수를 측정한 후 control 대비 균체 증가량을 알아보고 Table 4에 나타내었다. 실험 결과 24시간 배양 시 L.
- 0 mL를 접종하였다. 호기/혐기조건에서 배양하면서 시간에 따라 균 증식도를 spectrophotometer(UV-1650PC, Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan)를 이용하여 650 nm에서 흡광도를 측정하였다.
- 그 뒤 약 100 µm 두께의 슬라이스 글라스와 커버 글라스 사이 공간에 염색된 균과 곡물분말 혼합물을 분주하여 CLSM을 이용해 광학적 절편(optical sectioning)으로 연속적 영상을 재구성하여 관찰하였다. 혼합물 속 곡물분말을 확인하기 위해 CLSM에 내장된 DIC(differential interference contrast) 필터를 사용하여 관찰하였다.
대상 데이터
- lactis KCTC 3636, Streptococcus salivarius subsp. thermophilus KCTC 3658, Bifidobacterium bifidum KCTC 3357 4종의 균주를 사용하였다. 균주의 생육배지로는 MRS broth(Difco, Detroit, MI, USA)를 사용하였고, B.
- 균주배양 및 부착성 확인을 위한 사용 곡물로는 청주시 농협 하나로마트에서 구입한 햇뜰내 제품(2015년) 중 귀리(oat), 율무(adlay), 찰기장(glutinous millet), 찰보리(glutinous barley), 찰수수(glutinous sorghum), 현미(brown rice) 6종을 구매하여 진행하였다. 곡물은 분쇄기(DA10000G, Hanil, Seoul, Korea)를 사용하여 100 mesh size 이하의 분말을 취하여 실험에 이용하였다. 곡물 추출물은 분쇄된 곡물분말에 10배의 증류수를 가한 후 55°C에서 24 시간 온수 추출하였다.
- 곡물을 분쇄기로 분쇄하여 체로 100 mesh size 이하의 분말을 걸려 사용하였다.
- 균주배양 및 부착성 확인을 위한 사용 곡물로는 청주시 농협 하나로마트에서 구입한 햇뜰내 제품(2015년) 중 귀리(oat), 율무(adlay), 찰기장(glutinous millet), 찰보리(glutinous barley), 찰수수(glutinous sorghum), 현미(brown rice) 6종을 구매하여 진행하였다. 곡물은 분쇄기(DA10000G, Hanil, Seoul, Korea)를 사용하여 100 mesh size 이하의 분말을 취하여 실험에 이용하였다.
- 본 연구에서 사용한 시약으로는 식이섬유 함량 측정을 위해 MES/TRIS 완충용액(Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA), total dietary fiber assay kit(Megazyme, Bray, Ireland)을 사용하였다. 장내 유익균과 곡물의 부착성 확인을 위한 실험에 이용된 형광현미경은 공초점 주사현미경(LSM 710, Kr/Ar Ion Laser, Zeiss, Jena, Germany)을 사용하였고, 균체염색을 위한 염색 시약으로는 0.
- 장내 유익균과 곡물시료 간의 부착성을 확인하기 위해 균주로는 L. acidophilus KCTC 3164와 선정곡물 소재의 분말을 동일비율로 혼합하여 실험에 이용하였다. L.
- Louis, MO, USA), total dietary fiber assay kit(Megazyme, Bray, Ireland)을 사용하였다. 장내 유익균과 곡물의 부착성 확인을 위한 실험에 이용된 형광현미경은 공초점 주사현미경(LSM 710, Kr/Ar Ion Laser, Zeiss, Jena, Germany)을 사용하였고, 균체염색을 위한 염색 시약으로는 0.03% Fluorescein isothiocyanate(FITC, Sigma-Aldrich Co.)를 사용하였다.
- 팽화성형기는 즉석팽화기(DDP-1, Delice Co., Ltd., Seongnam, Korea)를 사용하였으며, 팽화판으로 직경이 4.5 cm인 원형을 사용하였고, 운전조건은 예비실험을 통하여 가열온도 220~230°C에서 제조하였다.
데이터처리
- Different letters (a-e) above the bars mean significantly different (P<0.05) according to Duncan’s multiple range test.
- 05 수준으로 검증하였다. 실험 결과 값은 3반복 이상의 데이터를 사용하여 표준편차 값으로 표현하였다.
- 통계 분석은 SAS program(Statistical Analysis System 9.4 version, SAS Institute Inc., Cary, NC, USA)을 이용하였으며, ANOVA 분석과 Duncan’s multiple range test를 실시하여 유의수준 P<0.05 수준으로 검증하였다.
이론/모형
- 곡물 소재시료 6종의 일반성분은 AOAC method(28)를 참고하여 수행하였다. 수분 함량은 곡물분말 3 g을 칭량하여 105°C에서 상압가열건조법으로 건조시킨 후 5회 반복 측정한 다음, 평균값으로 나타내었다.
- 조단백질은 시료 1 g에 대하여 Micro-Kjeldahl 질소정량법으로 측정하였다. 그리고 조지방은 Soxhlet 추출법을 사용하여 분석하였다. 곡물 소재의 식이섬유 함량은 AOAC method를 응용하여 실험을 실시하였다.
- 조회분은 직접건식회화법을 이용하여 시료 3 g을 회화기에서 550°C로 완전 회화시켜 구하였다. 조단백질은 시료 1 g에 대하여 Micro-Kjeldahl 질소정량법으로 측정하였다. 그리고 조지방은 Soxhlet 추출법을 사용하여 분석하였다.
성능/효과
- thermophilus에서는 찰보리와 찰수수에서 가장 높은 증진 효과를 보였다. B. bifidum에서는 찰보리와 찰기장에서 높은 증진 효과를 보였으며, 다른 곡물 모두 유의한 장내 유익균 생육증진 효과를 보이는 것을 확인하였다. 결론적으로 선정 곡물 소재 6종을 모두 활용하여 고 식이섬유를 함유하면서 장내 유익균 생육을 증진시킬 수 있는 팽화식품 소재로 사용할 수 있다고 판단된다.
- 3과 같다. L. acidophilus에서는 찰보리 추출물에서 가장 높은 흡광도 값을 보였고, 전반적으로 모든 추출물에서 control 값에 비해 일정수준의 높은 수치를 보였다. L.
- delbrueckii subsp. lactis에서 또한 24시간 이후 모든 추출물에서 control 값보다 다소 높은 생육효과를 보였고, 귀리 추출물에서 가장 높은 효과를 보였다. S.
- salivarius subsp. thermophilus는 1.66배 이상, B. bifidum는 1.47배가량 상승한 것으로 분석되었다. 제조된 팽화과자의 색도 측정결과 L값은 치즈맛의 시즈닝 첨가군이 대조군보다 높게 나왔다.
- Bifidobacterium bifidum은 12시간 이후 흡광도 값은 일정하게 유지되었다. 곡물 소재 동결건조 추출물 간의 장내 유익균 활성 정도를 비교한 실험 결과 L. acidophilus에서는 찰보리와 율무에서 가장 높은 생육증진 효과를 보였고 현미를 제외한 다른 곡물 모두 유의한 증진 효과를 보였다. L.
- 36%로 확인되었다. 곡물분말의 프리바이오틱스 부착 여부를 CLSM으로 관찰한 결과 곡물분말과 혼합된 Lactobacillus acidophilus는 곳곳에 산재되어 있었지만, 주변 유동액 층보다 상대적으로 곡물분말 주변에 부착되어 존재하였다. 선정곡물들의 장내 유익균의 증진에 활성 효과가 있음을 검증한 결과 L.
- 2). 관찰 결과 초점거리에 따라 발현되는 염색된 박테리아 intensity의 강도와 위치가 변하는 것을 관찰할 수 있었고, 이는 균주가 곡물분말 표면상에만 부착되어 있는 것이 아니라 입체적으로 곡물의 틈 사이와 안쪽에도 부착되어 존재하는 것으로 확인하였는데, 이는 Jang 등(37)이 조직 등 담체의 주름진 틈 사이에 안쪽으로 들어가 부착되거나 수분에 의해 포집되어 존재한다고 보고한 것과 유사한 결과를 보였다. 종합적으로 L.
- thermophilus에서는 찰보리와 찰수수에서 가장 높은 증진 효과를 보였다. 그리고 B. bifidum에서는 찰보리와 찰기장에서 높은 증진 효과를 보였다. 팽화식품 제조 시 배합에 사용될 6종의 혼합곡물의 장내 유익균 활성 효과를 알아본 결과, 24시간 배양 시 L.
- 황색도를 나타내는 b값은 두 제품에서 크게 유의한 차이를 보이진 않았다. 두 제품 간에 색도의 차이는 치즈맛 시즈닝의 색에 기인하는 것으로 보여 첨가군에 포함된 시즈닝의 배합 비만으로도 섭취 시 시각적인 맛의 차이가 있음을 확인할 수 있을 것으로 생각한다.
- 36%로 확인되었다. 불용성 식이섬유 함량은 귀리가 18.62%로 가장 높았고, 수용성 식이섬유 함량은 3.13%로 찰보리가 가장 높게 확인되었으며, 이 둘을 합친 총 식이섬유 함량은 귀리가 21.36%로 다른 곡물에 비해 높은 식이섬유 함량을 가진 것으로 분석되었다. 귀리의 식이섬유 중 하나인 베타글루칸은 대표적인 프리바이오틱스로 귀리 배유 세포벽 안쪽에 자리 잡고 있기 때문에(33), 귀리에 함유된 고 식이섬유를 이용하기 위해서는 도정과정 없이 통곡물을 사용한다면 다량의 귀리 속 베타글루칸과 같은 프리바이오틱스 식이섬유를 식품성분으로 효율적으로 이용할 수 있다.
- 본 연구에서는 공초점 주사현미경(CLSM)을 활용하여 장내 유익균과 국산 통곡물(whole grain) 소재들과의 부착을 통해 생육환경에 있어 도움이 될 수 있는 서식공간을 제공받는 것을 시각화하고, 소재들의 프리바이오틱스 효과를 in vitro 배양을 통해 확인하여 통곡물 소재들로 제조된 프리바이오틱스 팽화식품을 개발하는 것을 목표하였고, 그 결과 장 속에서 장내 유익균 균총을 향상시켜 인체의 건강증진에 유익한 팽화과자 제조에 필요한 기초 자료를 확보하였다. 선정곡물들의 일반성분 함량은 수분이 8.99~12.19%, 조회분 1.34~2.39%, 조단백질 7.34~15.38%, 조지방 1.84~8.12%로 함량이 분석되었고, 불용성 식이섬유 3.08~18.62%, 수용성 식이섬유 0.10~3.13%, 그리고 총 식이섬유 함량 5.26~21.36%로 확인되었다. 곡물분말의 프리바이오틱스 부착 여부를 CLSM으로 관찰한 결과 곡물분말과 혼합된 Lactobacillus acidophilus는 곳곳에 산재되어 있었지만, 주변 유동액 층보다 상대적으로 곡물분말 주변에 부착되어 존재하였다.
- 곡물분말의 프리바이오틱스 부착 여부를 CLSM으로 관찰한 결과 곡물분말과 혼합된 Lactobacillus acidophilus는 곳곳에 산재되어 있었지만, 주변 유동액 층보다 상대적으로 곡물분말 주변에 부착되어 존재하였다. 선정곡물들의 장내 유익균의 증진에 활성 효과가 있음을 검증한 결과 L. acidophilus에서는 찰보리 추출물에서 가장 높은 흡광도 값을 보였다. Lactobacillus delbrueckii subsp.
- 식이섬유 함량은 불용성 식이섬유와 수용성 식이섬유의 함량을 구한 후 합으로 총 식이섬유 함량을 분석하였다. 선정곡물별 식이섬유 함량은 불용성 식이섬유가 3.08~18.62%, 수용성 식이섬유는 0.10~3.13%, 그리고 총 식이섬유 함량은 5.26~21.36%로 확인되었다. 불용성 식이섬유 함량은 귀리가 18.
- bifidum은 12시간까지 흡광도 값이 증가하였지만, 그 이후 흡광도 값은 일정하게 유지되는 경향을 보였다. 선정된 6종 곡물분말 추출물이 장내 유익균에 증식에 유의한 영향을 미치는 것으로 볼 때 선정곡물들 속에는 장내 유익균의 생육증진에 필요한 성분들이 존재한다는 것을 확인하였다.
- 4에 나타내었다. 실험 결과 L. acidophilus에서는 찰보리와 율무에서 가장 높은 생육증진 효과를 보였고 현미를 제외한 다른 곡물 모두 유의한 증진 효과를 보였다. L.
- 39%로 현미를 제외한 나머지 곡물들은 비슷한 함량을 나타냈다. 조단백질 함량은 7.34~15.38%로 나왔으며, 율무에서 가장 높은 15.38%의 함량을 보였고 현미에서 가장 낮은 7.34%의 함량을 가진 것으로 분석되었다. Hwang 등(29)의 연구에 따르면 율무의 조단백질 함량은 15.
- 2%로 본 실험과 매우 유사한 것으로 분석되었다. 조지방은 1.84~8.12%로 귀리에서 가장 높은 8.12%의 함량을 보였고, 찰보리와 현미는 각각 1.84%, 2.06%로 함량이 분석되었다. 선정된 곡물들의 식이섬유 함량을 분석하여 Table 3에 나타내었다.
- 관찰 결과 초점거리에 따라 발현되는 염색된 박테리아 intensity의 강도와 위치가 변하는 것을 관찰할 수 있었고, 이는 균주가 곡물분말 표면상에만 부착되어 있는 것이 아니라 입체적으로 곡물의 틈 사이와 안쪽에도 부착되어 존재하는 것으로 확인하였는데, 이는 Jang 등(37)이 조직 등 담체의 주름진 틈 사이에 안쪽으로 들어가 부착되거나 수분에 의해 포집되어 존재한다고 보고한 것과 유사한 결과를 보였다. 종합적으로 L. acidophilus와 곡물분말 혼합 시 CLSM을 통해 부착능을 확인하였고, 이는 장내에서 장내 유익균주들이 곡물분말과의 부착을 통해 서식공간을 제공받아 균총 형성에 유리한 환경을 제공받을 수 있을 것이라 생각된다.
- 팽화과자의 경도는 첨가군이 대조군보다 높았고, 바삭거림은 첨가군이 대조군보다 약한 것으로 확인되었다.
후속연구
- bifidum에서는 찰보리와 찰기장에서 높은 증진 효과를 보였으며, 다른 곡물 모두 유의한 장내 유익균 생육증진 효과를 보이는 것을 확인하였다. 결론적으로 선정 곡물 소재 6종을 모두 활용하여 고 식이섬유를 함유하면서 장내 유익균 생육을 증진시킬 수 있는 팽화식품 소재로 사용할 수 있다고 판단된다.
- 47배가량 상승한 것으로 분석되었다. 결론적으로 팽화식품 제조 시 프리바이오틱스 소재로서 혼합곡물은 충분히 이용 가능할 것으로 생각된다.
- 곡물팽화과자의 경도 및 조직감은 첨가재료의 배합에 따라 영향을 받는 것 이외에 온도와 시간, 수분 함량, 방법 등에 따라 복합적으로 영향을 미치기 때문에 조직감 향상을 위해서는 다양한 실험이 더 필요할 것으로 보인다.
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