[논문]발아녹미와 노루궁뎅이 버섯 균사체를 이용한 생물전환 약용 신소재의 항산화 활성 및 NO 생성 억제 효능

이영민; 김인숙; 미툰 고쉬; 홍성민; 이택환; 이동희; 임병우

doi:10.7783/kjmcs.2017.25.5.305

[국내논문] 발아녹미와 노루궁뎅이 버섯 균사체를 이용한 생물전환 약용 신소재의 항산화 활성 및 NO 생성 억제 효능
Antioxidant Activity and NO Inhibitory Effect of Bioconverted Medicinal Material Using Germinated Green Rice and Hericium erinaceus Mycelium 원문보기

韓國藥用作物學會誌 = Korean journal of medicinal crop science, v.25 no.5, 2017년, pp.305 - 314

이영민 (건국대학교 의생명화학전공) , 김인숙 (건국대학교 의생명화학전공) , 미툰 고쉬 (건국대학교 의생명화학전공) , 홍성민 (건국대학교 의생명화학전공) , 이택환 (안국건강연구소) , 이동희 ((재)경북바이오산업연구원) , 임병우 (건국대학교 의생명화학전공)

Abstract ▼ AI-Helper

Background: Hericium erinaceus is considered a functional food and potential medicinal source. The present study was conducted to examine the potential antioxidant and anti-inflammatory activities of carried out with water and ethanol extracts of Hericium erinaceus grown on germinated green rice (HEGR-W and HEGR-E, respectively) and the water and ethanol extracts of germinated green rice (GR-W and GR-E, respectively) as potential medicinal resources or antioxidant and anti-inflammatory agents. Methods and Results: The total phenolic and flavonoid contents, DPPH, and ABTS activity, reducing power, DNA protective activity, cell viability, and NO production were investigated. The total phenolic and flavonoid contents were highest in HEGR-E ($66.53{\pm}2.40 mg{\cdot}GAE/100g$ and $82.12{\pm}7.10mg{\cdot}CE/100g$ respectively). HEGR-E exhibited high DPPH ($44.70{\pm}1.28%$) and, ABTS ($44.70{\pm}1.28%$) activity and reducing power (0.219). HEGR and GR extracts showed protective activity against DNA damage. The cytotoxicity of HEGR and GR in RAW264.7 cells and LPS-induced RAW264.7 cells was low. HEGR-E and GR-W exhibited anti-inflammatory effects through a 28% inhibition of NO production in LPS-induced RAW264.7 cells. Conclusions: These results suggested that the extracts of Hericium erinaceus grown on germinated green rice could be a potential medicinal material with natural antioxidant and NO inhibitory properties.

Keyword

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

따라서 본 연구에서는 기능성 식품으로 관심이 높은 유색미 중에서 우리 고유의 토종 쌀인 발아 녹미와 노루버섯 균사체를 이용하여 배양한 발아녹미 노루궁뎅이 버섯의 열수 추출물 및 70% 에탄올 추출물의 항산화 및 NO 억제 효능을 평가하여 생물전환 약용 신소재로서의 기능성을 제시하고자 수행하였다.
본 연구에서는 생물전환을 통하여 약용 신소재를 개발하기 위하여 발아녹미 (GR)에 노루궁뎅이 버섯 (HE) 균사체를 처리하여 배양한 발아녹미 노루궁뎅이 버섯을 70% 에탄올과 열수로 추출한 HEGR 추출물의 항산화 및 항염증 효과를 GR추출물과 비교 평가하였다.

제안 방법

발아녹미 노루궁뎅이 버섯 (Hericium erinaceus) 열수 추출물 (HEGR-W)과 70% 에탄올 추출 (HEGR-E) 및 발아녹미 열수 추출물 (HR-W)과 70% 에탄올 추출물 (HR-E)은 다음과 같이 제조하였다.
노루궁뎅이 버섯 균사체를 Φ8 cork borer로 조각을 내어 potato dextrose broth로 제조한 액체배지 300 ㎖에 5 - 6 조각을 접종하여 진탕 배양기에서 24℃ 에서 6 주 배양 하였다. 액체 배양한 노루궁뎅이 버섯 균사체를 균질화 하여 물을 첨가하여 autoclave 한 발아녹미에 1/10 비율로 첨가한 후, 25℃, 습도 70% 배양기에서 4 주간 배양 하였다. 발효된 발아녹미 노루궁뎅이 버섯을 발아녹미와 함께 회수하여 열풍건조기에서 2 - 3 일간 건조 시켰다.
시료 추출물과 standard인 ascorbic acid을 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 ㎎/㎖로 용해한 용액 0.2 ㎖와 ABTS 용액 0.8 ㎖을 가하여 혼합 한 후, 5 분간 실온에서 정치한 후, ELISA reader (16039400, Tecan, Männedorf, Switzerland)를 이용해 734 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.
96 well plate에 농도별로 제작한 시료 및 standard를 80 ㎕씩 3번 분주한 후, 0.2 mM 농도의 DPPH를 80 ㎕씩 추가로 분주하여 foil로 감싸준 뒤 실온에서 30 분간 방치한 후, ELISA reader (16039400, Tecan, Männedorf, Switzerland)를 이용해 517 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.
호일을 씌워서 30 분간 반응을 시킨 후 ELISA reader (16039400, Tecan, Männedorf, Switzerland)를 이용해 700 ㎚에서 흡광도를 측정하여 표준곡선을 이용해 함량 값을 구하였다
건조된 시료무게의 20 배의 증류수를 첨가하여 환류추출기(C-WB6, Changshin Science, Seoul, Korea)를 사용하여 85℃, 2 시간씩 3 회 반복 열수 추출 및 70% 에탄올 추출을 진행하였다. 발아녹미 열수 추출과 발아녹미 70% 에탄올 추출도 동일한 방법으로 추출하였다.
건조된 시료무게의 20 배의 증류수를 첨가하여 환류추출기(C-WB6, Changshin Science, Seoul, Korea)를 사용하여 85℃, 2 시간씩 3 회 반복 열수 추출 및 70% 에탄올 추출을 진행하였다. 발아녹미 열수 추출과 발아녹미 70% 에탄올 추출도 동일한 방법으로 추출하였다. 얻어진 추출액을 여과하고 rotary evaporator (RV10D, IKA, Staufen, Germany)로 농축한 후 동결 건조하여 분말 형태로 –20℃에 보관하여 사용하였다
총 플라보노이드 화합물 함량의 측정은 Nieva 등 (2000)의 방법으로 측정하였다. Standard인 catechin (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA)를 농도 별로 희석하여 표준곡선을 구했다 (y = 0.0017x + 0.0403, R²= 0.9908). 시료 추출물을 25 ㎕을 분주 한 후 125 ㎕의 증류수로 희석한다.
그 후 10% aluminum chloride 15 ㎕를 넣고, 6 분간 반응 후 1 M NaOH 50 ㎕와 27 ㎕의 증류수를 첨가하여 혼합한 후 ELISA reader (16039400, Tecan, Männedorf, Switzerland)를 이용해 510 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 그 후, 표준곡선을 이용하여 총 플라보노이드 함량 값을 측정하였다.
DPPH radical scavenging activity는 Blois (1958)의 실험방법을 변형하여 진행하였다. Standard인 BHT 용액(butylated hydroxytoluene)은 메탄올로 희석하여 농도별로 (0.
DPPH radical scavenging activity는 Blois (1958)의 실험방법을 변형하여 진행하였다. Standard인 BHT 용액(butylated hydroxytoluene)은 메탄올로 희석하여 농도별로 (0.25, 0.5,1.0, 2.0, 4.0 ㎎/㎖) 제조하고, 시료 추출물도 증류수 및 에탄올 70%를 이용하여 농도별로 각각 1 ㎖씩 제조하였다. 96 well plate에 농도별로 제작한 시료 및 standard를 80 ㎕씩 3번 분주한 후, 0.
ABTS 라디칼 소거능은 Jeong 등 (2015)의 방법을 변형하여 측정하였다. 증류수에 용해한 7 mM의 ABTS와 2.
Dutta 등 (2012)의 실험 방법을 인용하여 환원력 측정 실험을 진행하였다. 시료 추출물과 standard인 ascorbic acid를 각각의 농도 0.25, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 ㎎/㎖ 으로 제작하였다. Control로 증류수를 준비하였고, e-tube에 각각 500 ㎕씩 분주하고 0.
0 ㎎/㎖ 으로 제작하였다. Control로 증류수를 준비하였고, e-tube에 각각 500 ㎕씩 분주하고 0.2 M PBS (pH 6.6)를 각 e-tube에 500 ㎕ 씩,potassium ferricyanide 10 ㎎/㎖ 500 ㎕를 분주 한 뒤, 50℃ water bath (HB10D, IKA, Staufen, Germany)에서 20 분간 반응 시킨 후, 새로운 e-tube에 1 ㎖씩 옮겨준 뒤, 100 ㎎/㎖ TCA 500 ㎕씩 분주 하였다. 원심분리기 (368826, Beckman Coulter Inc.
활성산소에 의한 DNA 손상의 보호능 측정은 Tian와 Hua(2005)의 실험방법을 이용하여 진행하였다. Plasmid pBR DNA (0.5 ㎍/㎖) 1 ㎕ 에 FeSO₄ (0.08 mM) 3 ㎕, 증류수 3 ㎕, 30% H₂O₂ (v/v) 4 ㎕, 그리고 농도별로 희석한 시료 추출물을 2 ㎕씩 첨가하였다. 이 혼합물을 37℃ water bath(HB10D, IKA, Staufen, Germany)에서 1 시간 동안 반응 시켰다.
배지를 제거한 후, 각 well에 150 ㎕의 DMSO를 첨가하여 생성된 formazan 결정을 용해시켜 ELISA reader(16039400, Tecan, Männedorf, Switzerland)를 이용해 570 ㎚에서 흡광도를 측정하여 세포 생존율을 산출하였다.
그 다음 ELISA reader (16039400,Tecan, Männedorf, Switzerland)를 이용해 540 ㎚에서 흡광도를 측정하여 NO 발생량을 측정하였다.
산화스트레스 상태에서 superoxide anion (O₂^-), hydrogen peroxide (H₂O₂), hydroxyl radical(•OH) 같은 고농도의 ROS 는 생체 분자에 손상을 일으켜 결국 지방 과산화, 단백질 산화, DNA 손상 등을 야기한다(Rhee, 2006). DNA 손상 억제 활성은 FeCl₂ (ferric chloride)로 인한 산화적 스트레스와 FeSO₄ (ferrous sulfate)와 H₂O₂의 Fenton 반응에 의한 산화적 스트레스를 이용하여 시료의 DNA 손상 억제 활성을 평가하였으며 자유 라디칼로 유도된 pBR322 plasmid DNA 손상은 in vitro plasmid DNA breaks system을 통하여 평가하였다.
MTT를 이용하여 GR와 HEGR 추출물이 세포 생존율에 대한 효과를 측정하였다 (Fig. 4). HEGR-W 및 HRGR-E 추출물을 10 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖를 RAW264.
또한 MTT assay를 이용하여 HEGR 및 GR 추출물이 LPS (1 ㎍/㎖)로 유도된 RAW264.7 cell에서 세포 독성을 나타내는지 확인하기 위하여 세포생존율을 측정하였다 (Fig. 5). 1 ㎍/㎖ LPS로 처리한 RAW264.
, 2014). 따라서 LPS로 유도된 RAW264.7 cell에서 생산하는 NO 생성억제 효과를 측정하기 위하여 각 추출물을 처리한 후 시료의 NO 생성 억제 효과를 평가하였다.

대상 데이터

Folin-Ciocalteau's phenol reagent, gallic acid, (+)-catechin, sodium nitrite, 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH), 2,2'-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS), potassium persulfate, tyrosinase, ferrozine, potassium ferricyanide, sodium carbonate 등은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였고, 1-(4,5-methylthiazol-2-yl)-3,5-diphenyl formazan(MTT), 5,5'-dimethyl pyrroline-1-oxide (DMPO)는 Duchefa Biochemie (Haarlem, Netherlands)에서 구입하였다.
DNA loading dyes와 pBR322 DNA는 Fermentas (Waltham, MA, USA)에서 구입하였고, Dulbecco's modified Eagle's medium(DMEM), streptomycin (100 g/㎖), penicillin (100 IU/㎖) 그리고 fetal bovine serum (FBS)는 WelGENE (Gyeongsan, Korea)에서 구입하여 사용하였다.
DNA 밴드는 agarose gel에 포함된 ethidium bromide에 의해 염색되어 측정이 가능하였다. DNA 밴드는 ChemiDoc(10016025, Bio-Rad, Hercules, CA, USA)을 이용하여 측정하였다.
RAW264.7 세포를 유지하기 위해 DEME 배지를 사용하였고, 배지에 10% FBS (fetal bovine serum, Gibco BRL,Gaithersburg, MD, USA)와 1% penicillin이 포함된 용액을 사용하여 37℃, 5% CO_₂incubator에서 배양하였다.

데이터처리

통계처리는 GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc.,La Jolla, CA, USA)로 분석한 후, 분석결과는 일원분산분석(One-way ANOVA)에 의한 Duncan 검정을 실시하여 p <0.05 유의수준에서 Ducan’s Multiple Range Test (DMRT)로 유의적 차이를 검증하였다.
실험에서 얻어진 결과는 평균 ± 표준편차로 나타내었다.
HEGR-W; Water extract of Hericium erinaceus grown on green rice, HEGR-E;Ethanol extract of Hericium erinaceus grown on green rice, GR-W; Water extract of green rice, GR-E;Ethanol extract of green rice. The result was statistically analyzed by One-way ANOVA and posthoc Duncan Multiple Range Test (DMRT). The different letters indicate a significant difference foreach extract with control (p < 0.
HEGR-W; Water extract of Hericium erinaceus grown on green rice, HEGR-E;Ethanol extract of Hericium erinaceus grown on green rice, GR-W; Water extract of green rice, GR-E;Ethanol extract of green rice. The result was statistically analyzed by One-way ANOVA and posthoc Duncan Multiple Range Test (DMRT). The different letters indicate a significant difference foreach extract with control (p < 0.
HEGR-W; Water extract of Hericium erinaceus grown on green rice, HEGR-E;Ethanol extract of Hericium erinaceus grown on green rice, GR-W; Water extract of green rice, GR-E;Ethanol extract of green rice. The result was statistically analyzed by One-way ANOVA and posthoc Duncan Multiple Range Test (DMRT). The different letters indicate a significant difference foreach extract with control (p < 0.

이론/모형

총 폴리페놀 화합물 성 화합물 함량을 측정하기 위해 Folin-Ciocalteu's 방법을 이용하였고 (Wang et al., 1994) standard로 gallic acid (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA)를 사용하였으며, 증류수를 이용해 농도별로 희석하여 표준곡선을 구했다 (y = 0.0032x + 0.0368, R2= 0.9974).
총 플라보노이드 화합물 함량의 측정은 Nieva 등 (2000)의 방법으로 측정하였다. Standard인 catechin (Sigma-Aldrich Co.
Dutta 등 (2012)의 실험 방법을 인용하여 환원력 측정 실험을 진행하였다. 시료 추출물과 standard인 ascorbic acid를 각각의 농도 0.
활성산소에 의한 DNA 손상의 보호능 측정은 Tian와 Hua(2005)의 실험방법을 이용하여 진행하였다. Plasmid pBR DNA (0.
추출물의 세포독성은 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5- diphenyl2H-tetrazolium bromide (MTT)를 이용한 방법에 의해 측정하였다. 배양된 RAW264.
NO 생성량 측정 실험은 Griess 반응을 이용하여 세포 배양상측액의 NO 생성량을 측정하였다 (Wadsworth, 1999). 배양된 RAW264.

성능/효과

생물 전환을 통한 약용신소재를 개발하기 위하여 발아녹미에 노루버섯 균사제를 배양한 HEGR과 GR의 총 페놀성 화합물 과 플라보노이드 함량은 Table 1과 같으며 HEGR-E(66.53 ㎎) 및 HEGR-W (24.38 ㎎) 추출물의 총 페놀성 화합물 함량은 GR-E (53.14 ㎎) 와 GR-W (14.67 ㎎)의 총 페놀성 화합물 함량보다 모두 높게 나타났다 (Table 1). 총 플라보노이드 함량도 GR-E (49.
67 ㎎)의 총 페놀성 화합물 함량보다 모두 높게 나타났다 (Table 1). 총 플라보노이드 함량도 GR-E (49.57 ㎎) 및 GR-W (7.35 ㎎) 보다HEGR-E (82.12 ㎎) 및 HEGR-W (19.73 ㎎) 추출물에서 더 높은 것으로 나타났다. 즉 총 페놀성 화합물 함량과 총 플라보노이드 함량은 HEGR 추출물이 GR 추출물보다 높았으며 특히 HEGR-E 추출물이 총 폴리페놀성 화합물과 총 플라보노이드 함량이 높은 것으로 나타났다.
73 ㎎) 추출물에서 더 높은 것으로 나타났다. 즉 총 페놀성 화합물 함량과 총 플라보노이드 함량은 HEGR 추출물이 GR 추출물보다 높았으며 특히 HEGR-E 추출물이 총 폴리페놀성 화합물과 총 플라보노이드 함량이 높은 것으로 나타났다.
본 연구에서 약용작물 신소재로 개발하기 위하여 발아녹미에 노루궁뎅이 버섯 (Hericium erinaceus) 균사체를 배양하여 생물전환한 HEGR 추출물의 총 페놀성 화합물 함량과 총 플라보노이드 함량은 GR 추출물보다 높았다
HEGR과 GR 추출물의 DPPH 라디칼 소거능과 IC50 값을 측정한 결과는 table 2에 나타나 있다. DPPH 라디칼 소거능은 추출물 2 ㎎/㎖에서 HEGR-E 추출물이 44.70%로 가장 높게 나타났으며 다음은 GR-E 추출물이 42.98%로 높게 나타났다. 이는 ascorbic acid (2 ㎎/㎖)의 DPPH 라디칼 소거능(90.
이 방법은 짙은 자색의 DPPH의 짙은 자색이 탈색되는 정도에 따라 물질의 항산화능을 나타내는 방법으로 비교적 간단하여 여러 시료로부터 항산화 활성을 탐색할 때 유용하다. 본 연구에서 노루궁뎅이 균사체를 이용해서 생물 전환하여 약용 신소재로 개발한 HEGR 에탄올 추출물의 DPPH 라디칼 소거능은 44.7%로 가장 높았으며 동시에 낮은 IC50 값을 나타냈다.
ABTS 라디칼 소거능은 Fig. 1과 같으며 HEGR와 GR의 ABTS 라디칼 소거능은 열수 추출물보다 에탄올 추출물의 소거능이 높게 나타났다. 특히 2.
1과 같으며 HEGR와 GR의 ABTS 라디칼 소거능은 열수 추출물보다 에탄올 추출물의 소거능이 높게 나타났다. 특히 2.0 - 4.0 ㎎/㎖ 의 농도에서 HEGR-E와 GR-E 추출물의 ABTS 라디칼 소거능은 각 각 97.71%, 99.43%로 높은 소거능을 보였으며 이는 ascorbic acid(0.25 ㎎/㎖)의 97.74% 소거능과 비슷한 라디칼 소거능이다.
본 연구에서 노루궁뎅이 버섯을 이용하여 생물전환을 한 HEGR 추출물의 ABTS 라디칼 소거능은 4.0 ㎎/㎖농도에서 ascorbic acid (0.25 ㎎/㎖)의 ABTS radical 소거능과 거의 비슷하였으며 이는 노루궁뎅이 균사체를 이용해서 생물 전환하여 약용 신소재로 개발한 HEGR의 항산화성이 매우 높음을 시사한다.
2에 나타내었다. HEGR과 GR의 환원력도 열수 추출물보다 에탄올 추출물이 높았으며 HEGR-E 추출물 농도 0.25, 0.5, 1.0, 2.0,4.0 ㎎/㎖에서 측정한 흡광도는 0.07, 0.08, 0.11, 0.15, 0.22로 HEGR-E는 농도 의존적으로 금속이온을 환원하는 환원력이 증가하였으며 GR-E 보다 환원력이 높게 나타났다.
본 연구에서 HEGR-E 추출물은 0.25, 0.5, 1.0, 2.0,4.0 ㎎/㎖로 추출물의 농도가 증가할수록 700 ㎚에서 흡광도로 측정한 환원력도 0.108, 0.126, 0.168, 0.216, 0.304 로 농도 의존적으로 증가하였다. 환원력은 HEGR-E, HEGR-W,GR-E, GR-W 추출물 중에서 HEGR-E 추출물의 환원력이 더 높게 나타났으나 각 각의 시료 간 통계적으로 유의적인 차이를 보이지는 않았다.
304 로 농도 의존적으로 증가하였다. 환원력은 HEGR-E, HEGR-W,GR-E, GR-W 추출물 중에서 HEGR-E 추출물의 환원력이 더 높게 나타났으나 각 각의 시료 간 통계적으로 유의적인 차이를 보이지는 않았다.
HEGR과 GR의 산화적 스트레스에 의한 DNA의 손상을 억제하는 효과 Fig.3에서와 같이 negative control (0.08 mMFeSO4 and 30% H₂O₂ treatment)과 비교하였을 때 FeSO₄에 의해 야기된 산화적 스트레스에 의한 DNA 손상 억제 활성은 HEGR와 GR 추출물 모두에서 나타났으나 free radical 소거능과 환원력처럼 DNA의 산화적 손상 보호효과는 크게 나타나지는 않았으나 추출물 0.1, 0.5, 1.0 ㎎/㎖에서 농도 의존적으로 억제 활성을 보였다.
1 ㎍/㎖ LPS로 처리한 RAW264.7 cell에서 세포 생존율은 유의적으로 (p < 0.05) 감소하였으나 HEGR와 GR 추출물을 10 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖ 농도로 처리했을 때 세포 생존율은 LPS 처리군과 비교 시 거의 같거나 약간 증가하는 것으로 나타났으며 특히 HEGR 에탄올 추출물을 처리했을 때 세포 생존율은 18.4 - 21.8% 증가한 것으로 나타났다.
4). HEGR-W 및 HRGR-E 추출물을 10 ㎍/㎖, 25 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖를 RAW264.7 cell에 처리하였을 때 세포 생존율은 농도 의존적으로 감소하였으나 GR추출물을 50 ㎍/㎖에서 생존율은 GR-W 추출물에서 82.8%,GR-E 추출물에서 93.0%의 생존율을 나타냈다. 또한 GR-W 및 GR-E 추출물을 RAW264.
0%의 생존율을 나타냈다. 또한 GR-W 및 GR-E 추출물을 RAW264.7 cell에 처리하였을 때 50 ㎍/㎖에서 GR-W 추출물 84.9%, GR-E 추출물은 93.9% 이상의 생존율을 나타냈다. 따라서 HEGR 및 GR 추출물은 50 ㎍/㎖ 이하로 처리하였을 때 세포 독성은 낮은 것으로 나타났다.
9% 이상의 생존율을 나타냈다. 따라서 HEGR 및 GR 추출물은 50 ㎍/㎖ 이하로 처리하였을 때 세포 독성은 낮은 것으로 나타났다.
8% 증가한 것으로 나타났다. 즉 RAW264.7 cell과 LPS로 유도된 RAW264.7 cell에서 HEGR과 GR 추출물의 세포 독성은 낮은 것으로 나타났다.
05). 특히 HEGR-E 추출물은 LPS 처리 시 세포 독성은 크게 나타나지 않았으나 NO 생성은 농도 의존적으로 억제되는 것으로 나타났고 또한 50 ㎍/㎖ HEGR-E 추출물을 처리했을 때 LPS로 유도된 RAW264.7 cell의 NO 생성량 보다 28.1%가 억제되는 것으로 나타났다. 또한 GR 추출물의 NO 생성 억제 효과는 GR-E 추출물에서는 유의적인 감소를 보이지 않았으나 GR-W 추출물에서는 농도 의존적으로 NO 생성 억제 활성이 나타났으나 세포 생존율이 감소하였다.
1%가 억제되는 것으로 나타났다. 또한 GR 추출물의 NO 생성 억제 효과는 GR-E 추출물에서는 유의적인 감소를 보이지 않았으나 GR-W 추출물에서는 농도 의존적으로 NO 생성 억제 활성이 나타났으나 세포 생존율이 감소하였다. 즉 LPS로 유도된 RAW264.
또한 GR 추출물의 NO 생성 억제 효과는 GR-E 추출물에서는 유의적인 감소를 보이지 않았으나 GR-W 추출물에서는 농도 의존적으로 NO 생성 억제 활성이 나타났으나 세포 생존율이 감소하였다. 즉 LPS로 유도된 RAW264.7 cell에서 NO 생성 억제 활성은 HEGR-E 추출물이 가장 효과가 큰 것으로 나타냈으며 또한 세포 독성도 거의 없는 것으로 나타났다. Nitric oxide는 감염부위에서 면역 활성화된 대식세포에 의해 생성되는 것으로서 다양한 조직에서 신경전달, 혈관확장 및 면역조절에서 중요한 역할을 담당 (Soe et al.
HEGR 추출물의 총 페놀성 화합물 함량과 총 플라보노이드 함량이 GR 추출물에서 보다 높게 나타났으며 특히 HEGR-E 추출물 (66.53 ± 2.40 ㎎·GAE/100 g)에서 가장 많이 함유한 것으로 나타났다. DPPH 라디칼 소거능도 추출물 농도 2 ㎎/㎖에서 HEGR-E (44.
40 ㎎·GAE/100 g)에서 가장 많이 함유한 것으로 나타났다. DPPH 라디칼 소거능도 추출물 농도 2 ㎎/㎖에서 HEGR-E (44.70 ± 1.28%)와 GR-E추출물 (42.98 ± 1.38%)의 소거능이 높게 나타났으며 ABTS 라디칼 소거능은 HEGR-E와 GR-E 추출물에서 HEGR-W와 GR-W 추출물보다 높게 나타났으며 HEGR-E와 GR-E 추출물 2.0 ㎎/㎖이상의 농도에서는 대조군인 ascorbic acid의 라디칼 소거능과 비슷한 소거능을 보였으며 특히 HEGR-E 추출물의 소거능이 가장 높은 것으로 나타났다. 또한 모든 추출물의 환원력은 농도 의존적으로 증가하였으며 특히 HEGR-E 추출물은 환원력이 높게 나타났다.
0 ㎎/㎖이상의 농도에서는 대조군인 ascorbic acid의 라디칼 소거능과 비슷한 소거능을 보였으며 특히 HEGR-E 추출물의 소거능이 가장 높은 것으로 나타났다. 또한 모든 추출물의 환원력은 농도 의존적으로 증가하였으며 특히 HEGR-E 추출물은 환원력이 높게 나타났다. 산화적 스트레스에 의한 DNA의 손상을 억제하는 효과는 HEGR과 GR 추출물에서 DNA 손상을 억제하는 활성이 있는 것으로 나타났으나 라디칼 소거능처럼 큰 효과를 보이지 않았다.
또한 모든 추출물의 환원력은 농도 의존적으로 증가하였으며 특히 HEGR-E 추출물은 환원력이 높게 나타났다. 산화적 스트레스에 의한 DNA의 손상을 억제하는 효과는 HEGR과 GR 추출물에서 DNA 손상을 억제하는 활성이 있는 것으로 나타났으나 라디칼 소거능처럼 큰 효과를 보이지 않았다. RAW264.
산화적 스트레스에 의한 DNA의 손상을 억제하는 효과는 HEGR과 GR 추출물에서 DNA 손상을 억제하는 활성이 있는 것으로 나타났으나 라디칼 소거능처럼 큰 효과를 보이지 않았다. RAW264.7 cell과 LPS 처리한 RAW264.7 cell에서 HEGR 및 GR 추출물 (10 - 50 ㎍/㎖)의 세포독성은 낮게 나타났으며 LPS로 유도된 RAW264.7 cell에서 생산하는 NO 생성 억제 활성은 HEGR-E 추출물이 가장 효과가 큰 것으로 나타났다.
이상의 결과를 통해 생물전환을 통한 약용 신소재 탐색하기 위하여 발아녹미에 노루궁뎅이 버섯의 균사체를 접종하여 배양한 HEGR 추출물은 높은 항산화 활성과 항염증 효과를 나타냈으며 특히 HEGR-E 추출물의 활성이 높게 나타났다. 이러한 결과들은 HEGR 추출물이 약용신소재로서 기능성 식의약품 후보제로서 가능성이 있음을 시사하고 있다.

후속연구

따라서 HEGR-E 추출물과 같이 NO 생성저해활성이 높은 추출물은 감염반응과 질환의 치료 및 예방을 위한 약용 신소재로의 활용가능성을 제시하고 있다고 사료된다.
이러한 결과들은 HEGR 추출물이 약용신소재로서 기능성 식의약품 후보제로서 가능성이 있음을 시사하고 있다. 향후 HEGR의 유효 성분 분석과 항산화 및 항염증 작용기전에 대한 연구가 이루어져야 할 것으로 사료된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	과도한 NO의 생성은 어떤 문제가 되는가?	활성화된 대식세포는 염증 촉진성 사이토카인 이외에 iNOS (inducible nitric oxide synthase) 및 COX-2 (cyclooxygenase2)와 같은 효소의 발현을 통해 NO (nitric oxide) 및 PGE2 (prostaglandin E2)와 같은 다양한 염증매개 분자들을 생성하게 되고 (Nathan, 1992), 이들 매개체들의 과도한 생성은 다양한 만성염증성 질환의 발병에 기여하고 있는 것으로 알려져 있다. 특히 NOS에 의해 L-arginine에서 생성되는 NO는 평활근의 이완을 통한 혈관 등의 이완, 혈소판 응집억제, 신경전달, 면역조절 등의 중요한 기능을 가지고 있으나 과도한 NO의 생성은 염증반응을 촉진하고 염증매개체의 생합성을 촉진함으로써 염증을 심화시켜 조직 손상, 유전자 변이 및 신경 손상을 일으킨다 (Hippeli and Elstner, 1999). 따라서 NO 생성억제 등 염증성 매개체들의 생성을 억제하는 천연화합물의 발견은 보다 부작용이 적은 항염증 치료제 개발을 위한 방편으로 관심을 끌고 있다.
	노루궁뎅이 버섯은 무엇인가?	, 2011) 등 버섯의 생리활성 기능에 대하여 보고되고 있다. 노루궁뎅이 버섯 (Hericium erinaceus)은 산호버섯과에 속하는 버섯으로 하얀색의 다육질 균류로 다당류, 단백질, 렉틴, 헤리세논,에리나콜, 에리나신 및 테르페노이드와 같은 성분의 생물학적 활성이 연구되어 보고 되었고 (Kim et al., 2013) 또한 노루궁뎅이 버섯에서 치매치료제로 가능한 물질이 분리되었으며,항암효과를 가진 성분 등 다양한 생리활성물질이 있는 것으로 보고되었다 (Kawagishi et al.
	DPPH radical 소거능은 어떤 경우에 유용한가?	, 2008). 이 방법은 짙은 자색의 DPPH의 짙은 자색이 탈색되는 정도에 따라 물질의 항산화능을 나타내는 방법으로 비교적 간단하여 여러 시료로부터 항산화 활성을 탐색할 때 유용하다. 본 연구에서 노루궁뎅이 균사체를 이용해서 생물 전환하여 약용 신소재로 개발한HEGR 에탄올 추출물의 DPPH 라디칼 소거능은 44.

참고문헌 (36)

Alan C, Jennifer B, Azlina AA, Amanda JS, Helena SR, Gareth IJ, Christine AE and Michael EL. (2000). Antioxidant flavonols from fruits, vegetables and beverages: Measurements and bioavailability. Biological Research. 33:79-88.

상세보기
An CS, Choi SY, Jin HL, Jeon YH, Hur SJ, Kim IH, Park GD, Jeoung YJ and Lim BO. (2009). Immunomodulatory effects of Phellinus linteus extracts on liver damage induced by carbon tetrachloride in rats. Korean Journal of Medicinal Crop Science. 17:217-222.
Choi SP, Kang MY and Nam SH. (2004). Inhibitory activity of the extracts from the pigmented rice brans on inflammatory reactions. Journal of the Korean Society for Applied Biological Chemistry. 47:222-227.
Choi SW, Nam SH and Choi HC. (1996). Antioxidative acticity of ethanolic extracts of rice bran. Food and Biotechnology. 5:305-309.
Dutta AK, Gope PS, Banik S, Makhnoon S, Siddiquee MA and Kabir Y. (2012). Antioxidant properties of ten high yielding rice varieties of Bangladesh. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 2:S99-S103.

상세보기
Guo YJ, Deng GF, Xu XR, Wu S, Li S, Xia EQ, Li F, Chen F, Ling WH and Li HB. (2012). Antioxidant capacities, phenolic compounds and polysaccharide contents of 49 edible macrofungi. Food and Function. 3:1195-1205.

상세보기
Heim KE, Tagliaferro AR and Bobilya DJ. (2002). Flavonoid antioxidants: Chemistry, metabolism and structure-activity relationships. The Journal of Nutritional Biochemistry. 13:572-584.

상세보기
Hippeli S and Elstner EF. (1999). Inhibition of biochemical model reactions for inflammatory processes by plant extracts: A review on recent developments. Free Radical Research. 31:S81-S87.

상세보기
Jeong EJ, Sung SH, Kim J, Kim SH and Kim YC. (2008). Rhus verniciflua stokes attenuates glutamate-induced neurotoxicity in primary cultures of rat cortical cells. Natural Product Sciences. 14:156-160.

원문보기 상세보기
Jeong SJ, Kim KH and Yook HS. (2015). Whitening and antioxidant activities of solvent extracts from hot-air dried Allium hookeri. Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition. 44:832-839.

원문보기 상세보기
Jin JH, Kim JS, Kang SS, Son KH, Chang HW and Kim HP. (2010). Anti-inflammatory and anti-arthritic activity of total flavonoids of the roots of Sophora flavescens. Journal of Ethnopharmacology. 127:589-595.

상세보기
Jung MJ, Yin Y, Heo SI and Wang MH. (2008). Antioxidant and anticancer activities of extract from Artemisia capillaries. Korean Journal of Pharmacognosy. 39:194-198.
Kawagishi H, Shimada A, Hosokawa S, Mori H, Sakamoto H, Ishiguro Y, Sakemi S, Bordner J, Kojima N and Furukawa S. (1996). Erinacines E, F, and G, stimulators of nerve growth factor(NGF)-synthesis, from the mycelia of Hericium erinaceum. Tetrahedron Letters. 37:7399-7402.

상세보기
Kim BW, Kim JI, Kim HR and Byun DS. (2014). Antiinflammatory effect of an ethyl acetate fraction from Myagropsis yendoi on lipopolysaccharides-stimulated RAW264.7 cells. The Korean Society of Fisheries and Aquatic Science. 47:527-536.

원문보기 상세보기
Kim DE, Choi KO, Kang WS, Lim JD and Ko SH. (2010a). Up-to-date food processing technologies for herbal medicine. Korean Journal of Medicinal Crop Science. 18(supplement 2):93-102.
Kim DH, Park SR, Debnath T, Hasnat MDA, Pervin M and Lim BO. (2013). Evaluation of the antioxidant activity and anti-inflammatory effect of hericium erinaceus water extracts. Korean Journal of Medicinal Crop Science. 21:112-117.

원문보기 상세보기
Kim DJ, Oh SK, Yoon MR, Chun AR, Hong HC, Lee JS and Kim YK. (2010b). Antioxidant compounds and antioxidant activities of the 70% ethanol extracts from brown and milled rice by cultivar. Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition. 39:467-473.

원문보기 상세보기
Kim YD, Ha KY, Lee KB, Shin HT and Cho SY. (1998). Varietal variation of anthocyanin content and physicochemical properties in colored rice. Korean Journal of Breeding Science. 30:305-308.
Lee SJ, Kim EK, Oh HJ, Kwon HJ, Hwang JW, Moon SH, Jeon BT, Park PJ and Lim BO. (2011). Free radical scavenging activity and protective effect against $H_2O_2$ -induced stress in neuronal cells of enzymatic extracts from Sarcodon aspratus. Korean Journal of Medicinal Crop Science. 19:77-82.

원문보기 상세보기
Nam SH, Chang SM and Kang MY. (2003). Varietal difference in antioxidative activity of ethanolic extracts from colored rice bran. Journal of the Korean Society of Agricultural Chemistry and Biotechnology. 46:16-22.
Nathan C. (1992). Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells. The FASEB Journal. 6:3051-3064.

상세보기
Nieva Moreno MI, Isla MI, Sampietro AR and Vattuone MA. (2000). Comparison of the free radical-scavenging activity of propolis from several regions of Argentina. Journal of Ethnopharmacology. 71:109-114.

상세보기
Oki T, Masuda M, Kobayashi M, Nishiba Y, Furuta S, Suda I and Sato T. (2002). Polymeric procyanidins as radicalscavenging components in red-hulled rice. Journal of Agriculture and Food Chemistry. 50:7524-7529.

상세보기
Park JH. (2015). Quality and antioxidative properties of popped brown and pigmented waxy rice for making 'Ssalyeotgangjeong'. Master Thesis. Chonnam National University. p.1-76.
Rhee SG. (2006). $H_2O_2$ , a necessary evil for cell signaling. Science. 312:1882-1883.

상세보기
Seo KH, Kim YH, Lee YM, Ghosh M, Park KM, Park DH, Kim JS and Lim BO. (2017). Evaluation of anti-oxidant and anti-inflammatory activities of Ganoderma iucidum cultured on hulled barley. Korean Journal of Medicinal Crop Science. 25:29-36.

원문보기 상세보기
Seo SJ, Choi Y, Lee SM, Kong S and Lee J. (2008). Antioxidant activities and antioxidant compounds of some specialty rices. Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition. 37:129-135.

원문보기 상세보기
Soe JS, Lee TH, Lee SM, Lee SE, Seong NS and Kim J. (2009). Inhibitory effects of methanolic extracts of medicinal plants on nitric oxide production in activated macrophage RAW264.7 cells. Korean Journal of Medicinal Crop Science. 17:173-178.

원문보기 상세보기
Tian B and Hua Y. (2005). Concentration-dependence of prooxidant and antioxidant effects of aloin and aloe-emodin on DNA. Food Chemistry. 91:413-418.

상세보기
Tizard IR. (1986). Immunology: An introduction inflammation. (2th ed.). Saunders College Publishing. New York. NY, USA. p.423-441.
Tsegaye Z. (2015). Growing of oyster mushrooms using agricultural residues at Ethiopian biodiversity institute Addis Ababa, Ethiopia. Academia Journal of Microbiology Research. 3:14-21.
Vauzour D, Rodriguez-Mateos A, Corona G, Oruna-Concha MJ and Spencer JPE. (2010). Polyphenols and human health: Prevention of disease and mechanisms of action. Nutrients. 2:1106-1131.

상세보기
Wadsworth TL and Koop DR. (1999). Effects of the wine polyphenolics quercetin and resveratrol on pro-inflammatory cytokine expression in RAW264.7 macrophages. Biochemical Pharmacology. 57:941-949.

상세보기
Wang XJ, Sun H and Liu ZS. (1994). Quantitative analysis of 6,7-dimethylesculetin and capillarisine in Artemisia capillaris thunb. and prescriptions containing the crude drug. China Journal of Chinese Materia Medica. 19:667-670.

상세보기
Xie QW, Whisnant R and Nathan C. (1993). Promoter of the mouse gene encoding calcium-independent nitric oxide synthase confers inducibility by interferon $\gamma$ and bacterial lipopolysaccharide. Journal of Experimental Medicine. 177:1779-1784.

상세보기
Yildirim A, Mavi A and Kara AA. (2001). Determination of antioxidant and antimicrobial activities of Rumex crispus L. extracts. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 49:4083-4089.

상세보기

저자의 다른 논문 :

LOADING...

활용도 분석정보

상세보기

다운로드

내보내기

활용도 Top5 논문

해당 논문의 주제분야에서 활용도가 높은 상위 5개 콘텐츠를 보여줍니다.
더보기 버튼을 클릭하시면 더 많은 관련자료를 살펴볼 수 있습니다.

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format