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제안 방법
- 溫腎壯陽의 효능으로 남자陽痿 치료에 활용되어 온 蛇床子 추출물이 음경해면체에 미치는 영향을 알아보기 위해 organ bath study와 조직화학 및 면역조직화학적 방법을 통해 실험을 진행하였다.
- 다음으로 蛇床子 추출물의 음경해면체 이완효과에 대한 기전을 알아보기 위하여, eNOS 억제제33)인 L-NNA의 전처치 유무에 따른 음경해면체 이완효과의 변화를 비교해보았다. L-NNA를 전처치하지 않고 蛇床子 추출물을 투여하였을 때 PE의 최대수축에 대해 유의한 이완효과가 나타났고, L-NNA를 전처치하고 蛇床子 추출물을 투여하였을 때도 유의한 이완효과가 나타났다.
- 4)에 담았다. 음경 주위의 지방을 제거하고 2 ㎜ 두께의 음경절편을 제작한 후 정상인 control 군과 10분간 PE(10-6 M)만 처리한 PE군, 10분간 PE(10-6 M) 처리 후 다시 10분간 蛇床子 추출물(3 ㎎/㎖)을 처리한 TF군으로 구분하였다. 제작된 표본은 실온에서 10% NBF에 24시간동안 고정하였다.
- 음경절편을 phenylephrine(PE, 10-6 M)으로 수축시키고 蛇床子 추출물을 농도별(0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3 ㎎/㎖)로 투여하여 수축의 변화를 기록하였다.
- 음경해면체의 endothelial nitric oxide synthases(eNOS)와 phosphodiesterase5(PDE5)의 분포 변화를 관찰하기 위하여 면역 조직화학적 염색을 실시하였다. 음경절편을 proteinase K(20 ㎍/㎖)에서 5분 동안 proteolysis 과정을 거친 다음 blocking serum인 10% normal goat serum에서 2시간 동안 반응시켰다.
- 이에 저자는 溫腎壯陽의 효능이 있으며, 기존 연구에서 남성 생식기능 강화효과가 있다고 보고된 蛇床子 추출물이 음경해면체의 이완에 관여하여 성기능 개선에도 관여할 것이라고 생각하여, organ bath study와 면역조직화학적 방법을 통하여 실험을 진행하였다.
- 이완효과의 기전은 Nω-nitro-L-arginine(L-NNA, 10-4 M)을 15분간 전처치한 음경절편을 PE로 수축시킨 후 蛇床子 추출물을 농도별(0.1, 0.3, 1, 3 ㎎/㎖)로 투여하여 수축의 변화를 기록하였고, L-NNA를 전처치하지 않은 경우와 비교하였다.
- 토끼를 urethane(0.6 g/㎏, 정맥주사)로 마취한 후 음경을 적출하였다. 적출된 음경조직은 4℃의 modified krebs-ringer bicarbonate solution(NaCl 125.
대상 데이터
- 본 실험에는 2.5 kg 내외의 New zealand산 white 수컷 rabbit(샘타코, 한국)와 8주령의 ICR계 수컷 mouse(중앙실험동물, 한국)가 사용되었고, 사료와 물을 충분히 공급하면서 1주일간 실험실 환경에 적응시킨 후 사용하였다.
데이터처리
- 음경해면체 수축변화는 평균과 표준편차로 나타내었고, 실제 수축의 크기와 PE를 투여하여 유발된 최고 수축에 대한 백분율을 모두 표시하였다. 면역조직화학적 염색 결과의 수치화를 위해 Image pro Plus(Media Cybernetic, USA)을 이용한 영상분석(image analysis)을 실시하였다. 실험결과의 비교는 sigma plot 2000(Sigma)을 이용하여 student's t-test를 시행하였다.
- 면역조직화학적 염색 결과의 수치화를 위해 Image pro Plus(Media Cybernetic, USA)을 이용한 영상분석(image analysis)을 실시하였다. 실험결과의 비교는 sigma plot 2000(Sigma)을 이용하여 student's t-test를 시행하였다.
- 음경해면체 수축변화는 평균과 표준편차로 나타내었고, 실제 수축의 크기와 PE를 투여하여 유발된 최고 수축에 대한 백분율을 모두 표시하였다. 면역조직화학적 염색 결과의 수치화를 위해 Image pro Plus(Media Cybernetic, USA)을 이용한 영상분석(image analysis)을 실시하였다.
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