선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 에 관한 효과가 보고되고 있으나, 천궁의 방향성 정유추출물에 대한 항비만 효과를 살펴본 연구는 없다. 이에 저자는 천궁의 정유 추출물을 이용하여 3T3-L1 세포의 분화 및 지방축적에 미치는 영향을 살펴 본 연구에서 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.
- 의 혈구암세포의 aptosis 유발 효과 등이 있다. 저자는 천궁을 여러 가지 정유의 추출법에 따라 추출하여 얻은 정유추출물의 임상 활용도를 높이고자 본 연구를 수행하였다. 우선 in vitro에서 3T3-L1 전지방세포를 성숙한 지방세포로 분화시키면서 정유추출물을 처리하여 세포독성을 평가하였고, 독성이 없는 농도 범위의 정유추출물을 세포에 처리하여 세포분화 및 지방생성에 관련하는 인자들의 단백발현을 관찰을 통해 항비만 효과를 검증하였다.
제안 방법
- 3T3-L1 세포의 분화 및 지방 축적에 미치는 영향을 관찰하기 위해 Oil red-O 염색을 실시하였다. 분화시킨 용매별 천궁(EA, PE, SD) 각 농도(0.
- 3T3-L1 전지방세포의 세포분화 및 성숙 지방세포의 지방생성에 관여하는 단백질 발현을 관찰하기 위하여 분화가 종료된 세포를 PBS로 세척하고, protease inhibitor 및 phosphatase inhibitor를 각각 첨가한 RIPA buffer 적당량을 첨가하여 세포를 용해시켰다. 그 후 세포를 수거하여 21 G needle로 분쇄시키고 13,000 rpm으로 4℃에서 30분간 원심분리하여 상층액을 취한 후 Bradford 법을 사용하여 단백질 정량을 하였다.
- 48시간 배양 후 MTT 용액 200 μL를 넣어 37℃, 5% CO2 incubator에서 4시간 반응시킨 뒤 MTT 용액을 완전히 제거한 다음 DMSO를 200 μL씩 분주하여 생성된 formazan을 모두 녹인 후 분광광도계로 570 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
- 건조 천궁 100 ｇ을 분쇄하여 1 L의 ethyl acetate, petroleum ether를 각각 첨가한 다음, 72시간 동안 상온 추출하고 Advantec Filter paper No. 2 (Toyo Roshi Kaisha Ltd., Tokyo, Japan)로 여과하여 이 여과액을 회전증발농축기로 감압 농축하였다.
- 2 cacodylate buffer로 4℃에서 세포를 3시간 동안 고정시켰다. 고정시킨 세포에 Oil red-O solution을 3 mL씩 넣어 1시간 동안 지방구를 염색한 다음 40% isopropyl alcohol로 세척한 후 증류수 1 mL를 넣어 현미경으로 관찰하였다. 염색된 지방세포의 지방함량 측정을 위하여 건조시킨 후 100% isopropyl alcohol로 지방을 추출하여 흡광도 값이 1±0.
- cells/mL로 세포를 분주하여 confluent한 상태까지 배양하였다. 그 후 분화유도와 동시에 추출용매별 천궁 정유추출물을 각 농도(0.01, 0.02, 0.05, 0.1 및 0.2 mg/mL)로 처리하였다. 48시간 배양 후 MTT 용액 200 μL를 넣어 37℃, 5% CO2 incubator에서 4시간 반응시킨 뒤 MTT 용액을 완전히 제거한 다음 DMSO를 200 μL씩 분주하여 생성된 formazan을 모두 녹인 후 분광광도계로 570 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
- 그리고 지방대사 관련 단백질은 Lugen™ Sensi-Q2000 Chemidoc (Lugen SCI, Bucheon, Korea)을 통해 분석하였다.
- 02 mg/mL 이하의 농도까지 세포독성을 보이지 않았다. 따라서 이후 실험에서는 모든 정유추출물에서 세포독성을 나타내지 않은 0.01, 0.02 mg/mL 농도 이하로 세포를 처리하였다(Fig. 3).
- 분화가 시작된 시점부터 3T3-L1 세포를 대조군(control group, CON), 양성대조군(fenofibrate, FF), 천궁의 정유처리군(Cnidii Rhizoma, CR)으로 나눈 후, 2일마다 분화배지 교환 시 각각의 시료를 처리하였다.
- 분화시킨 용매별 천궁(EA, PE, SD) 각 농도(0.01 mg/mL 및 0.02 mg/mL)를 이틀에 한 번씩 배지를 교환하여 처리하였다.
- 세포는 10%의 BCS, 1% penicillin streptomycin을 첨가한 DMEM 배지에서 37℃, 5% CO2에서 8일간 배양 후, confluent한 상태가 되면 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지에서 분화를 유도하면서 시료를 처리하였다.
- 연이어 AMPK, P-AMPK, ACC, P-ACC, PPAR-α, PPAR-γ, C/EBP-α, β-actin의 단백질 항체를 4℃에서 각각 overnight 반응 처리하여 tris-buffered saline과 Tween 20을 혼합한 mixture of tris-buffered saline and Tween 20 (TBST)로 세척하고 각각의 단백질 항체에 알맞은 2차 항체를 4℃에서 1시간 동안 반응시킨 후 ECL 시약을 10초간 처리하여 Chemidoc system을 이용해 western band를 검출하였다.
- 염색된 지방세포의 지방함량 측정을 위하여 건조시킨 후 100% isopropyl alcohol로 지방을 추출하여 흡광도 값이 1±0.05 이하로 나오도록 희석한 후 510 nm 파장에서 분광광도계로 흡광도를 측정하였다.
- 저자는 천궁을 여러 가지 정유의 추출법에 따라 추출하여 얻은 정유추출물의 임상 활용도를 높이고자 본 연구를 수행하였다. 우선 in vitro에서 3T3-L1 전지방세포를 성숙한 지방세포로 분화시키면서 정유추출물을 처리하여 세포독성을 평가하였고, 독성이 없는 농도 범위의 정유추출물을 세포에 처리하여 세포분화 및 지방생성에 관련하는 인자들의 단백발현을 관찰을 통해 항비만 효과를 검증하였다.
- 그 후 세포를 수거하여 21 G needle로 분쇄시키고 13,000 rpm으로 4℃에서 30분간 원심분리하여 상층액을 취한 후 Bradford 법을 사용하여 단백질 정량을 하였다. 정량된 단백질의 적정량을 12% SDS-poiyacrylmide gel eletrophoresis (SDS-PAGE)에서 분리한 후 polyvinylidene fluoride membrane으로 전이시키고 단백질이 전이된 membrane을 5% skim milk 처리하여 비특이적인 단백질에 대한 blocking을 실시하였다. 연이어 AMPK, P-AMPK, ACC, P-ACC, PPAR-α, PPAR-γ, C/EBP-α, β-actin의 단백질 항체를 4℃에서 각각 overnight 반응 처리하여 tris-buffered saline과 Tween 20을 혼합한 mixture of tris-buffered saline and Tween 20 (TBST)로 세척하고 각각의 단백질 항체에 알맞은 2차 항체를 4℃에서 1시간 동안 반응시킨 후 ECL 시약을 10초간 처리하여 Chemidoc system을 이용해 western band를 검출하였다.
- 정유 추출 과정에서 사용된 회전증발농축기는 Buchi (Rotavapor R-300, Flawii, Swiss) 제품을 사용하였고, 세포의 분화 및 지방구는 현미경(AE31, Motic, Xiamen, China)을 통해 관찰하고 분광광도계(Sunrise, Tecan, Grodig, Austria)를 통해 흡광도로 분석하였다.
- 정유처리군은 다시 6군으로 구분하여 추출법을 달리한 정유 시료인 EA, PE, SD를 각각 0.01∼0.2 mg/mL로 농도를 달리하여 처리하였다.
- 즉 분화가 시작한 시점(D-0)에서는 10% FBS, 1% penicillin/streptomycin, 10 μg/mL insulin, 2 μM dexamethasone, 0.5 μM isobutyl methylxanthine이 포함된 DMEM 배지로 교환하여 배양하고, 2일 후(D-2)에 10% FBS, 1% penicillin/streptomycin, 5 μg/mL insulin이 포함된 DMEM 배지로 다시 교체하였으며, D-5일 이후, insulin이 무첨가된 10% FBS 함유 DMEM 배지로 배양하였다(Fig. 2).
- 천궁의 정유추출물이 지방세포의 분화 및 지방축적에 미치는 효과를 알아보기 위해 용매추출법 및 수증기 증류법으로 추출하여 3T3-L1 세포에 처리한 후 다음의 결과를 얻었다.
- 한편 실험기간 동안 CON군과 FF군에는 각각 vehicle 용액인 DMSO 40 μM, 고지혈증 치료제인 FF를 동량으로 처리하였다(Fig. 2).
대상 데이터
- 3T3-L1 세포주는 American type culture collection (ATCC, Manassas, VI, USA)에서 구입하여 사용하였다.
- 그리고 3T3-L1 세포 배양 및 지방구 염색에 사용된 시약 중 bovine calf serum (BCS), fetal bovine serum (FBS), Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)은 Hyclone사(Hyclone, Logan, UT, USA) 제품을 구입하였고, penicillin, streptomycin, insulin, dexamethasone, isobutyl methylxanthine, cacodylate, glutaraldehyde, 3-(4,5-methylthiazol–2-yl)-2,5-diphenyletetra zolium bromide (MTT) 와 Oil red-O 용액은 Sigma 사(St. Louis, MO, USA)로부터 구입하였다.
- 또한 FBS는 Fisher scientific (Gibco®, Pittsburg, KS, USA) 제품, dimethyl sulfoxide (DMSO), CaCl2는 덕산약품(Duksan, Ansan, Korea) 제품을 사용하였으며, formaldehyde, isopropyl alcohol은 Junsei chemical (Tokyo, Japan) 제품을 사용하였다.
- 또한 western blot 분석 시약인 sodium dodecyl sulfate (SDS)는 BIO-RAD (Hercules, CA, USA), peroxisome proliferator-activated receptor-α (PPAR-α), peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPAR-γ), CCAAT/enhancer binding protein α (C/EBP-α), β-actin의 1차 항체는 Santa-Cruz Biotechnology 사(Dallas, TX, USA), phospho-adenosine monophosphate (AMP)-activted protein kinase (P-AMPK), AMP-activated protein kinase (AMPK), phospho-acetyl-CoA carboxylase (P-ACC), acetyl-CoA carboxylase (ACC)의 1차 항체는 Cell Signaling (Danvers, TX, USA)으로부터 구입하였으며, 2차 항체는 GeneTex (Irvine, CA, USA), electrochemiluminescence (ECL) 시약은 GE Healthcare (Amersham™, Chalfont Saint Giles, UK)로부터 구매하였다.
- 본 실험에 사용된 천궁(Yangyang, Korea)은 대원약업사(Daewon, Daegu, Korea)에서 구입하여 사용하였다. 그리고 3T3-L1 세포 배양 및 지방구 염색에 사용된 시약 중 bovine calf serum (BCS), fetal bovine serum (FBS), Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)은 Hyclone사(Hyclone, Logan, UT, USA) 제품을 구입하였고, penicillin, streptomycin, insulin, dexamethasone, isobutyl methylxanthine, cacodylate, glutaraldehyde, 3-(4,5-methylthiazol–2-yl)-2,5-diphenyletetra zolium bromide (MTT) 와 Oil red-O 용액은 Sigma 사(St.
- 시료의 추출에는 일정 순도 이상의 ethyl acetate (99.5%, Duksan, Ansan, Korea) 및 petroleum ether (99%, Daejung chemicals & metals, Siheung, Korea) ethanol (95%, Daehan ethanol life, Seoul, Korea)을 사용하였으며, 무수황산나트륨(Duksan, Ansan, Korea)은 1급 시약을 사용하였다.
데이터처리
- 결과의 통계처리는 IBM SPSS statistics ver. 22 (IBM Corp., Armonk, NY, USA)를 이용하여 산출되었으며, 군 간의 평균차이에 대한 유의성 검정은 one-way analysis of variance (ANOVA)를 실시하였다.
- 여러 군 간의 차이는 least significant difference (LSD) test로 p<0.05 이상의 수준에서 사후검정을 실시하였으며, mean±standard error (S.E.)로 표시하였다.
이론/모형
- 3T3-L1 전지방세포의 세포분화 및 성숙 지방세포의 지방생성에 관여하는 단백질 발현을 관찰하기 위하여 분화가 종료된 세포를 PBS로 세척하고, protease inhibitor 및 phosphatase inhibitor를 각각 첨가한 RIPA buffer 적당량을 첨가하여 세포를 용해시켰다. 그 후 세포를 수거하여 21 G needle로 분쇄시키고 13,000 rpm으로 4℃에서 30분간 원심분리하여 상층액을 취한 후 Bradford 법을 사용하여 단백질 정량을 하였다. 정량된 단백질의 적정량을 12% SDS-poiyacrylmide gel eletrophoresis (SDS-PAGE)에서 분리한 후 polyvinylidene fluoride membrane으로 전이시키고 단백질이 전이된 membrane을 5% skim milk 처리하여 비특이적인 단백질에 대한 blocking을 실시하였다.
성능/효과
- 02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 농도 의존적으로 유의하게 P-AMPK/AMPK의 발현이 증가하였다. 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 SD를 처리한 결과, CON군에 비해 P-AMPK/AMPK의 발현이 유의하게 농도 의존적인 증가를 보였다. 또한 3가지 추출물 모두 고농도처리 군에서는 FF군보다 유의하게 발현이 증가하였으며, 특히 EA군은 2개 농도 모두에서 FF군에 비해 유의하게 P-AMPK/AMPK 발현 증가를 보였다(Fig.
- 1. 정유추출물인 EA, PE, SD는 0.02 mg/mL 이하의 농도 범위에서는 세포독성을 나타내지 않았으며, 특히 EA는 0.2 mg/mL 이하, PE는 0.1 mg/mL 이하에서도 세포독성을 나타내지 않았다.
- 2. 정유추출물인 EA, PE, SD는 모두 0.02 mg/mL 이하의 농도 범위에서 농도 의존적으로 3T3-L1 세포분화 및 지방축적을 억제시켰다.
- 3. 정유추출물인 EA, PE, SD는 모두 0.02 mg/mL 이하의 농도 범위에서 CON군에 비해 농도 의존적이면서 유의하게 AMPK와 ACC의 인산화를 증가시켰다.
- 3T3-L1 세포에 EA를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리하고 Oil red-O 염색을 실시한 결과, CON군뿐만 아니라 FF군에 비해 모든 농도에서 유의하게 세포 내 지방축적 및 세포분화를 억제시켰다. PE를 0.
- 3T3-L1 세포에 EA를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리하고 western blot 분석을 수행한 결과, CON군에 비해 농도 의존적으로 유의한 P-AMPK/AMPK의 발현 증가를 보였으며, 3가지 정유추출물 중 가장 우수한 효능을 보였다. 그리고 PE를 0.
- 3T3-L1 세포에 EA를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 C/EBP-α의 발현이 유의하게 감소하였으며, 농도 의존적인 경향을 보였으나 비슷한 효과를 보였다.
- 3T3-L1 세포에 EA를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 P-ACC/ACC의 발현이 유의하게 증가하였고, 모든 농도에서 비슷한 증가를 보였다. PE를 0.
- 3T3-L1 세포에 EA를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 C/EBP-α의 발현이 유의하게 감소하였으며, 농도 의존적인 경향을 보였으나 비슷한 효과를 보였다.
- 3T3-L1 세포에 EA를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 모든 농도에서 모두 PPAR-γ의 발현이 유의하게 농도 의존적으로 감소하는 것을 볼 수 있었다.
- 3T3-L1 세포에 EA를 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 0.2 mg/mL 처리군을 제외한 모든 농도에서 세포생존율을 유의하게 증가시켰다.
- 4. 정유추출물인 EA, PE, SD는 모두 0.02 mg/mL 이하의 농도 범위에서 CON군에 비해 농도 의존적이면서 유의하게 PPAR-α의 단백발현을 증가시켰다.
- 5. 정유추출물인 EA, PE, SD는 모두 0.02 mg/mL 이하의 농도 범위에서 CON군에 비해 농도 의존적이면서 유의하게 PPAR-γ와 C/EBPa-α의 단백발현을 감소시켰다.
- 02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 P-ACC/ACC의 발현이 유의하게 증가하였고, 모든 농도에서 비슷한 증가를 보였다. PE를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 농도 의존적으로 P-ACC/ACC의 발현이 증가하였으나, 유의성은 보이지 않았다. 그리고 SD를 0.
- PE를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 농도 의존적으로 모든 농도에서 C/EBP-α의 발현이 유의하게 감소하였다.
- PE를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 모든 농도에서 농도 의존적으로 유의한 PPARγ의 발현 감소를 보였다.
- 02 mg/mL 농도로 처리하고 Oil red-O 염색을 실시한 결과, CON군뿐만 아니라 FF군에 비해 모든 농도에서 유의하게 세포 내 지방축적 및 세포분화를 억제시켰다. PE를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 모든 농도에서 세포 내 지방 축적 및 세포분화를 억제시켰으며, 0.02 mg/mL 농도에서 유의한 억제를 보였다. SD를 0.
- PE를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 농도 의존적으로 모든 농도에서 C/EBP-α의 발현이 유의하게 감소하였다.
- 또한 FF군보다 증가된 세포생존율을 보였다. PE를 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2 mg/mL 농도로 처리한 실험에서도 CON군에 비해 0.2 mg/mL 처리군을 제외한 모든 농도에서 용량 의존적으로 세포생존율을 유의하게 증가시켰다. 또한 FF군에 비해 유의하게 세포생존율이 증가하였다.
- 2 mg/mL 처리군을 제외한 모든 농도에서 세포생존율을 유의하게 증가시켰다. SD는 CON군에 비해 0.01, 0.02 mg/mL 처리군에서 세포생존율을 증가시켰으나, 0.05 mg/mL 이상의 농도에서는 세포독성을 보였다(Fig. 3).
- SD를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 모든 농도에서 농도의존적으로 C/EBP-α의 발현이 유의하게 감소하였다.
- SD를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 모든 농도에서 유의하게 PPAR-γ의 발현이 감소하였으며, 농도 의존적 경향을 보였다.
- SD를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 모든 농도에서 세포 내 지방 축적 및 세포분화를 억제시켰으며, 0.02 mg/mL 농도에서 유의한 억제를 보였다.
- SD를 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2 mg/mL 농도로 처리한 실험에서는 CON군에 비해 0.01, 0.02 mg/mL 처리군에서 세포생존율을 증가시켰으며, 0.01 mg/mL에서는 CON군 및 FF군에 비해 유의하게 세포생존율을 증가시켰다. 즉 0.
- 02 mg/mL 농도에서 유의한 억제를 보였다. 결과적으로 세포분화 및 지방축적을 억제시키는 전반적인 효능은 EA가 뛰어났다(Fig. 4).
- 결과적으로 EA의 세포분화 및 지방축적 억제 효과가 뛰어났으며, SD는 고농도(0.02 mg/mL)에서 뛰어난 효력을 보여주었다.
- 02 mg/mL 농도로 처리하고 western blot 분석을 수행한 결과, CON군에 비해 농도 의존적으로 유의한 P-AMPK/AMPK의 발현 증가를 보였으며, 3가지 정유추출물 중 가장 우수한 효능을 보였다. 그리고 PE를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 농도 의존적으로 유의하게 P-AMPK/AMPK의 발현이 증가하였다. 0.
- 그리고 SD를 0.01, 0.02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 모든 농도에서 P-ACC/ACC의 발현이 증가하였다.
- 02 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 모든 농도에서 P-ACC/ACC의 발현이 증가하였다. 또한 3가지 정유추출물 모두 FF군에 비해 P-ACC/ACC 단백 발현이 증가하는 경향을 보였으나, 유의한 증가는 보이지 않았으며, EA의 효능이 가장 뛰어난 것으로 관찰되었다(Fig. 6).
- 02 mg/mL 농도로 SD를 처리한 결과, CON군에 비해 P-AMPK/AMPK의 발현이 유의하게 농도 의존적인 증가를 보였다. 또한 3가지 추출물 모두 고농도처리 군에서는 FF군보다 유의하게 발현이 증가하였으며, 특히 EA군은 2개 농도 모두에서 FF군에 비해 유의하게 P-AMPK/AMPK 발현 증가를 보였다(Fig. 5).
- 5). 또한 ACC 및 P-ACC의 단백발현 정도는 EA, PE, SD의 0.01, 0.02 mg/mL 처리 후에 CON군에 비해 모든 농도에서 유의하게 농도 의존적으로 단백발현이 증가하였으며, 특히 EA의 효능이 가장 우수하였다(Fig. 6).
- 2 mg/mL 처리군을 제외한 모든 농도에서 세포생존율을 유의하게 증가시켰다. 또한 FF군보다 증가된 세포생존율을 보였다. PE를 0.
- 또한 FF군에 비해 3가지 정유 추출물 처리군 모두에서 C/EBP-α의 발현이 감소하는 것을 볼 수 있었으며, 특히 EA 처리군 모두와 SD 0.02 mg/mL 농도에서 유의한 C/EBP-α의 발현 감소를 보였다(Fig. 7).
- 또한 FF군에 비해 3가지 정유 추출물 처리군 모두에서 C/EBP-α의 발현이 감소하는 것을 볼 수 있었으며, 특히 EA 처리군 모두와 SD 0.02 mg/mL 처리 농도에서 유의한 C/EBP-α의 발현 감소를 보였다(Fig. 9).
- 또한 FF군에 비해 3가지 정유 추출물에서 PPAR-γ가 증가하거나 감소하는 등 약간의 차이를 보였지만 통계적 유의성을 보이지 않았으며, EA 0.02 mg/mL 농도에서 가장 뚜렷한 감소를 보였다(Fig. 8).
- 또한 PPAR-γ의 단백발현 관찰에서는 3가지 추출물은 모든 처리농도에서 CON군에 비해 PPAR-γ의 발현을 유의하게 감소시켰으며(Fig. 8), 농도 의존적으로 C/EBP-α의 발현도 유의하게 감소시켰다(Fig. 9).
- 이러한 특징으로 인해 1974년에 소개된 이후 지방축적 및 지방세포의 대사, 분화과정을 연구하는 데 가장 많이 사용되는 in vitro 세포 모델이다14). 본 실험에서 용매별 정유추출물 EA, PE, SD를 3T3-L1 세포에 처리하고 Oil red-O 염색을 실시한 결과, EA는 CON군 및 FF군에 비해 모든 처리 농도에서 용량 의존적으로 유의하게 세포 내 지방축적 및 세포분화를 억제시켰다(FIg. 4). PE 및 SD는 CON군에 비해 농도 의존적으로 유의하게 지방축적 및 세포분화를 억제하였다.
- . 본 연구에서 천궁의 용매별 정유추출물인 EA 및 PE를 0.01, 0.02, 0.05, 0.1, 0.2 mg/mL 농도로 처리한 결과, CON군에 비해 0.2 mg/mL 처리군을 제외한 모든 농도에서 세포생존율을 유의하게 증가시켰다. SD는 CON군에 비해 0.
- 또한 AMPK의 활성화는 지방산 합성과 콜레스테롤 합성을 조절하는 ACC를 인산화시킴으로서 ACC 효소를 불활성화시킨다21). 용매별 정유추출물을 3T3-L1 세포에 처리하고 에너지 대사 및 지방대사를 조절하는 AMPK 및 P-AMPK의 단백발현을 관찰한 결과 EA, PE, SD 모두 CON군에 비해 모든 처리농도에서 P-AMPK/AMPK의 발현을 농도 의존적으로 유의하게 증가시켰다(Fig. 5). 또한 ACC 및 P-ACC의 단백발현 정도는 EA, PE, SD의 0.
- 용매별 정유추출물인 EA, PE, SD를 3T3-L1 세포에 처리하고 PPAR-α의 단백발현을 관찰한 결과, 3가지 추출물은 모든 처리농도에서 CON군에 비해 PPAR-α의 발현을 농도 의존적으로 유의하게 증가시켰다(Fig. 7).
- 01 mg/mL에서는 CON군 및 FF군에 비해 유의하게 세포생존율을 증가시켰다. 즉 0.1 mg/mL 이하의 농도 범위까지 EA와 PE가 유사하게 세포독성을 보이지 않았으며, SD는 0.02 mg/mL 이하의 농도까지 세포독성을 보이지 않았다. 따라서 이후 실험에서는 모든 정유추출물에서 세포독성을 나타내지 않은 0.
- 농축된 정유성분에 ethanol을 첨가하여 침전시키고, 여과를 통해 얻은 여과물을 진공회전농축기에서 감압농축한 후, 농축 추출물로부터 유기용매를 완전히 제거하여 정제된 정유를 얻었다. 최종 ethyl acetate 용매로부터 추출된 정유(ethyl acetate-extracted essential oil, EA)의 수율은 3.54%, petroleum ether 용매로부터 추출된 정유(petroleum ether-extracted essential oil, PE)의 수율은 1.82%였으며, 실험을 시작할 때까지 4℃ 이하의 냉장실에서 보관하였다(Fig. 1).
후속연구
- 결론적으로 천궁의 정유추출물은 양성대조군인 fenofibrate보다 유의하거나 유사한 지방세포의 분화 및 지방의 대사 조절을 통해 지방의 축적을 억제함으로써, 항비만 소재로서 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
- 본 실험에서 정유추물물이 지방세포의 분화 및 지방대사를 조절하는 단백질 발현 정도에 미치는 영향을 살펴본 결과, 천궁의 정유추출물, 특히 EA는 항비만 효과가 큰 소재로서 추후 동물실험이나 더 자세한 기전 연구 등 심도 있는 연구가 뒷받침될 경우, 향기 요법 등의 비만 치료와 관련된 다양한 방면에서 많이 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.