[논문]역류성 식도염 생쥐 모델에서 해표초, 와릉자, 모려와 Esomeprazole의 치료효과에 대한 비교 연구

송창훈; 백태현

doi:10.13048/jkm.18018

역류성 식도염 생쥐 모델에서 해표초, 와릉자, 모려와 Esomeprazole의 치료효과에 대한 비교 연구
A Comparative Study of Sepiae Os, Arcae Concha, Ostreae Concha and Esomeprazole in a Mouse Model of Reflux Esophagitis 원문보기

Journal of Korean Medicine = 대한한의학회지, v.39 no.2, 2018년, pp.92 - 105

송창훈 (상지대학교 한의과대학 내과학 교실) , 백태현 (상지대학교 한의과대학 내과학 교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives: This aim of this study is to compare the reflux esophagitis improvement effects of Sepiae Os, Arcae Concha, Ostreae Concha, and Proton Pump Inhibitor(esomeprazole) through rat experiments. Methods: NO production inhibitory effect was measured by NO production amount and iNOS mRNA expression level in cell lines. iNOS, $TNF-{\alpha}$ and $p-I{\kappa}B$, and serotonin were compared using immunohistochemistry at the rat reflux esophagitis. Reflux esophagitis connection external form, lower esophageal sphincter, and gap were observed and an esophageal inflammatory indicator, IL-6 activity was also evaluated by immunohistochemistry. Results: NO production and iNOS mRNA expression was showed concentration dependent decrease in cell lines treated with Sepiae OS, Arcae Concha, and Ostreae Concha at the experiments of cell lines. In the suppression of iNOS and $p-I{\kappa}B$ at the rat reflux esophagitis, Sepiae Os treat group(SOT) and Ostreae Concha treat group(OCT) were more effective. In the increase of serotonin at the rat reflux esophagitis, ACT, MT and OCT were more effective. Damage of lower esophageal sphincter, and gap between esophageal keratin and mucosa were observed less at the SOT, ACT, OCT. In the suppression of IL-6 at the rat reflux esophagitis, SOT and OCT were more effective than GE and, SOT was more effective than MT significantly. Conclusions: The anti-inflammatory effect was the best in the SOT and lower esophageal sphincter muscle contraction was the best in the ACT at the rat reflux esophagitis. Sepiae OS was more effective than esomeprazole in the suppression of iNOS, $TNF-{\alpha}$, and IL-6.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

따라서 저자는 海螵蟭 (Sepiae Os), 瓦楞子 (Arcae Concha), 牡蠣 (Ostreae Concha)의 항염증 효과를 규명하기 위한 세포주 실험으로, Nitric Oxide (NO) 생성량과 염증 효소인 iNOS mRNA 발현량을 측정하였고, 유의한 효과가 있었다. 이에 역류성 식도염에 대한 치료 효과를 밝히고자 역류성 식도염 생쥐 모델을 이용하여 대표적 양성자 펌프 억제제인 esomeprazole⁷⁾과 각각의 약재들을 비교하여 위식도 연결부 내의 iNOS, TNF-α, p-IκB, serotonin, 조직학적 외부형태, IL-6를 관찰하였다.

제안 방법

0.05% 3,3′-diaminobenzidine과 0.01% HCl이 포함된 0.05 M tris-HCl 완충용액 (pH 7.4)에서 발색시킨 후 hematoxylin으로 대조 염색하였다.
합성된 cDNA에 대한 유전자 증폭법은 바이오니아사에서 제시하는 primer를 혼합하여 94℃에서 30초, annealing을 위해 55∼60℃에서 30초 및 extension을 위해 70℃에서 30초 조건에서 30회를 반복 수행하였다. Agarose gel 1%에서 100 V 전압으로 30분간 전기영동하고, UV 하에서 EtBr을 통해 검출되는 양상을 CCD 카메라로 기록하고 intensity를 증폭량으로 정의 하였다. 시험회수는 3회 이상의 반복실험을 통해 평균값과 표준오차를 구하였다.
vascular rinse와 10% 중성 포르말린용액 (neutral buffered formalin : NBF)으로 심장관류 고정을 실시하였다. 위식도 연결부를 적출한 후 실온에서 24시간동안 10% NBF에 고정하였다.
海螵蟭 (200 ㎎/㎏), 瓦楞子 (200 ㎎/㎏), 牡蠣 (200 ㎎/㎏) 그리고 esomeprazole (40 ㎎/㎏)을 14일 동안 경구 투여 하였으며, 수술 1시간 전에 마지막 약물투여를 시행했다. Nakamura 등8)의 방법을 이용한 역류성 식도염을 유발하였는데, 수술은 24시간 전부터 절식시킨 실험 생쥐를 sodium pentobarbital로 마취시킨 후 복강을 열고 위의 위바닥과 날문 쪽을 실크실로 결찰 시켰다.
海螵蟭 (Sepiae Os), 瓦楞子 (Arcae Concha), 牡蠣 (Ostreae Concha)가 역류성 식도염에 미치는 효과를 알아보고자, 세포주 실험을 시행하고, 위의 위바닥과 날문부 결찰로 유발된 역류성 식도염 생쥐 모델을 이용하여 위식도 연결부 내의 iNOS, TNF-α, p-IκB, serotonin, 조직학적 외부형태, IL-6를 관찰 하였다.
海螵蟭, 瓦楞子, 牡蠣가 NO의 생성능에 미치는 영향분석은 배양액 내의 nitrite 농도를 griess 반응을 이용하여 측정하였다. 총 세포수 2.
각 군의 표본에서 임의로 선정된 부위를 ×400배율에서 촬영한 다음 positive pixels/20,000,000 pixels로 영상 분석하였다.
Mayer’s hematoxylin에 5분간 핵 염색한 후 phloxine 용액 30분간 반응시켰다. 그 다음 tartrazine 용액에서 분별 후 광학현미경 (BX 60, Olympus, Japan)으로 관찰하였다.
오리엔트 (대한민국)에서 분양 받은 태령 7주된 Balb/C 수컷 생쥐를 무균사육장치 내에서 2주일 동안 적응시킨 후 체중 20 g된 생쥐를 선별하여 사용하였다. 대조군 (Ctrl군), 역류성 식도염 유발군 (GE군), esomeprazole 투여 후 역류성 식도염 유발군 (MT군), 海螵蟭 투여 후 역류성 식도염 유발군 (SOT군), 瓦楞子 투여 후 역류성 식도염 유발군 (ACT군), 牡蠣 투여 후 역류성 식도염 유발군 (OCT군) 으로 나누었으며, 각 군에 각 10마리씩 배정하였다. 실험기간 동안 고지방식이 (fat, 60%; carbohydrate, 20%; protein, 20%; DIO DIET, USA)를 자유 섭식하였다.
5, 1, 2, 3 ㎎/㎖)로 첨가해서 24시간 배양하였다. 대조군으로는 무처리된 배양조건을 사용하였다.
. 따라서 저자는 海螵蟭 (Sepiae Os), 瓦楞子 (Arcae Concha), 牡蠣 (Ostreae Concha)의 효과를 규명하기 위한 세포주 실험을 시행하여, 평활근 이완과 수축 약화에 관여하는 NO 생성량과^28-30) 전염증 효소의 전사인자인 iNOS mRNA 발현량을 측정하였다²⁷⁾.
Nakamura 등8)의 방법을 이용한 역류성 식도염을 유발하였는데, 수술은 24시간 전부터 절식시킨 실험 생쥐를 sodium pentobarbital로 마취시킨 후 복강을 열고 위의 위바닥과 날문 쪽을 실크실로 결찰 시켰다. 봉합 24시간 후 실험동물을 희생시켜 위식도 연결부 (gastroesophageal junction. GEJ)를 절취하여 실험에 이용하였다. 한편 위식도 연결부 주변부 외부형태의 변화 관찰을 위해 Steroscope (Olympus, Japan)로 ×4배율로 촬영하였다.
동량의 isopropanol을 첨가하여 동일 원심분리과정을 반복하여 핵산침전을 유도하고, 침전물만을 건조하여 초 순수물에 녹여 사용하였다. 분리된 RNA (1 ㎍) 와 oligi-(dt) primer, lmprom-Ⅱ reverse transcriptase를 이용하여 25℃에서 10분, 42℃에서 60분, 70℃에서 15분 조건으로 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA에 대한 유전자 증폭법은 바이오니아사에서 제시하는 primer를 혼합하여 94℃에서 30초, annealing을 위해 55∼60℃에서 30초 및 extension을 위해 70℃에서 30초 조건에서 30회를 반복 수행하였다.
배양이 완료된 후 상등액은 동량의 griess 시약(10 ㎎/㎖ 의 sulfanilamide+1㎎/㎖의 naphtylendiamine dihydrochloride, 1:1)을 암소에서 10분간 반응시키고, 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포 배양액 내 NO의 농도는 sodium nitrite의 농도별 표준곡선과 비교하여 산출하였다.
식도 점막내의 염증지표인 IL-6 활성을 조절하기위해 면역조직화학을 실시하였다. GE군에서는 높은 IL-6 양성반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 1358% 증가한 것으로 측정되었다.
대조군 (Ctrl군), 역류성 식도염 유발군 (GE군), esomeprazole 투여 후 역류성 식도염 유발군 (MT군), 海螵蟭 투여 후 역류성 식도염 유발군 (SOT군), 瓦楞子 투여 후 역류성 식도염 유발군 (ACT군), 牡蠣 투여 후 역류성 식도염 유발군 (OCT군) 으로 나누었으며, 각 군에 각 10마리씩 배정하였다. 실험기간 동안 고지방식이 (fat, 60%; carbohydrate, 20%; protein, 20%; DIO DIET, USA)를 자유 섭식하였다. 본 연구과정은 동국대학교 IACUC 승인을 받아 시행하였고 (IACUC number: 2015-005), 실험실 동물의 관리와 사용에 대해서는 NIH 가이드라인에 따랐다.
역류성 식도염 유도 생쥐 모델에서 식도하부조임근 수축 조절 평가를 위해 평활근 수축에 관여하는 신경물질인 serotonin 등을 면역조직화학법을 통해 관찰하였다. enterochromaffin cells에서 분비되는 Serotonin (5-hydroxytryptamine; 5-HT)은 내장신경체계에 중요한 신경전달물질이며, 위산과다에 의해 감소된다⁴⁰⁾.
세포는 37℃, 5% CO2incubator(Sanyo,Japan)에서 10% Fetal Bovine Serum (Sigma, USA)가 함유된 Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM, Welgin, Korea)을 사용하여 배양하였다. 오염방지를 위해 항생제로 100 unit/㎖ penicillin (Sigma, USA), 100 ㎍/㎖ streptomycin (Gibco/BRL, USA)을 첨가하였다. 실험과정의 모든 세포는 70∼80% 정도의 밀도로 계대 배양하여 준비하였다.
위 점막내 NO 생성조절 평가를 위해 iNOS을, iNOS 발현과 관련된 전염증효소의 조절평가를 위해 TNF-α 와 p-IκB를, 내분비신경물질관련 식도하부조임근 수축 조절 평가를 위해 serotonin 등을 면역조직화학법을 통해 관찰하였다.
이에 역류성 식도염에 대한 치료 효과를 밝히고자 역류성 식도염 생쥐 모델을 이용하여 대표적 양성자 펌프 억제제인 esomeprazole7)과 각각의 약재들을 비교하여 위식도 연결부 내의 iNOS, TNF-α, p-IκB, serotonin, 조직학적 외부형태, IL-6를 관찰하였다.
이에 저자는 역류성 식도염 생쥐 모델을 이용하여 위식도 접합부(GEJ)내 NO 생성조절 평가를 위해 iNOS를, iNOS 발현과 관련된 전염증효소의 조절평가를 위해 TNF-α 와 p-IκB를 면역조직화학법을 통해 측정하였다.
전염증 cytokine인 NF-κB 활성 변화를 조사하기 위해 p-IκB를 이용한 면역조직화학을 실시하였다.
전염증 cytokine인 TNF-α 활성 변화를 조사하기 위해 면역조직화학을 실시하였다.
진단은 식도내압 측정으로 LES pressure의 저하를 확인하고, 24 hrs ambulatory ph monitoring(ph<4)으로 위 내용물이 역류하는 것을 확인하며, 식도 내시경에서는 식도점막의 발적, 미란, 궤양을 확인한다.
총 세포수 2.5× 10⁵/ml를 6 well plate 에 분주하여 세포를 부착시키고, 100 ng/㎖의 LPS와 약재 추출물을 농도별 (0.5, 1, 2, 3 ㎎/㎖)로 첨가해서 24시간 배양하였다.
총 세포수 2.5× 10⁵/㎖를 24 well plate 에 분주하여 세포를 부착시키고, 100 ng/㎖의 LPS와 약재 추출물을 농도별(0.5, 1, 2, 3 ㎎/㎖)로 첨가해서 24시간 배양하였다.
총 세포수 5×10⁶/㎖를 96well plate에 분주하여 세포를 부착시키고, 100ng/㎖의 LPS와 海螵蟭, 瓦楞子, 牡蠣 추출물을 농도별(0.1, 0.5, 1, 2, 3 ㎎/㎖)로 첨가해서 24시간 배양하였다.
진단은 식도내압 측정으로 LES pressure의 저하를 확인하고, 24 hrs ambulatory ph monitoring(ph<4)으로 위 내용물이 역류하는 것을 확인하며, 식도 내시경에서는 식도점막의 발적, 미란, 궤양을 확인한다. 치료는 우선 생활습관을 개선하고, 다음으로 약물요법을 실시한다. 그래도 치료가 안 되면 외과적 요법을 실시한다.
평활근 수축에 관여하는 신경물질인 serotonin 활성을 조사하기 위해 면역조직화학을 실시하였다. GE군에서는 높은 serotonin 양성 반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 244% 증가한 것으로 측정되었다.
평활근 이완을 유도하는 NO 생성에 관여하는 iNOS의 GEJ내 생성 변화를 조사하기 위해 면역조직 화학법을 실시하였다. GE군에서는 높은 iNOS 양성반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 919% 증가한 것으로 측정되었다.
실험에 사용된 海螵蟭, 牡蠣는 신흥제약(여주, 한국)에서 구입하였고, 瓦楞子는 삼홍 건재약업사(서울, 한국)에서 구입하였으며, 역류성 식도염 유발 전 14일동안 200 ㎎/㎏씩 구강투여 하였다. 한방약제에 대한 대조약물인 esomeprazole은 넥시움정 40㎎(한국 아스트라제네카, 한국)을 선정하고 역류성 식도염 유발전 14일 동안 40㎎/㎏씩 구강투여 하였다.
한편 위식도 연결부 주변부 외부형태의 변화 관찰을 위해 Steroscope (Olympus, Japan)로 ×4배율로 촬영하였다.
합성된 cDNA에 대한 유전자 증폭법은 바이오니아사에서 제시하는 primer를 혼합하여 94℃에서 30초, annealing을 위해 55∼60℃에서 30초 및 extension을 위해 70℃에서 30초 조건에서 30회를 반복 수행하였다.

대상 데이터

세포는 37℃, 5% CO2incubator(Sanyo,Japan)에서 10% Fetal Bovine Serum (Sigma, USA)가 함유된 Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM, Welgin, Korea)을 사용하여 배양하였다.
실험에 사용된 海螵蟭, 牡蠣는 신흥제약(여주, 한국)에서 구입하였고, 瓦楞子는 삼홍 건재약업사(서울, 한국)에서 구입하였으며, 역류성 식도염 유발 전 14일동안 200 ㎎/㎏씩 구강투여 하였다. 한방약제에 대한 대조약물인 esomeprazole은 넥시움정 40㎎(한국 아스트라제네카, 한국)을 선정하고 역류성 식도염 유발전 14일 동안 40㎎/㎏씩 구강투여 하였다.
실험에 사용한 마우스의 RAW 264.7 cell은 KCLB (Korean Cell Line Bank)에서 구입하였다. 세포는 37℃, 5% CO2incubator(Sanyo,Japan)에서 10% Fetal Bovine Serum (Sigma, USA)가 함유된 Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM, Welgin, Korea)을 사용하여 배양하였다.
오리엔트 (대한민국)에서 분양 받은 태령 7주된 Balb/C 수컷 생쥐를 무균사육장치 내에서 2주일 동안 적응시킨 후 체중 20 g된 생쥐를 선별하여 사용하였다. 대조군 (Ctrl군), 역류성 식도염 유발군 (GE군), esomeprazole 투여 후 역류성 식도염 유발군 (MT군), 海螵蟭 투여 후 역류성 식도염 유발군 (SOT군), 瓦楞子 투여 후 역류성 식도염 유발군 (ACT군), 牡蠣 투여 후 역류성 식도염 유발군 (OCT군) 으로 나누었으며, 각 군에 각 10마리씩 배정하였다.

데이터처리

면역조직화학의 결과는 Image Pro Plus (Media cybernetics, USA)를 이용한 영상분석을 통해 수치화 (means ± standard error) 했다.
본 실험의 통계는 SPSS 24 (SPSS Inc., USA)를 이용하였으며, Kruskal-Wallis test 시행을 통해 유의성 (p<0.05)을 검정하고 Bonferroni Correction Method로 사후 검정하였다.
Agarose gel 1%에서 100 V 전압으로 30분간 전기영동하고, UV 하에서 EtBr을 통해 검출되는 양상을 CCD 카메라로 기록하고 intensity를 증폭량으로 정의 하였다. 시험회수는 3회 이상의 반복실험을 통해 평균값과 표준오차를 구하였다.

이론/모형

실험기간 동안 고지방식이 (fat, 60%; carbohydrate, 20%; protein, 20%; DIO DIET, USA)를 자유 섭식하였다. 본 연구과정은 동국대학교 IACUC 승인을 받아 시행하였고 (IACUC number: 2015-005), 실험실 동물의 관리와 사용에 대해서는 NIH 가이드라인에 따랐다.
세포주 실험을 위한 세포 생존률 평가는 tetrazoliumbased colorimetric assay (MTT assay)법을 통해 이루어졌다. 총 세포수 5×10⁶/㎖를 96well plate에 분주하여 세포를 부착시키고, 100ng/㎖의 LPS와 海螵蟭, 瓦楞子, 牡蠣 추출물을 농도별(0.
염증효소인 induce NO synthase (iNOS) mRNA 발현에 미치는 영향을 조사하기 위해 역전사효소와 유전자 증폭방법을 통해 분석하였다. 총 세포수 2.
위식도 연결부내 근육조직의 변화를 관찰하기 위해 phloxine-tartrazine 염색법을 실시하였다. Mayer’s hematoxylin에 5분간 핵 염색한 후 phloxine 용액 30분간 반응시켰다.

성능/효과

1. 세포주내 NO 생성 억제 조절 효과는 海螵蟭군, 瓦楞子군, 牡蠣군에서 NO 생성량과 iNOS mRNA 발현량의 감소는 3.0㎎/㎖ 에서 가장 많이 감소하는 농도 의존적 감소를 보였다. LPS 처리군 기준으로 海螵蟭군, 瓦楞子군, 牡蠣군 모두 농도 2.
2. iNOS 생성 억제 효과는 海螵蟭군, 牡蠣군, 瓦楞子군, esomeprazole군 순이었다. 海螵蟭군과 牡蠣군이 역류성 식도염 유발군에 비해 유의성있는 효과를 보였으며, 海螵蟭군은 esomeprazole군 보다도 유의한 효과를 보였다.
3. TNF-α 생성 억제 효과는 海螵蟭군, 瓦楞子군, 牡蠣군, esomeprazole군 순이었다.
4. p-IκB의 생성 억제 효과는 海螵蟭군, esomeprazole군, 牡蠣군, 瓦楞子군 순이었다.
5. Serotonin 양성반응은 瓦楞子군, esomeprazole군, 牡蠣군이 역류성 식도염 유발군에 비해 유의성 있는 효과를 보였으며, 瓦楞子군은 海螵蟭군 보다도 유의한 효과를 보였다.
6. 하부식도 조임근의 손상과 식도 각질 및 점막세포사이 이음 손상에 따른 세포사이 간극이 海螵蟭군, 瓦楞子군, 牡蠣군, esomeprazole군에서 역류성 식도염 유발군보다 적게 관찰되었다.
7. IL-6 양성반응은 海螵蟭군, 牡蠣군, 瓦楞子군, esomeprazole군 순으로 적게 나타났다. 螵蟭군, 牡蠣군이 역류성 식도염 유발군에 비해 유의성있는 효과를 보였으며, 海螵蟭군은 esomeprazole군 보다도 유의한 효과를 보였다.
식도 점막내의 염증지표인 IL-6 활성을 조절하기위해 면역조직화학을 실시하였다. GE군에서는 높은 IL-6 양성반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 1358% 증가한 것으로 측정되었다. 치료약물 투여 군에서는 GE군에 비해 낮은 양성반응을 보였는데, SOT군 (69%), OCT군 (58%), ACT군 (46%) 그리고 MT군 (36%) 순으로 감소되었다 (Fig.
GE군에서는 높은 TNF-α 양성반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 5253% 증가한 것으로 측정되었다.
평활근 이완을 유도하는 NO 생성에 관여하는 iNOS의 GEJ내 생성 변화를 조사하기 위해 면역조직 화학법을 실시하였다. GE군에서는 높은 iNOS 양성반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 919% 증가한 것으로 측정되었다. 치료약물 투여군에서는 GE군에 비해 낮은 양성을 보였는데, SOT군 (88%), OCT군 (81%), ACT (76%) 그리고 MT군 (67%) 순으로 감소되었다 (Fig.
GE군에서는 높은 p-IκB 양성반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 2154% 증가한 것으로 측정되었다.
평활근 수축에 관여하는 신경물질인 serotonin 활성을 조사하기 위해 면역조직화학을 실시하였다. GE군에서는 높은 serotonin 양성 반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 244% 증가한 것으로 측정되었다. 치료약물 투여군에서는 GE군에 비해 더 많은 serotonin이 생산되어 높은 양성반응을 보였는데, ACT군 (472%), MT군 (303%), OCT군 (296%) 그리고 SOT군 (207%) 순으로 증가되었다(Fig.
GE군의 GEJ에서 하부식도 조임근의 일부가 유실되었고, 식도 점막의 첨단부 (apical surface)에서 식도 각질과 점막세포사이 이음 손상에 따른 세포사이 간극이 확인되었다. 치료약물 투여 군에서는 이러한 손상이 적었다 (Fig.
0㎎/㎖ 에서 가장 많이 감소하는 농도 의존적 감소를 보였다. LPS 처리군 기준으로 海螵蟭군, 瓦楞子군, 牡蠣군 모두 농도 2.0㎎/㎖ 이상에서 유의한 효과를 보였다.
LPS 처리된 RAW 264.7 세포에서 NO 생성은 101%로 증가한 반면, 瓦楞子 처리된 RAW 264.7 세포에서는 유의성 있는 농도-의존적 감소를 보였다. 瓦楞子 0.
LPS 처리된 RAW 264.7 세포에서 NO 생성은 99%로 증가한 반면, 牡蠣 처리된 RAW 264.7 세포에서는 유의성 있는 농도-의존적 감소를 보였다. 牡蠣 0.
약물투여군에서는 정도의 차이는 있으나 GE군에 비해 감소되었다. SOT군이 가장 완화된 것으로 관찰되었다 (Fig. 9.).
Serotonin 증가는 瓦楞子군, esomeprazoel군, 牡蠣군이 역류성 식도염 유발군에 비해 serotonin이 효과적으로 증가였는데, 瓦楞子군은 海螵蟭군 보다 더 우수하였다.
iNOS 억제 및 TNF-α 억제는 海螵蟭군, 牡蠣군, 瓦楞子군, esomeprazole군 순서로 우수하였고, 海螵蟭군과 牡蠣군이 역류성 식도염 유발군에 비해 우수한 억제 효과를 보였으며, 海螵蟭군은 esomeprazole군보다 억제 효과가 우수하였다.
p-IκB 억제는 海螵蟭군, esomeprazole군, 牡蠣군, 瓦楞子군 순서로 우수하였고, 海螵蟭군와 esomeprazole군이 대조군에 비해 우수한 억제 효과를 보였으며, 海螵蟭군은 瓦楞子군보다 억제 효과가 우수하였다.
海螵蟭瓦楞子 및 牡蠣 모두 세포주 실험에서 NO 생성량과 iNOS mRNA 발현량의 감소는 3.0㎎/㎖ 에서 가장 많이 감소하는 농도 의존적 감소를 보였으며, 2.0㎎/㎖, 1.0㎎/㎖, 0.5㎎/㎖ 순이었다. LPS 처리군 기준으로 농도 2.
p-IκB의 생성 억제 효과는 海螵蟭군, esomeprazole군, 牡蠣군, 瓦楞子군 순이었다. 海螵蟭군과 esomeprazole군이 역류성 식도염 유발군에 비해 유의성 있는 효과를 보였으며, 海螵蟭군은 瓦楞子군 보다도 유의한 효과를 보였다.
iNOS 생성 억제 효과는 海螵蟭군, 牡蠣군, 瓦楞子군, esomeprazole군 순이었다. 海螵蟭군과 牡蠣군이 역류성 식도염 유발군에 비해 유의성있는 효과를 보였으며, 海螵蟭군은 esomeprazole군 보다도 유의한 효과를 보였다.
iNOS 생성 억제 효과는 海螵蟭군, 牡蠣군, 瓦楞子군, esomeprazole군 순이었다. 海螵蟭군과 牡蠣군이 역류성 식도염 유발군에 비해 유의성있는 효과를 보였으며, 海螵蟭군은 esomeprazole군 보다도 유의한 효과를 보였다.
IL-6 양성반응은 海螵蟭군, 牡蠣군, 瓦楞子군, esomeprazole군 순으로 적게 나타났다. 螵蟭군, 牡蠣군이 역류성 식도염 유발군에 비해 유의성있는 효과를 보였으며, 海螵蟭군은 esomeprazole군 보다도 유의한 효과를 보였다.
위식도 연결부 손상완화 작용을 연구하기 위해 외부형태를 관찰 하였는데, 역류성 식도염 유발군에서는 심한 출혈성 찰과가 관찰되었고, 약물 투여군 에서는 정도의 차이가 있으나 상대적으로 적게 관찰되었으며, 이중 海螵蟭군의 손상이 가장 적었다. 광학 현미경을 이용한 관찰에서는 역류성 식도염 유발군의 위식도 연결부에서 하부식도 조임근의 일부가 유실되었고, 식도 점막의 첨단부에서 식도 각질과 점막세포사이 이음 손상에 따른 세포사이 간극이 확인되었다. 치료약물 투여군에서는 이러한 손상이 적었다.
그 기전은 각각의 약재가 NO 생성을 감소시켜 평활근의 이완을 막고^46-48), 수축에 관여하는 Serotonin 분비를 촉진시켜⁴²⁾ 하부식도 조임근의 기능을 원활히 하기 때문으로 사료된다. 또한, 대표적 양약 처방제인 esomeprazole 과 비교하여도 더 우수한 효과를 나타내었다. 꾸준히 증가하고 있는 역류성 식도염의 치료에 있어, 현재 중국과 일본에서도 PPI제제 보다 우수한 대체제 개발을 위하여 다양한 방법으로 연구되고 있다⁴⁹⁾.
식도 점막내의 염증 지표인 IL-6 활성을 조사하였는데, 역류성 식도염 유발군에서는 가장 높은 IL-6 양성반응을 보였으며, esomeprazole군, 瓦楞子군, 牡蠣군, 海螵蟭군 순으로 양성반응을 보였다. 역류성 식도염 유발군에 비해 海螵蟭군, 牡蠣군이 유의하게 높았으며, 海螵蟭군은 esomeprazole군 보다도 유의한 효과를 보였다.
식도 점막내의 염증 지표인 IL-6 활성을 조사하였는데, 역류성 식도염 유발군에서는 가장 높은 IL-6 양성반응을 보였으며, esomeprazole군, 瓦楞子군, 牡蠣군, 海螵蟭군 순으로 양성반응을 보였다. 역류성 식도염 유발군에 비해 海螵蟭군, 牡蠣군이 유의하게 높았으며, 海螵蟭군은 esomeprazole군 보다도 유의한 효과를 보였다.
위식도 연결부 손상완화 작용을 연구하기 위해 외부형태를 관찰 하였는데, 역류성 식도염 유발군에서는 심한 출혈성 찰과가 관찰되었고, 약물 투여군 에서는 정도의 차이가 있으나 상대적으로 적게 관찰되었으며, 이중 海螵蟭군의 손상이 가장 적었다. 광학 현미경을 이용한 관찰에서는 역류성 식도염 유발군의 위식도 연결부에서 하부식도 조임근의 일부가 유실되었고, 식도 점막의 첨단부에서 식도 각질과 점막세포사이 이음 손상에 따른 세포사이 간극이 확인되었다.
이상의 결과로 海螵蟭, 瓦楞子, 牡蠣는 위의 위바닥과 날문부 결찰로 유발된 생쥐의 역류성 식도염에 대해 위식도 연결부 점막 손상을 방어하며, 염증을 완화시키고, 하부조임근 손상을 치료하는 효과가 있는 것으로 관찰되었다. 海螵蟭, 瓦楞子, 牡蠣는 현재 주된 치료약제인 PPI제제를 대체하여 향후 역류성 식도염의 치료에 응용할 수 있을 것으로 생각한다.
이상의 연구로 海螵蟭, 瓦楞子, 牡蠣는 위의 위바닥과 날문부 결찰로 유발된 생쥐의 역류성 식도염에 대해 위식도 연결부 점막 손상을 방어하며, 염증을 완화시키고, 하부 식도 조임근 손상을 치료하는 효과가 있었다. 그 기전은 각각의 약재가 NO 생성을 감소시켜 평활근의 이완을 막고^46-48), 수축에 관여하는 Serotonin 분비를 촉진시켜⁴²⁾ 하부식도 조임근의 기능을 원활히 하기 때문으로 사료된다.
7 세포에서의 iNOS mRNA 발현은 증가하였는데, 牡蠣 처리 후 농도-의존적으로 발현이 감소되었다. 즉, LPS 자극 시 발현되는 iNOS mRNA 발현량에 비해 0.5 ㎎/㎖에서 10.7%, 1.0 ㎎/㎖에서 20.2%, 2.0 ㎎/㎖에서 72.2%, 3.0 ㎎/㎖에서 86.0%가 감소하였다 (Fig. 4).
7 세포에서의 iNOS mRNA 발현은 증가하였는데, 瓦楞子 처리 후 농도-의존적으로 발현이 감소되었다. 즉, LPS 자극 시 발현되는 iNOS mRNA 발현량에 비해 0.5 ㎎/㎖에서 6.8%, 1.0 ㎎/㎖에서 22.8%, 2.0 ㎎/㎖에서 63.9%, 3.0 ㎎/㎖에서 93.1%가 감소하였다 (Fig. 3).
7 세포에서의 iNOS mRNA 발현은 증가하였는데, 海螵蟭 처리 후 농도-의존적으로 발현이 감소되었다. 즉, LPS 자극시 발현되는 iNOS mRNA 발현량에 비해 0.5 ㎎/㎖에서 8.5%, 1.0 ㎎/㎖에서 20.0%, 2.0 ㎎/㎖에서 53.5%, 3.0 ㎎/㎖에서 91.9%가 감소하였다 (Fig. 2).
GE군에서는 높은 IL-6 양성반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 1358% 증가한 것으로 측정되었다. 치료약물 투여 군에서는 GE군에 비해 낮은 양성반응을 보였는데, SOT군 (69%), OCT군 (58%), ACT군 (46%) 그리고 MT군 (36%) 순으로 감소되었다 (Fig. 10).
GE군에서는 높은 p-IκB 양성반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 2154% 증가한 것으로 측정되었다. 치료약물 투여 군에서는 GE군에 비해 낮은 양성반응을 보였는데, SOT군 (91%), MT군 (85%), OCT군 (83%) 그리고 ACT군 (81%) 순으로 감소되었다 (Fig. 7).
GE군에서는 높은 TNF-α 양성반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 5253% 증가한 것으로 측정되었다. 치료약물 투여 군에서는 GE군에 비해 낮은 양성반응을 보였는데, SOT군 (92%), ACT군 (86%), OCT군 (69%) 그리고 MT군 (68%) 순으로 감소되었다(Fig. 6).
GE군에서는 높은 iNOS 양성반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 919% 증가한 것으로 측정되었다. 치료약물 투여군에서는 GE군에 비해 낮은 양성을 보였는데, SOT군 (88%), OCT군 (81%), ACT (76%) 그리고 MT군 (67%) 순으로 감소되었다 (Fig. 5).
GE군에서는 높은 serotonin 양성 반응을 보였으며, 영상분석 결과 대조군에 비해 양성반응이 244% 증가한 것으로 측정되었다. 치료약물 투여군에서는 GE군에 비해 더 많은 serotonin이 생산되어 높은 양성반응을 보였는데, ACT군 (472%), MT군 (303%), OCT군 (296%) 그리고 SOT군 (207%) 순으로 증가되었다(Fig. 8).

후속연구

이상의 결과로 海螵蟭, 瓦楞子, 牡蠣는 위의 위바닥과 날문부 결찰로 유발된 생쥐의 역류성 식도염에 대해 위식도 연결부 점막 손상을 방어하며, 염증을 완화시키고, 하부조임근 손상을 치료하는 효과가 있는 것으로 관찰되었다. 海螵蟭, 瓦楞子, 牡蠣는 현재 주된 치료약제인 PPI제제를 대체하여 향후 역류성 식도염의 치료에 응용할 수 있을 것으로 생각한다.
꾸준히 증가하고 있는 역류성 식도염의 치료에 있어, 현재 중국과 일본에서도 PPI제제 보다 우수한 대체제 개발을 위하여 다양한 방법으로 연구되고 있다⁴⁹⁾. 향후 海螵蟭, 瓦楞子, 牡蠣 등의 항염증작용과 하부 식도 조임근 강화작용의 추가적인 연구를 통해 PPI제제 보다 우수한 한방약재 개발이 가능할 것으로 보인다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	위식도 역류질환이란 무엇인가?	위식도 역류질환(GERD: gastroesophageal reflux disease)은 위산이 식도내로 역류하여 발생하는 궤양이나 미란 등의 조직학적 병변뿐만 아니라, 가슴 쓰림이나 산 역류와 같은 전형적인 증상과 흉통, 만성기침, 천식, 목이물감, 쉰 목소리 등 비전형적인 증상을 포괄하는데 이중에서 식도에 염증이나 궤양 등의 병변이 발생한 것을 역류성 식도염이라 한다1). 위식도 역류질환의 유병률은 최근 우리나라에서도 빠르게 증가하여 2000년대 초 3.
	위식도 역류질환의 원인은 무엇인가?	위식도 역류질환의 원인은 다인성으로 위식도 역류가 지나치게 많거나, 식도의 청소능이 저하된 경우, 역류된 위액의 산성도가 증가된 경우, 식도 점막의 민감도가 증가한 경우에 발생한다. 정신적 요소도 원인이 될 수 있으며, 하부식도 조임근과 관련된 병태생리학적 요소들이 주 원인이다4).
	위식도 역류질환의 주된 치료법은 무엇이 있는가?	주된 치료법으로는 양성자 펌프 억제제, 히스타민 수용체 길항제, 제산제, 위장운동 촉진제, 항 우울제 등의 약물요법 및 외과적 수술요법 등이 있는데, 치료 중단 후 재발되거나 장기간 치료 할 경우 심각한 부작용이 보고되고있다. 기타 보완할 수 있는 방법으로 하부식도 조임근 작용제나 점막 보호제도 고려되고 있다5).

참고문헌 (49)

National Professors of Bikye Internal Medicine. Bikye Internal Medicine. Seoul:Kunja Publisher. 2009:96, 314-318.
Cho YS, Choi MG, Jeong JJ. Prevalence and clinical spectrum of gastroesophageal reflux: a population-based study in Asan-si, Korea. Am J Gastroenterol. 2005;100:747-753.

상세보기
Lee D, Lee KJ, Kim KM, Lim SK. Prevalence of asymptomatic erosive esophagitis and factors associated with symptom presentation of erosive esophagitis. Scand J Gastroenterol. 2013;48:906-912

상세보기
Kim JH, Kim JB, Kim SY, Kim SE, Kim YS, Sung HY, et al. Current Issues on Gastroesophageal Reflux Disease. Korean J Gastroenterol. 2014;64:127-128.

상세보기
Jung HK, Hong SJ, Jo YJ, Jeon SW, Cho YK, Lee KJ, et al. Updated guidelines 2012 for gastroenterol reflux disease. Korean J Gastroenterol. 2012;60(4):195-218.

상세보기
National Professors of Herbology. Herbology. Seoul:Youngleem Publisher. 1998:475, 513, 632.
Anderson T, Rohss K, Bredberg E, Hassan-Alim M. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of esomeprasole, the S-isomer of omeprasole. Aliment Pharmacol Ther. 2001;15:1563-1569.

상세보기
Nakamura k, Ozawa Y, Furuta Y, Miyazaki H. Effects of sodiumpolyacrylate(PANa) on acute esophagitis by gastric juice in rats. Japan. J. Pharmacol. 1982;32:445-456.
Sin GT. Steps to Internal Medicine 6 Gastrodigestive Disease. Seoul: Jungdam Publisher. 2002:54-55.
Horn J. The proton-pump inhibitors: similarities and differences. Clinther. 2000;22:266-280.

상세보기
Kin HJ, Leem SY, Gwak MA, Kim DJ, Byeon JS. Effects of Yijintang-gamibang on Reflux Esophagitis Induced by Pylorus and Forestomach Ligition in Rat. J of Internal Korean Medicine. 2010;31(1):128-141.
Heo JI. Protective Effects of Yijin-tang-gamib-molyeo Aqueous Extracts on Reflux Esophagitis[Ph.D. Dissertation]. Daegu: Daegu Haany University; 2011.
Dent J. Pharmacology of esomeprazole and comparisons with omeprazole. Aliment Pharmacol Ther. 2003;17(suppl 1):5-9.

상세보기
Pharmscore. Available at: http://www.pharmscore.com/news/digestive_pharms/treatarticles/esomepr1.html. Accessed June 21, 2016
Fass R, Dickman R. Non erosive reflux disease. GI Motility online. 2006;doi:10.1038/gimo42.
Fauci. Harrison's Internal Medicine. Seoul: MIP Publisher. 2010:2234.
Park K, Gwak MA, Kim DJ, Byeon JS. Protective Effects of Yijin-tang-gamibang Aqueous Extracts on Reflux Esophagitis Mediated by Antioxidant Defense Systems. Korean J of Oriental Physiology and Pathology. 2010;24(3):416-425.
Jang MW, Leem SW. Experimental Study for Effect of Banhasasim-tang on Mice with Reflux Esophagitis. J of Internal Korean Medicine. 2013;34(4):362-374.
Kim MY, Sin YO, Lee JY, Lee AR, Sin SH, Kwon OJ, et al. Improving Effect of a Combined Extract of Rhei Rhizoma and Glycyrrhizae Rhizoma through Anti-oxidative Stress in Reflux Esophagitis rats. Korea J of Herbology. 2015;30(4):37-44.
Kim DJ, No SS. Effect on Acute reflux Esophagitis by Evodiae Fructus Aquous Extract. Korea J of Herbology. 2012;27(1):51-58.

원문보기 상세보기
Lee YJ, Park JH, No SS. Effects on Rats with Reflux Esophagitis Treated with Lonicerae Flos Extract. Korean J of Oriental Physiology and Pathology. 2010;24(6):970-975.
Chinese Medicine Dictionary Publish Members. Chinese Medicine Dictionary. Seoul: Jungdam Publisher. 1997:1317-1320, 3123-3124, 4722-4726.
Lee NK, Yun HI, Park SC, Park JI, Jo MH. Effects of heat-treated alumen , halloysitum rubrum and os sepiae in experimentally induced stomach ulcer in rats. J of Applied Pharmacology. 1997;5:246-252.
Kim TG, Lee YH, Choi YS, Byeon JS, Park SD. The Effects of ShogunJungtang-ga-younggol . morea on Gastric Ulcer. J of Internal Korean Medicine. 2001;22(1):13-20.
Patk SM, Jo YG, Kee JR, Lee YC, Kim HJ, Kwon YK, et al. Inhibitory Effect of Oyster Conchioloin on Pro-inflammatory Mediator in Lipopolysaccharide;Activated Raw 264.7 Cells Korean J of Oriental Physiology and Pathology. 2008;22(4):878-883.
Lee YT, Choi BT, Choi Yh, Kang KH. Development of Health Assistances for Anti Stress used with Ostreae Concha. Korean J of Oriental Physiology and Pathology. 2006;20(6):1604-1611.
Itzkowitz SH, Yio X. Inflammation and cancer IV. Colorectal cancer in inflammatory bowel disease: the role of inflammation. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2004;287(1):G7-17.

상세보기
Stamler JS, Singel DJ, Loscalzo J. Biochemistry of nitric oxide and its redox activated forms. Science. 1992;258:1898-1902.

상세보기
De May JG, Vanhoutte PM. Rolo of the intima in cholinergic and purinergic relaxation of isolated canin femoral arteries. Journal of Physiology. 1981;316:347-355.

상세보기
Furchgott RF, Zawadzki JV. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine. Nature. 1980;288:373-376.

상세보기
Brennan FM, Maini RN, Feldmann M. Cytokine expression in chronic inflammatory disease. Br Med Bull. 1995;51(2):368-84.

상세보기
Xie QW, Kashiwabara Y, Nathan C. Role of transcription factor NF-kappa B/Rel in induction of nitric oxide synthase. J Biol Chem. 18; 269(7): 4705-8, 1994.

상세보기
Barnes PJ, Karin MN. Nuclear factor-kappaB: a pivotal transcription factor in chronic inflammatory diseases. Engl J Med. 10;336(15):1066-71, 1997.

상세보기
Baeuerle PA, Baltimore D. NF- ${\kappa}B$ - Ten years after. Cell. 1996;87:13-20.

상세보기
Seo WG, Pae HO, Oh GS, Chai KY, Yun YG, Kwon TO, et al. Inhibitory effect of ethyl acetate fraction from Cudrania tricuspidata on the expression of nitric oxide synthase gene in RAW 264.7 macrophages stimulated with interferon-and lipopolysaccharide. Gen Pharmacol. 2000;35:21-28.

상세보기
Seo WG, Pae HO, Oh GS, Chai KY, Kwon TO, Yun YG, et al. Inhibitory effects of methanol extracts of Cyrerus rotundus rhizomes on nitric oxide and superoxide production by murine macrophages cell line, RAW 264.7 cells. J Ethnopharmacol. 2001;76:59-64.

상세보기
Lee BG, Kim SH, Zee OP, Lee KR, Lee HY, Han JW, et al. Suppression of inducible nitric oxide synthase expression in RAW 264.7 macrophagesby two-carboline alkaloids extractes from Melia azedarach. Eur. J. Pharmacol. 2000;406:301-309.

상세보기
Lee DA, Lee JR, Kim YW, Kwon YK, Byun SH, Sin SW, et al. Inhibition of Lipopolysaccharide-Inducible Nitric Oxide Synthase, TNF- ${\alpha}$ , IL- $1{\beta}$ and COX-2 Expression by Flower and Whole Plant of Lonicera japonica. Korean J of Oriental Physiology and Pathology. 2005;19(2):481-489.
Byeon SH, Yang JH, Kim SC. Inhibitory effect of Scrophulariae Radix extract on TNF-a, IL- $1{\beta}$ , IL-6 and Nitric Oxide production in Lipopolysaccharide - activated Raw 264.7 cells. Korea J of Herbology. 2005;20(2):7-16.
Racke K, Riemann A, Schworer H, Kilbinger H. Regulation of 5-HT release from enterochromaffin cell. Behav Brain Res. 1996;73:83-7.
Morrow JD, Roberts LJ. Lipid-derived autocoides, eicosanoids and platelets-activating factor. In: Hardman JG, Limberd LE, editors. Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics. USA:McGraw Hill and Co. 2001:673.
Saegusa Y, Takeda H, Muto S, Oridate N, Nakagawa K, Sadakane C, et al. Decreased motility of the lower esophageal sphincter in a rat model of gastroesophageal reflux disease may be mediated by reductions of serotonin and acetylcholine signaling. Biol Pharm Bull. 2011;34(5):704-11.

상세보기
Tobey NA, Carson JL, Alkiek RA, Orlando RC. Dilated intercellular spaces: a morphlogical feature of acid reflux - damaged human esophageal epithelium. Gastroenterology. 1996:111(5):1200-5.

상세보기
De Hertogh G, Ectors N, Van Eyken P, Geboes K. Review article: the nature of oesophageal injury in gastro-oesophageal reflux disease. Aliment Pharmacol Ther. 2006;24(Suppl2):17-26.
Ardizzone S, Bianchi Porro G. Biologic therapy for inflammatory bowel disease. Drugs. 2005;65(16):2253-86.

상세보기
Stamler JS, Singel DJ, Loscalzo J. Biochemistry of nitric oxide and its redox activated forms. Science. 1992;258:1898-1902.

상세보기
De May JG, Vanhoutte PM. Rolo of the intima in cholinergic and purinergic relaxation of isolated canin femoral arteries. Journal of Physiology. 1981;316: 347-355.

상세보기
Furchgott RF, Zawadzki JV. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine. Nature. 1980;288:373-376.

상세보기
Han GJ, Leem JT, Kim JS, Lee JH. Analysis of the Existing Guidelines and Clinical Trials for the Development of the Guidelines of Clinical Trials with Herbal Medicinal Products for Gastroesophageal Reflux Disease(GERD). J of Internal Korean Medicine. 2016;37(1):90-108.

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증