[논문]가자(訶子) 추출물과 그 유효성분 갈산이 근분화에 미치는 영향

천성혜; 이효성; 한효상; 김기광

doi:10.6116/kjh.2019.34.2.59.

가자(訶子) 추출물과 그 유효성분 갈산이 근분화에 미치는 영향
Investigation of the effect of Terminalia chebula fruit extract and its active ingredient, gallic aicd on muscle differentiation 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.34 no.2, 2019년, pp.59 - 66

천성혜 (충남대학교 생화학과) , 이효성 (충남대학교 생화학과) , 한효상 (중부대학교 보건행정학과) , 김기광 (충남대학교 생화학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : Decrease in muscle mass and loss of muscle function due to aging are associated with various diseases. As interest in healthy aging increases, efforts to prevent and treat muscle hypoxia as an illness are increasing. Considering the physical limitations, a pharmacologic approach to the treatment of myopenia is needed. Methods : Terminalia chebula Rets has a wide range of pharmacological effects and is used as a medicinal product in traditional medicine. However, the drug effect on the treatment of muscle disorders has not been revealed. The purpose of this study was to evaluate the value of water extract of Terminalia chebula (WETC) as a therapeutic agent to relieve symptoms of muscle hypoxia. Results : WETC showed strong radical scavenging ability. In addition, WETC increased cell activity of myoblast, and we observed that WETC induces myoblast differentiation by immunoblot analysis using differentiation protein markers as well as cell morphology of myoblast. Based on these results, we examined the effect of chebulic acid, chebulagic acid, gallic acid, geraniin, and punicalagin on cell activity and differentiation of myoblasts. Gallic acid significantly increased cell activity of myoblast, and it was found to be an effective substance which not only induces myoblast differentiation but also promotes proliferation. Conclusions : We suggest that the WETC with antioxidant effect and its indicator gallic acid on cell activity, proliferation and differentiation of myoblast can be studied and developed as a food and medicine for prevention and treatment of various muscle diseases.

주제어

표/그림 (4)

그림 Figure 1. Anti-oxidant activities of the resveratrol and WETC by ABTS assay. n=3 (biological replicates). Average±S.E.M.
그림 Figure 2. Effect of WETC on the differentiation of myoblasts.
그림 Figure 3. Effect of the constituents of WETC on differentiation of myoblast.
그림 Figure 4. Effect of gallic acid on differentiation of myoblast.

AI 본문요약
AI-Helper

* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

문제 정의

이 전 연구를 통해 myoblast의 세포 생존율을 증가시키며 분화를 유도하는 WETC의 효능을 검증하였다. WETC의 구성 물질들 가운데 myoblast 세포의 세포 생존율의 증가와 분화를 유도하는 대표적인 유효물질이 무엇인지 확인하기 위한 실험을 수행하였다. Chebulic acid, chebulagic acid, gallic acid, geraniin, punicalagin은 WETC의 대표적인 구성 물질로 알려져 있다.
하지만 訶子 추출물 및 그 구성 물질과 근육의 증식과 분화와의 관련성에 대해서 연구된 바가 없다. 따라서 본 연구에서는 myoblast 세포를 이용하여 높은 항산화 효능을 가진 訶子 열수 추출물 (WETC)이 근육세포의 활성과 분화에 미치는 영향을 확인하였고, WETC의 구성 물질로 알려진 단일 화합물 가운데 근육의 증식 및 분화에 영향을 미치는 유효 물질을 조사하여 유의미한 결과를 얻었기에 이에 보고하는 바이다.
본 연구에서는 ABTS assay를 통해 WETC의 항산화 효능을 평가하였다. 항산화 효능이 잘 알려진 resveratrol을 양성 대조군으로 사용하였고, 10, 100 μM에서 각각 11.
본 연구에서는 항산화 효능을 가진 WETC가 근육의 성장 및 분화에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 먼저, myoblast에 WETC가 미치는 영향을 확인하기 위하여 증식하고 있는 생존 가능한 세포의 수와 세포 독성 또는 화학 감수성 분석용으로 보편적으로 사용되는 MTS assay를 수행하였다.
항산화 효능을 가진 WETC가 근육의 성장 및 분화에 미치는 영향을 알아보고자, WETC에 의한 myoblast의 변화를 MTS assay 통해 확인하였다. 그 결과, 0.

제안 방법

Mouse IgG에 대한 2차 antibody로는 Alexa Fluor 488-conjugated goat antibody를 사용하였고, 세포핵은 DAPI로 염색하였다. LSM 510 Live Configuration Vario Two VRGB confocal laser-scanning microscope를 통해 면역 형광을 분석하고 이미지화 하였다.
15%의 세포 생존율을 보이며 myoblast의 세포 생존율이 가장 크게증가하였다. Myooblast에 20 ㎍/ml의 농도의 다섯 가지 구성 물질을 48 h 동안 처리한 후 면역 블롯 분석을 통해 myoblast의 Pax-3/7과 Myh3 단백질 발현 변화를 확인하였다. 그 결과, chebulagic acid, gallic acid, geraniin에 의해 myoblast의 myh3 발현이 증가하며 분화를 유도하는 구성 물질을 검증하였다.
Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)를 이용하여 myoblast로부터 얻은 단백질 샘플을 분리하였다. 분리된 단백질을 nitrocellulose membrane상으로 이동시키고, non-fat dry milk를 5% 농도로 PBST에 녹인blocking buffer 와 1 h 동안 처리하여 비특이적인 항체의 결합을 억제시켰다.
Blocking buffer에 희석한 1차 antibody를 4℃에서 12 h 동안 처리한 후, 단백질과 결합하지 않은 antibody는 PBST로 세척하였다. Super Signal system을 이용하여 Horseradish peroxidase-conjugated secondary antibodies에 결합하여 얻어진 신호를 확인하였 다. 면역 블롯 분석에 사용한 1차 antibody의 종류는antiPax-3/7, anti-Myh3, anti-GAPDH이다.
WETC의 다섯 가지 구성 물질 가운데 gallic acid는 myoblast의 세포 활성을 가장 크게 증가시키며, 분화 유도와 함께 증식을 촉진하는 효능을 가지는 것을 앞선 결과를 통해 확인하였다. WETC의 유효물질 중 가장 효과가 뛰어난 단일 화합물인 gallic acid가 근육의 증식과 분화에 관여하는 생리 활성 효능을 추가적인 실험을 통해 검증하였다. Myoblast에 gallic acid를 48 h 동안 농도별로 처리하였고, 면역 블롯 분석을 통해 단백질의 발현 변화를 확인한 결과 Pax-3/7과 Myh3의 발현이 모두 농도 의존적으로 증가하며 myoblast의 증식과 분화를 촉진하는 gallic acid의 효능을 확인하였다.
訶子 약재를 100 g으로 중량을 측정한 뒤 분쇄하였다. Automatic non-pressure pot에 분쇄된 약재와 1차 증류수 2,000 ml와 함께 넣어주고 탕액이 끓는 시점으로부터 2 h 동안 가열하여 추출하였다.
본 연구에서는 항산화 효능을 가진 WETC가 근육의 성장 및 분화에 미치는 영향을 알아보고자 하였다. 먼저, myoblast에 WETC가 미치는 영향을 확인하기 위하여 증식하고 있는 생존 가능한 세포의 수와 세포 독성 또는 화학 감수성 분석용으로 보편적으로 사용되는 MTS assay를 수행하였다. MTS assay 는 tetrazolim salt가 미토콘드리아에서 생성되는 NADH, NADPH에 의해 formazan으로 바뀌고, 이 formazan을 490 nm 흡광도로 측정하여 세포 생존율을 확인하는 방법이다³¹⁾.
면역 형광 현미경 분석을 위해 myoblast를 chamber slide 에 분주하였다. 세포에 시료를 정해진 농도 및 시간으로 처리한 뒤, 4% paraformaldehyde를 이용하여 10 min 동안 고정시키고 0.
Myoblast는 배양 배지의 변화를 통해 증식과 분화 환경을 각각 조성할 수 있다. 본 실험에서는 myoblast에 differentiation medium (D.M.)을 48 h 동안 처리하여 분화를 유도하였다. 또한 gallic acid에 의한 myoblast 분화 유도 효과를 확인하기 위해 growth medium (G.
본 연구에서 訶子 열수 추출물(WETC)이 항산화 효능 및 myoblast의 세포 활성 증가 그리고 면역 블롯 분석을 통해 WETC의 처리에 의해 myoblast의 분화 마커 단백질의 발현 변화를 관찰하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
본 연구에서는 ABTS assay를 통해 WETC의 항산화 효능을 평가하였고, 항산화 효능이 잘 알려진 resveratrol을 양성 대조군으로 사용하여 10 ㎍/ml, 25 ㎍/ml, 50 ㎍/ml에서 라디칼 소거능을 나타내며 농도 의존적인 항산화 효능이 있음을 확인하였다.
면역 형광 현미경 분석을 위해 myoblast를 chamber slide 에 분주하였다. 세포에 시료를 정해진 농도 및 시간으로 처리한 뒤, 4% paraformaldehyde를 이용하여 10 min 동안 고정시키고 0.5% Triton X-100가 포함된 PBS를 15 min 동안 처리하였다. 이 후 비특이적인 항체 결합을 억제하기 위해 blocking buffer (PBS, 5% goat serum, 0.
이 전 연구를 통해 myoblast의 세포 생존율을 증가시키며 분화를 유도하는 WETC의 효능을 검증하였다. WETC의 구성 물질들 가운데 myoblast 세포의 세포 생존율의 증가와 분화를 유도하는 대표적인 유효물질이 무엇인지 확인하기 위한 실험을 수행하였다.
1 mg/ml로 처리하고 세포의 모양을 관찰한 결과, 시간이 지남에 따라 myoblast가 긴 관상형의 세포인 myocyte의 형태로 변화하는 것을 관찰하였다 (Figure 2B). 이 후, 면역 블롯 분석을 통해 WETC에 의한 myoblast의 형태 변화가 myocyte로의 분화 유도에 의한 현상인지 조사하였다. myoblast에 0.
항산화 효능이 잘 알려진 resveratrol을 양성 대조군으로 사용하였고, 10, 100 μM에서 각각 11.51±0.27%,76.11±0.39%를 보인 resveratrol의 항산화 효능을 바탕으로 실험의 신뢰성을 검증하였다.

대상 데이터

05% Tween20)를 상온에서 1 h 동안 처리한 후 blocking buffer에 희석한 anti-Myh3를 4℃에서 12 h 동안 반응시켰다. Mouse IgG에 대한 2차 antibody로는 Alexa Fluor 488-conjugated goat antibody를 사용하였고, 세포핵은 DAPI로 염색하였다. LSM 510 Live Configuration Vario Two VRGB confocal laser-scanning microscope를 통해 면역 형광을 분석하고 이미지화 하였다.
2, Japan), DPBS (Corning, USA), Versene (Gibco, USA), potassium persulfate (Sigma, USA), ABTS (Sigma, USA), MTS solution (Promega, USA), anti-Pax-3/7 (Santa Cruz Biotechnology, USA), anti-Myh3 (Santa Cruz Biotechnology, USA), anti-GAPDH (Meridian life Science/Meridian Bioscience, USA), Horseradish peroxidase-conjugated secondary antibodies (Abcam, USA), 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI; Thermo-Fisher Scientific, USA) 등이 사용되었다. 본 실험에 사용된 기기는 CO₂ incubator (Thermo Fisher Scientific), waterbath (HAAKE, Germany), automaticnon-pressurepot (DaeWoong, Korea), filterpaper (AdvantecNo.2, Japan), rotary vacuum evaporator (Eyela,Japan), 동결건조기 (IlshineBioBase, Korea), ultrasonic cleaner (Branson, USA), microplate reader (Molecular Devices EMax Plus, USA), LSM 510 Live Configuration Vario Two VRGB confocal laser-scanning microscope (Carl Zeiss, Germany) 등이다.
본 실험을 위해서 Ham's F-10 medium (WELGENE, Korea), Dulbecco's modified Eagle medium (WELGENE, Korea), calf serum (Hyclone, USA), horse serum (Gibco, USA), 100 U/mL penicillin, 100 ㎍/mL streptomycin (WELGENE, Korea), filter paper (Advantec No.2, Japan), DPBS (Corning, USA), Versene (Gibco, USA), potassium persulfate (Sigma, USA), ABTS (Sigma, USA), MTS solution (Promega, USA), anti-Pax-3/7 (Santa Cruz Biotechnology, USA), anti-Myh3 (Santa Cruz Biotechnology, USA), anti-GAPDH (Meridian life Science/Meridian Bioscience, USA), Horseradish peroxidase-conjugated secondary antibodies (Abcam, USA), 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI; Thermo-Fisher Scientific, USA) 등이 사용되었다.
실험에 사용된 訶子는 한약 제약 회사 (Jeong-Seong Drugstore, Korea)로부터 2018년 8월에 구매 (NO:2018-0815)하여 기원의 진위와 품질의 우열을 가천대학교 한의과 대학 본초학교실에서 감정하였고, 약재는 ultrasonic cleaner를 이용하여 불순물을 제거하고 실험에 사용하였으며 실험에 사용된 WETC의 구성 물질은 chebulic acid, chebulagic acid, punicalagin, gallic acid (Sigma Aldrich, USA); chebulic acid (ChemFaces); geraniin (Dalian Meilun Biotech Co., Ltd, China)를 통해 개별 구매하여 실험에 사용하였다.
실험에 사용한 myoblast는 생후 3일 된 C57BL/6의 뒷다리 골격근에서 분리하여 배양하였다. Myoblast는 Ham's F-10 medium에 10% calf serum, 1% 항생제 (100 U/mL penicillin, 100 ㎍/ml streptomycin), 2.

이론/모형

3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethox yphenyl)-2-(4-sulfo phenyl)-2H-tetrazolium, inner salt (MTS) assay를 통해 측정하였다. 96-well plate에 분 주한 myoblast에 시료를 농도별로 처리한 뒤 24 h 동안 배양 하였다.
ABTS (2,2'-azino-bis-3-ethylbenzothi'azoline -6-sulphonic acid) assay를 이용하여 측정하였다.
(A) Myoblast were treated with indicated concentrations of WETC for 24 h. Cell viability was measured by MTS assay. (B, C) Myoblast were treated with 0.

성능/효과

1. ABTS assay를 통해 WETC의 라디칼 소거능을 나타내며 농도 의존적인 항산화 효능이 있음을 확인하였다.
2. WETC가 근육의 성장 및 분화에 미치는 영향을 알아보고자 myoblast의 세포 생존율의 변화를 관찰하기 위해 MTS assay를 수행한 결과 농도 의존적으로 세포 생존율을 보이며 WETC의 처리에 의해 myoblast의 세포 생존율이 증가하는 것을 확인하였다.
3. myoblast에 WETC를 처리하고 세포의 모양을 관찰한 결과, 시간이 지남에 따라 myoblast가 긴 관상형의 세포인 myocyte의 형태로 변화하는 것을 관찰하였으며, 면역 블롯 분석을 통해 Pax-3/7의 발현이 감소하고 Myh3 단백질의 발현이 증가하며 WETC가 myoblast의 분화를 유도하는 것을 확인하였다.
4. WETC의 대표적인 구성 물질 중 gallic acid를 처리한 myoblast의 경우 농도의존적으로 세포 생존율을 보이며 myoblast의 세포 생존율이 가장 크게 증가하였으며 면역 블롯 분석을 통해 myoblast의 Pax-3/7과 Myh3 단백질 발현 변화를 확인한 결과, chebulagic acid, gallic acid, geraniin에 의해 myoblast의 myh3 발현이 증가하며 분화를 유도하는 구성 물질을 검증하였으며, gallic acid와 geraniin를 처리한 myoblast의 경우 Myh3 뿐만 아니라 Pax-3/7의 발현도 증가하였다.
5. myoblast에 differentiation medium (D.M.)을 48 h 동안 처리하여 분화를 유도한 결과 control에 비해 Myh3의 발현이 크게 증가하였고, 세포 융합이 일어나 다핵성의 myotube가 형성된 것이 관찰되었고 gallic acid를 처리한 myoblast에서는 control 보다 Myh3의 발현이 증가하며 myoblast의 분화를 유도하는 gallic acid의 면역 블롯 분 석 결과를 재확인 하였으며 Myh3의 발현이 긴 관상형의 myocyte 형태와 유사하게 확인되었다.
Chebulic acid, chebulagic acid, gallic acid, geraniin, punicalagin은 WETC의 대표적인 구성 물질로 Myoblast에 다섯 가지 구성 물질을 농도별로 24 h 동안 처리한 후 MTS assay를 통해 세포 생존율을 측정한 결과, gallic acid를 처리한 myoblast의 경우 10 ㎍/ml, 20 ㎍/ml, 40 ㎍/ml에서 세포 생존율을 보이며 myoblast의 세포 생존율이 가장 크게 증가하였으며 Myooblast에 20 ㎍/ml의 농도의 다섯 가지 구성 물질을 48 h 동안 처리한 후 면역 블롯 분석을 통해 myoblast 의 Pax-3/7과 Myh3 단백질 발현 변화를 확인한 결과, chebulagic acid, gallic acid, geraniin에 의해 myoblast의 myh3 발현이 증가하며 분화를 유도하는 구성 물질을 검증하였으며, gallic acid와 geraniin를 처리한 myoblast의 경우 Myh3 뿐만 아니라 Pax-3/7의 발현도 증가하였다.
MTS assay 결과, 0.05 mg/ml에서는 124.20±1.52%, 0.1 mg/ml에서는 134.91±2.99%, 0.2 mg/ml에서는 143.78 ±2.45%의 세포 생존율을 보이며 WETC의 처리에 의해 myoblast의 세포 생존율이 증가하는 것을 확인하였다(Figure 2A).
WETC의 유효물질 중 가장 효과가 뛰어난 단일 화합물인 gallic acid가 근육의 증식과 분화에 관여하는 생리 활성 효능을 추가적인 실험을 통해 검증하였다. Myoblast에 gallic acid를 48 h 동안 농도별로 처리하였고, 면역 블롯 분석을 통해 단백질의 발현 변화를 확인한 결과 Pax-3/7과 Myh3의 발현이 모두 농도 의존적으로 증가하며 myoblast의 증식과 분화를 촉진하는 gallic acid의 효능을 확인하였다. Myoblast는 배양 배지의 변화를 통해 증식과 분화 환경을 각각 조성할 수 있다.
Chebulic acid, chebulagic acid, gallic acid, geraniin, punicalagin은 WETC의 대표적인 구성 물질로 알려져 있다. Myoblast에 다섯 가지 구성 물질을 농도별로 24 h 동안 처리한 후 MTS assay를 통해 세포 생존율을 측정한 결과, 5가지 구성 물질에 의해 myoblast의 세포 생존율이 모두 증가한 것을 확인하였다. 특히, gallic acid를 처리 한 myoblast의 경우 10 ㎍/ml에서 133.
2 mg/ml에서 세포 생존율을 보이며 WETC의 처리에 의해 myoblast의 세포 생존율이 증가하는 것을 확인하였다. Myoblast의 세포 생존율을 증가시킨 WETC를 myoblast 에 0.1 mg/ml로 처리하고 세포의 모양을 관찰한 결과, 시간이 지남에 따라 myoblast가 긴 관상형의 세포인 myocyte의 형태로 변화하는 것을 관찰하였으며, myoblast에 0.1 mg/ml의 WETC를 24, 48 h 동안 처리한 후 면역 블롯 분석을 통해 Pax-3/7과 Myh3 단백질의 발현을 비교한 결과, WETC의 처리에 의해 Pax-3/7의 발현이 감소하고 Myh3 단백질의 발현이 증가하며 WETC가 myoblast의 분화를 유도하는 것을 확인하였다.
Myogenesis 과정에서 myoblast는 myocyte로 분화한 뒤 융합하여 다핵성 세포인 myotube를 형성한다^{15, 16)}. Myoblast의 세포 생존율을 증가시킨 WETC를 myoblast에 0.1 mg/ml로 처리하고 세포의 모양을 관찰한 결과, 시간이 지남에 따라 myoblast가 긴 관상형의 세포인 myocyte의 형태로 변화하는 것을 관찰하였다 (Figure 2B). 이 후, 면역 블롯 분석을 통해 WETC에 의한 myoblast의 형태 변화가 myocyte로의 분화 유도에 의한 현상인지 조사하였다.
WETC의 다섯 가지 구성 물질 가운데 gallic acid는 myoblast의 세포 활성을 가장 크게 증가시키며, 분화 유도와 함께 증식을 촉진하는 효능을 가지는 것을 앞선 결과를 통해 확인하였다. WETC의 유효물질 중 가장 효과가 뛰어난 단일 화합물인 gallic acid가 근육의 증식과 분화에 관여하는 생리 활성 효능을 추가적인 실험을 통해 검증하였다.
WETC의 항산화 효능을 평가한 결과 10 ㎍/ml에서 29.42±0.2.81%, 25 ㎍/ml에서 63.40±1.55%, 50 ㎍/ml에서 94.12±0.10%의 라디칼 소거능을 나타내며 농도 의존적인 항산화 효능을 확인하였다.
이 후, 면역 블롯 분석을 통해 WETC에 의한 myoblast의 형태 변화가 myocyte로의 분화 유도에 의한 현상인지 조사하였다. myoblast에 0.1 mg/ml의 WETC를 24, 48 h 동안 처리한 후 면역 블롯 분석을 통해 Pax-3/7과 Myh3 단백질의 발현을 비교한 결과, WETC의 처리에 의해 Pax-3/7의 발현이 감소하고 Myh3 단백질의 발현이 증가하며 WETC가 myoblast 의 분화를 유도하는 것을 확인하였다 (Figure 2C).
)에 gallic acid를 20 ㎍/ml로 희석하여 48 h 동안 처리하였다. 각각의 조건 하에서 myoblast의 Myh3 단백질의 발현 변화를 면역 형광 분석을 통해 시각화하여 비교한 결과, D.M. 조건 하에서 분화를 유도한 myoblast는 control에 비해 Myh3의 발현이 크게 증가하였고, 세포 융합이 일어나 다핵성의 myotube가 형성된 것이 관찰되었다. 그리고 gallic acid를 처리한 myoblast에서는 control 보다 Myh3의 발현이 증가하며 myoblast의 분화를 유도하는 gallic acid의 면역 블롯 분석 결과를 재확인하였다.
항산화 효능을 가진 WETC가 근육의 성장 및 분화에 미치는 영향을 알아보고자, WETC에 의한 myoblast의 변화를 MTS assay 통해 확인하였다. 그 결과, 0.05 mg/ml, 0.1 mg/ml, 0.2 mg/ml에서 세포 생존율을 보이며 WETC의 처리에 의해 myoblast의 세포 생존율이 증가하는 것을 확인하였다. Myoblast의 세포 생존율을 증가시킨 WETC를 myoblast 에 0.
Myooblast에 20 ㎍/ml의 농도의 다섯 가지 구성 물질을 48 h 동안 처리한 후 면역 블롯 분석을 통해 myoblast의 Pax-3/7과 Myh3 단백질 발현 변화를 확인하였다. 그 결과, chebulagic acid, gallic acid, geraniin에 의해 myoblast의 myh3 발현이 증가하며 분화를 유도하는 구성 물질을 검증하였다. 더불어, gallic acid와 geraniin를 처리한 myoblast의 경우 Myh3 뿐만 아니라 Pax-3/7의 발현도 증가하였다.
조건 하에서 분화를 유도한 myoblast는 control에 비해 Myh3의 발현이 크게 증가하였고, 세포 융합이 일어나 다핵성의 myotube가 형성된 것이 관찰되었다. 그리고 gallic acid를 처리한 myoblast에서는 control 보다 Myh3의 발현이 증가하며 myoblast의 분화를 유도하는 gallic acid의 면역 블롯 분석 결과를 재확인하였다. 더불어, D.
그리고 gallic acid를 처리한 myoblast에서는 control 보다 Myh3의 발현이 증가하며 myoblast의 분화를 유도하는 gallic acid의 면역 블롯 분석 결과를 재확인하였다. 더불어, D.M. 조건하에서 형성된 myotube는 관찰되지 않았지만 Myh3의 발현이 긴 관상형의 myocyte 형태와 유사하게 확인되었다.
본 연구에서는 골격근의 증식과 분화에 미치는 gallic acid의 생리활성 효능을 검증하였고, 그 결과 myoblast의 Pax-3/7과 Myh3의 발현이 모두 농도 의존적으로 증가하며 myoblast의 증식과 분화를 촉진하는 gallic acid의 효능을 확인하였다. 또한 본 실험에서는 myoblast에 differentiation medium (D.M.)을 48 h 동안 처리하여 분화를 유도한 결과 D.M. 조건 하에서 분화를 유도한 myoblast는 control에 비해 Myh3의 발현이 크게 증가하였고, 세포 융합이 일어나 다핵성의 myotube 가 형성된 것이 관찰되었다. 그리고 gallic acid를 처리한 myoblast에서는 control 보다 Myh3의 발현이 증가하며 myoblast의 분화를 유도하는 gallic acid의 면역 블롯 분석 결과를 재확인하였다.
. 본 연구에서는 골격근의 증식과 분화에 미치는 gallic acid의 생리활성 효능을 검증하였고, 그 결과 myoblast의 Pax-3/7과 Myh3의 발현이 모두 농도 의존적으로 증가하며 myoblast의 증식과 분화를 촉진하는 gallic acid의 효능을 확인하였다. 또한 본 실험에서는 myoblast에 differentiation medium (D.

후속연구

訶子를 열수 추출한 WETC의 대표적인 구성 성분에는 chebulic acid, chebulagic acid, gallic acid, geraniin, punicalagin가 있다³⁵⁾. WETC가 myoblast의 세포 생존율과 근육의 분화에 미치는 효과를 근육 감소증의 예방 및 치료 분야에 적용하여 연구 및 개발하기 위해서는 WETC의 다양한 유효 성분 중 단일 화합물에 대한 연구가 필요하다.
그러므로 이러한 결과는 Gallic acid는 근육의 분화를 촉진하여 근육 감소증의 증상 가운데 근육의 크기와 질량의 증가에 직접적인 도움을 준다. 더불어 myoblast의 세포 생존율을 증가시키고, 증식 자체를 촉진하여 근육 조직을 형성할 수 있는 잠재능력도 향상시키며 gallic acid는 근육 감소증의 치료뿐만 아니라 예방을 위한 약물의 개발에도 적용할 수 있음을 시사한다.
질병을 예방하고 치료하는 식･의약품의 개발에 천연 유래 물질의 생리 활성을 이용하기 위해서는 질병의 근본적인 원인과 함께 천연 유래물질이 표적으로 하는 기작에 대한 연구가 필요하다. 따라서 노화와 근육 감소증의 상관관계와 더불어 WETC와 gallic acid가 myoblast의 증식과 분화에 관여하는 구체적인 기작에 대한 심화 연구가 수행되어 진다면 새로운 건강 기능 식품과 의약품으로 개발될 수 있는 가치가 있다고 생각되는 바이다.
향후 WETC가 노화와 다양한 질병의 원인이 되는 활성 산소를 제거하고, 근육의 대사과정에 관여하여 건강한 근육을 합성함으로써 근육 감소증을 치료할 수 있는 효능에 대한 보다 깊은 연구가 필요한 것으로 생각되는 바이다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	訶子의 약리작용으로는 어떤 것들이 있는가?	이외에 Se, K, Mg, Fe와 Cu 등의 미량원소와 비타민 C 등을 함유하고 있다3). 訶子의 약리작용으로는 항균활성4-6), 항돌연변이 유발효과7), 간섬유화 억제활성8), 항당뇨활성9, 10), 암세포성장 억제11-13), 항염활성14)등의 여러 연구들이 보고되었다.
	면역 형광 현미경 분석을 위해 myoblast의 시료처리 과정은?	면역 형광 현미경 분석을 위해 myoblast를 chamber slide에 분주하였다. 세포에 시료를 정해진 농도 및 시간으로 처리한 뒤, 4% paraformaldehyde를 이용하여 10 min 동안 고정시키고 0.5% Triton X-100가 포함된 PBS를 15 min 동안처리하였다. 이 후 비특이적인 항체 결합을 억제하기 위해blocking buffer (PBS, 5% goat serum, 0.
	근육의 역할은 무엇인가?	근육은 뼈를 보호하고 체형을 바르게 유지시켜 주며 칼슘유입을 촉진시켜 골 밀도를 높여 주는 기능을 한다. 근형성(myogenesis)은 근육조직이 형성되는 과정으로 근원세포(myoblast)의 분화를 통해 이루어진다.

참고문헌 (38)

Kim IR KH, Kuk YB, Park SJ, Park YK, Park JH, Seo BI, Seo YB, Shin MK, Lee YJ, LeeYC, Lee JH, Leem KH, Cho SI, Chung JK, Joo YS, Choi HY. Boncho-Hak. Seoul : Young-Lim Press. 2007 : 671-2.
Korea Food and Drug Administration. The Korean Pharmacopoeia Eleventh Edition. Seoul : Korea Food and Drug Administration. 2018 : 3-4.
HC K. Hanbangyagli-Hak. Seoul : Jibmundang. 2001 : 493-4.
Malekzadeh F, Ehsanifar H, Shahamat M, Levin M, Colwell RR. Antibacterial activity of black myrobalan (Terminalia chebula Retz) against Helicobacter pylori. Int J Antimicrob Agents. 2001 ; 18(1) : 85-8.

상세보기
Koo JE, Kim SO. Anti-microbial Activities of the Extract of Terminalia chebula Retz. for Cosmetics. J Kor Soc Esthe & Cosm. 2011 ; 6(4) : 289-94.
Nam KY, Lee JS. Dyeing Property and Antimicrobial activity of Protein Fiber Using Terminalia chebula Retzius Extract. Fashion & Text Res J. 2014 ; 16(3) : 476-84.

원문보기 상세보기
Kaur S, Arora S, Kaur K, Kumar S. The in vitro antimutagenic activity of Triphala-an Indian herbal drug. Food Chem Toxicol. 2002 ; 40(4) : 527-34.

상세보기
Lee HS, Koo YC, Lee KW. Suppressive Activity of Extract of Termialia chebula Retz. on Hepatic Fibrosis. Korean J. Food Sci Technol. 2009 ; 41(5) : 597-601.
Sabu MC1, Kuttan R. Anti-diabetic activity of medicinal plants and its relationship with their antioxidant property. J Ethnopharmacology. 2002 ; 81(1) : 155-60.

상세보기
Silawat N, Gupta VB. Chebulic acid attenuates ischemia reperfusion induced biochemical alteration in diabetic rats. Pharm Biol. 2013 ; 51(1) : 23-9.

상세보기
Saleem A, Husheem M, Harkonen P, Pihlaja K. Inhibition of cancer cell growth by crude extract and the phenolics of Terminalia chebula retz. fruit. J Ethnopharmacology. 2002 ; 81(3) : 327-36.

상세보기
Achari C, Reddy GV, Reddy TC, Reddanna P. Chebulagic acid synergizes the cytotoxicity of doxorubicin in human hepatocellular carcinoma through COX-2 dependant modulation of MDR-1. Med Chem. 2011 ; 7(5) : 432-42.

상세보기
Lee YH. The Inhibitory Effect on Androgen Receptor-Dependent Prostate Cancer Cell Growth by Anti-Histone Acetyltransferase Activity from Terminalia chebula Retz. Fruit Methanol Extract. J Korean Soc Food Sci Nutr. 2013 ; 42(10) : 1539-43.

원문보기 상세보기
Bag A, Kumar Bhattacharyya S, Kumar Pal N, Ranjan Chattopadhyay R. Anti-inflammatory, antilipid peroxidative, antioxidant and membrane stabilizing activities of hydroalcoholic extract of Terminalia chebula fruits. Pharm Biol. 2013 ; 51(12) : 1515-20.

상세보기
Konigsberg IR. Clonal analysis of myogenesis. Science. 1963 ; 140(3573) : 1273-84.

상세보기
Mintz B, Baker WW. Normal mammalian muscle differentiation and gene control of isocitrate dehydrogenase synthesis. Proc Natl Acad Sci U S A. 1967 ; 58(2) : 592-8.

상세보기
Chen E. Current Topics in Membranes. Cambridge: ELSEVIER Academic Press INC. 2011 : 235-58.
Shinn-Thomas JH, Mohler WA. New Insights into the Mechanisms and Roles of Cell-Cell Fusion. Int Rev Cell Mol Biol. 2011 ; 289 : 149-209.

상세보기
Timon Seeger CC, Ioannis Karakikes, Joseph C. Cardiac Electrophysiology : From Cell to Bedside. Cambridge : ELSEVIER Academic Press INC. 2018 : 284-92.
Ryall JG, Schertzer JD, Lynch GS. Cellular and molecular mechanisms underlying age-related skeletal muscle wasting and weakness. Biogerontology. 2008;9(4):213-28.

상세보기
Marcell TJ. Sarcopenia: causes, consequences, and preventions. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2003 ; 58(10) : M911-6.

상세보기
Balagopal P, Rooyackers OE, Adey DB, Ades PA, Nair KS. Effects of aging on in vivo synthesis of skeletal muscle myosin heavy-chain and sarcoplasmic protein in humans. Am J Physiol. 1997 ; 273(4 Pt 1) : E790-800.

상세보기
Volpi E, Sheffield-Moore M, Rasmussen BB, Wolfe RR. Basal muscle amino acid kinetics and protein synthesis in healthy young and older men. JAMA. 2001 ; 286(10) : 1206-12.

상세보기
Rosenberg IH. Sarcopenia: origins and clinical relevance. Clin Geriatr Med. 2011 ; 27(3) : 337-9.

상세보기
Morley JE. Sarcopenia: diagnosis and treatment. J Nutr Health Aging. 2008 ; 12(7) : 452-6.

상세보기
Hazra B, Sarkar R, Biswas S, Mandal N. Comparative study of the antioxidant and reactive oxygen species scavenging properties in the extracts of the fruits of Terminalia chebula, Terminalia belerica and Emblica officinalis. BMC Complement Altern Med. 2010 ; 10 : 20.

상세보기
Babu BH, Larkin A, Kumar H. Effect of Plant Growth Regulators on Rooting Behavior of Stem Cuttings of Terminalia chebula (Retz.). International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences. 2018 ; 7(8) : 2475-82.
Maurya SK, Seth A. Potential medicinal plants and trditional ayaurvedic approach towards Urticaria, an allergic skin disorder. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences. 2014 ; 6(5) : 172-7.
Juang LJ, Sheu SJ, Lin TC. Determination of hydrolyzable tannins in the fruit of Terminalia chebula Retz. by high-performance liquid chromatography and capillary electrophoresis. J Sep Sci. 2004 ; 27(9) : 718-24.

상세보기
Gaire BP, Jamarkattel-Pandit N, Lee D, Song J, Kim JY, Park J, Jung S, Choi HY, Kim H. Terminalia chebula extract protects OGD-R induced PC12 cell death and inhibits lps induced microglia activation. Molecules. 2013 ; 18(3) : 3529-42.

상세보기
Dunigan DD, Waters SB, Owen TC. Aqueous soluble tetrazolium/formazan MTS as an indicator of NADH- and NADPH-dependent dehydrogenase activity. Biotechniques. 1995 ; 19(4) : 640-9.

상세보기
Moylan JS, Reid MB. Oxidative stress, chronic disease, and muscle wasting. Muscle Nerve. 2007 ; 35(4) : 411-29.

상세보기
Koopman R, van Loon LJ. Aging, exercise, and muscle protein metabolism. J Appl Physiol. 2009 ; 106(6) : 2040-8.

상세보기
Marzani B, Balage M, Venien A, Astruc T, Papet I, Dardevet D, Mosoni L. Antioxidant supplementation restores defective leucine stimulation of protein synthesis in skeletal muscle from old rats. J Nutr. 2008 ; 138(11) : 2205-11.

상세보기
Lee Y, Byun HS, Seok JH, Park KA, Won M, Seo W, Lee SR, Kang K, Sohn KC, Lee IY, Kim HG, Son CG, Shen HM, Hur GM. Terminalia Chebula provides protection against dual modes of necroptotic and apoptotic cell death upon death receptor ligation. Sci Rep. 2016 ; 6 : 25094.

상세보기
Brzoska E, Przewozniak M, Grabowska I, Janczyk- Ilach K, Moraczewski J. Pax3 and Pax7 expression during myoblast differentiation in vitro and fast and slow muscle regeneration in vivo. Cell Biol Int. 2009 ; 33(4) : 483-92.

상세보기
Stern-Straeter J, Bonaterra GA, Kassner SS, Zugel S, Hormann K, Kinscherf R, Goessler UR. Characterization of human myoblast differentiation for tissue-engineering purposes by quantitative gene expression analysis. J Tissue Eng Regen Med. 2011 ; 5(8) : e197-206.

상세보기
Hsieh SC, Wu CC, Hsu SL, Feng CH, Yen JH. Gallic acid attenuates TGF-beta1-stimulated collagen gel contraction via suppression of RhoA/Rho-kinase pathway in hypertrophic scar fibroblasts. Life Sci. 2016 ; 161 : 19-26.

상세보기

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증