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문제 정의
- 따라서 본 연구는 소형 애완견에서 발정발현시 질세포 검사를 실시하여 분만일을 예측하고 이어서 분만일 예측의 정확성을 확인하고자 수행되었다.
제안 방법
- 각화세포의 비율이 발정출혈개시 후 최초로 90% 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때는 최초로 상승한 날에 66일, 각화세포의 비율이 최고치에 도달한 날을 기준으로 하였을 때는 최고치에 도달한 날에 64일, 혈장 progesterone 농도가 최초로 4.0 ng/ml 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때는 최초로 4.0 ng/ml 이상으로 상승한 날에 63일, 그리고 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때는 발정휴지기 개시일에 57일을 더한 날을 분만예정일로 하였다.
- 발정 출혈 및 외음부 종대의 확인은 발정 출혈 개시 예정 2개월 전부터 매일 육안적으로 관찰하였다. 교배 허용 유무는 발정 출혈 개시일부터 발정이 종료될 때까지 매일 아침과 저녁 2회 관찰하였으며, 교배는 최초 교배 허용일부터 2일 간격으로 동일 종의 수캐와 2-3회 자연 교배 시켰다.
- 교배는 동일종의 수캐를 이용하였고 모든 실험견은 실험개시 1개월 전에 구충 및 예방접종(canine distemper, canine hepatitis, canine parvovirus, canine leptospira combined vaccine)을 실시하였다. 사육은 격리된 공간에 1두씩 격리 사육하였고 사료는 제한급여 하였으며, 물은 자유 음수토록 하였다.
- 교배는 동일종의 수캐를 이용하였고 모든 실험견은 실험견은 실험개시 1개월 전에 구충 및 예방접종(canine distemper, canine hepatitis, canine parvovirus, canine leptospira combined vaccine)을 실시하였다. 사육은 격리된 공간에 1두씩 격리 사육하였고 사료는 제한급여 하였으며, 물은 자유음수토록 하였다.
- 발정 출혈 및 외음부 종대의 확인은 발정 출혈 개시 예정 2개월 전부터 매일 육안적으로 관찰하였다. 교배 허용 유무는 발정 출혈 개시일부터 발정이 종료될 때까지 매일 아침과 저녁 2회 관찰하였으며, 교배는 최초 교배 허용일부터 2일 간격으로 동일 종의 수캐와 2-3회 자연 교배 시켰다.
- 발정전기 개시일 부터 발정휴지기 20일까지는 매일, 발정휴지기 21일째부터 다음 발정전기 개시일까지는 주 1회 실시하였다. 질세포는 Guyant(15) 및 김 등(2,3)의 방법에 준하여 면봉법으로 채취한 후 slide glass 2장에 직접 도말, 자연 건조시킨 후 Wright’s 염색을 실시하였다.
- 분만일 예측” 실험과 동일한 방법으로 발정 출혈 유무를 확인하였다.
- 분만일 예측” 실험과 동일한 방법으로 채혈 및 혈장 progesterone 농도를 측정하였다.
- 분만일 예측” 실험의 결과에 준하여 아래와 같이 분만예정일을 산정한 후, 이를 실제 분만일과 비교하여 분만일 예측의 정확성을 확인하였다.
- 교배는 동일종의 수캐를 이용하였고 모든 실험견은 실험개시 1개월 전에 구충 및 예방접종(canine distemper, canine hepatitis, canine parvovirus, canine leptospira combined vaccine)을 실시하였다. 사육은 격리된 공간에 1두씩 격리 사육하였고 사료는 제한급여 하였으며, 물은 자유 음수토록 하였다.
- 교배는 동일종의 수캐를 이용하였고 모든 실험견은 실험개시 1개월 전에 구충 및 예방접종(canine distemper, canine hepatitis, canine parvovirus, canine leptospira combined vaccine)을 실시하였다. 사육은 격리된 공간에 1두씩 격리 사육하였고 사료는 제한급여 하였으며, 물은 자유 음수토록 하였다.
- 소형 애완견에서 발정발현시 질세포 검사를 실시하여 임신기간을 확인하고 이어서 분만예정일을 산정하고자 수행되어 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 채혈: 발정전기 개시 1주일 전부터 최초로 수캐를 허용한 후 20일까지 매일 아침 요골쪽 피부정맥에서 채혈하였다. 채혈 후 EDTA병에 채혈한 혈액은 4ºC에서 3000 g로 10분 동안 원심분리하여 혈장을 분리한 후 progesterone를 측정할 때까지 −20ºC에서 보관하였다.
대상 데이터
- 분만경험이 있는 무발정기의 Maltese 견 12마리(연령 2-7년, 산차 1.6산, 체중 2.5-4.2 kg), Yorkshire terrier 견 12두(연령 2-8년, 산차 1.8산, 체중 1.4-2.4 kg), Shih-tzu 견 17두(연령 2-7년, 산차 1.9산, 체중 3.9-6.5 Kg), Miniature Schnauzer 견 12두(연령 2-7년, 산차 1.9산, 체중 4.8-7.4kg)를 대상으로 하였으며 총 53회의 임신(초산 23회, 경산 30회)을 하였다.
- 분만경험이 있는 무발정기의 Maltese 견 20마리(연령 2-9년, 산차 1.7산, 체중 2.3-4.5 kg), Yorkshire terrier 견 20두(연령 1-10년, 산차 1.9산, 체중 1.3-2.7 kg), Shih-tzu 견 20두(연령 2-9년, 산차 2.1산, 체중 3.6-6.7 kg), Miniature Schnauzer 견 20두(연령 1-7년, 산차 1.8산, 체중 4.7-7.3kg) 등 전체 80두를 대상으로 하였다.
데이터처리
- 각 임신기간은 평균 ±표준편차(Mean ± S.D)로 나타내었고 각 견종별 임신기간의 비교는 SAS의 GLM을 이용하였다.
이론/모형
- 분만일 예측” 실험과 동일한 방법으로 질세포 검사를 실시하였다.
- 질세포 검사에 의한 발정주기의 구분은 Johnstone 등(16)의 기술에 준하여 발정전기는 발전출혈 개시일 부터 cornification index(CI)가 90% 미만일 때, 발정기는 90% 이상일 때, 발정휴지기는 50% 미만으로 감소한 이후부터 분만일까지로 하였다.
- 질세포는 Guyant(15) 및 김 등(2,3)의 방법에 준하여 면봉법으로 채취한 후 slide glass 2장에 직접 도말, 자연 건조시킨 후 Wright’s 염색을 실시하였다.
- 질세포는 Guyant(15) 및 김 등(2,3)의 방법에 준하여 면봉법으로 채취한 후 slide glass 2장에 직접 도말, 자연 건조시킨 후 Wright’s 염색을 실시하였다. 질세포의 구분은 Schutte(19,20) 및 김 등(2,3)의 기술에 준하여 5가지 세포로 분류하였고, 적혈구와 백혈구의 출현정도는 Bell과 Christie(6)의 기술에 준하여 6등급으로 분류하였으며, 각화세포 비율(Cornification Index, CI)의 산출는 김 등(3)의 기술에 준하여 산출하였다.
- 혈장 progesterone 농도 측정: 김 등(3)의 방법에 준하여 progesterone kit(Progesterone Coat-α-count, Diagnostic Products Corporation, Los angeles, CA)를 사용하여 gamma counter(EG & G Wallace, Finland)로 측정하였다.
- 혈장 progesterone 농도 측정에 의한 배란일의 판정 : 김 등(3)의 기술에 준하여 발정출혈개시 후 혈장 progesterone 농도가 최초로 4.0 ng/ml 이상으로 상승한 날을 배란일로 판정하였다.
성능/효과
- Table 2와 같이 분만일을 예측한 후, 이를 실제 분만일과 비교한 결과(Table 3), 각화세포의 비율이 발정출혈개시 후 최초로 90% 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때의 분만일 예측 정확성은 실제 분만일과 1일 이내의 차이가 62.5%(50/80), 2일 이내의 차이는 90.0%(72/80)의 정확성을 보였다. 각화세포의 비율이 최고치에 도달한 날을 기준으로 하였을 때의 분만일 예측 정확성은 실제 분만일과 1일 이내의 차이가 48.
- 0%(72/80)의 정확성을 보였다. 각화세포의 비율이 최고치에 도달한 날을 기준으로 하였을 때의 분만일 예측 정확성은 실제 분만일과 1일 이내의 차이가 48.7%(39/80), 2일 이내의 차이는 77.5%(62/80)의 정확성을 보였다. 혈장 progesterone 농도가 최초로 4.
- 그리고 모든 견종에서 분만일 예측은 각화세포 비율이 발정출혈개시 후 최초로 90% 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때 66일 후, 각화세포 비율이 최고치에 도달한 날을 기준으로 하였을 때 64일 후, 배란일을 기준으로 하였을 때 63일 후, 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때 57일 후에 분만하는 것으로 확인되었다. 이는 Pekingese 단일 견종을 대상으로 한 실험에서 각화세포의 비율이 최초로 90% 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때 67일, 각화세포 비율이 최고치에 도달한 날을 기준으로 하였을 때 64일, 배란일을 기준으로 하였을 때 63일, 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때 57일에 분만하였다는 보고(4)와 동일한 결과를 보였다.
- 따라서 위와 같은 결과에 준하여 소형 애완견 80두를 대상으로 각 지표에 따른 분만일을 예측한 후 이를 실제 분만일과 비교한 결과, 각화세포의 비율이 발정출혈개시 후 최초로 90% 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때 2일 이내의 차이는 90.0%(72/80), 각화세포의 비율이 최고치에 도달한 날을 기준으로 하였을 때 2일 이내의 차이는 77.5%(62/80), 혈장 progesterone 농도가 최초로 4.0 ng/ml 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때 2일 이내의 차이는 86.2%(69/80), 그리고 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때 2일 이내의 차이는 81.2%(65/80)의 정확성을 보였다.
- 모든 견종에서 분만일의 예측은 각화세포 비율이 발정출혈개시 후 최초로 90% 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때 66일 후, 각화세포 비율이 고치에 도달한 날을기준으로 하였을 때 64일 후, 배란일을 기준으로 하였을 때 63일 후 그리고 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때 57일 후에 분만하는 것으로 산정하였다(Table 2).
- 모든 견종에서 임신기간은 각화세포 비율이 발정출혈개시 후 최초로 90% 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때 66.64 ± 2.32일, 각화세포 비율이 최고치에 도달한 날을 기준으로 하였을 때 64.65 ± 2.87일, 배란일을 기준으로 하였을 때 63.46 ± 1.63일, 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때 57.67 ± 2.43일 이었다.
- 모든 견종에서 임신기간은 각화세포 비율이 발정출혈개시 후 최초로 90% 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때 66.64 ± 2.32일, 각화세포 비율이 최고치에 도달한 날을 기준으로 하였을 때 64.65 ± 2.87일, 배란일을 기준으로 하였을 때 63.46 ± 1.63일, 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때 57.67 ± 2.43일이었다.
- 2%. 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때 81.2%의 정확성을 보였다.
- 2%(69/80)의 정확성을 보였다. 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때의 분만일 예측 정확성은 실제 분만일과 1일 이내의 차이가 50.0%(40/80), 2일 이내의 차이는 81.2%(65/80)의 정확성을 보였다.
- 위와 같이 분만일을 예측한 후 이를 실제 분만일과 비교하였던 바, 실제 분만일과 2일 이내의 차이는 각화세포의 비율이 발정출혈개시 후 최초로 90.0% 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때 90.0%, 각화세포의 비율이 최고치에 도달한 날을 기준으로 하였을 때 77.5%, 혈장 progesterone 농도가 최초로 4.0 ng/ml 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때 86.2%. 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때 81.
- 총 53회의 임신에서 분만일을 Day 0로 하였을 때, 모든 견종에서 임신기간은 각화세포 비율이 발정출혈개시 후 최초로 90% 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때66.64 ± 2.32일, 각화세포 비율이 최고치에 도달한 날을 기준으로 하였을 때 64.65 ± 2.87일, 배란일을 기준으로 하였을때 63.46 ± 1.63일, 그리고 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때 57.67 ± 2.43일로서 모든 견종 사이에는 유의성 있는 차이가 없었다(p < 0.01, Table 1).
- 5%(62/80)의 정확성을 보였다. 혈장 progesterone 농도가 최초로 4.0ng/ml 이상으로 상승한 날을 기준으로 하였을 때의 분만일 예측 정확성은 실제 분만일과 1일 이내의 차이가 62.5%(50/80), 2일 이내의 차이는 86.2%(69/80)의 정확성을 보였다. 발정휴지기 개시일을 기준으로 하였을 때의 분만일 예측 정확성은 실제 분만일과 1일 이내의 차이가 50.
후속연구
- 따라서 검사방법이 용이한 질세포의 검사는 교배일부터 분만일을 예측할 수 있어서 임신견의 번식관리 및 분만준비 등 실제 임상에 응용될 수 있을 것으로 사료된다.
- 이처럼 질세포 검사에 의해 확립된 분만일 예정은 임신견의 번식관리 및 분만준비 등 실제 임상에 응용될 수 있을 것으로 사료된다.
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