[논문]융합법을 이용한 바이오에탄올 생산에 적합한 효모균주의 구축

김연희

doi:10.5352/jls.2019.29.3.376

융합법을 이용한 바이오에탄올 생산에 적합한 효모균주의 구축
Construction of Yeast Strain Suitable for Bioethanol Production by Using Fusion Method 원문보기

생명과학회지 = Journal of life science, v.29 no.3 = no.227, 2019년, pp.376 - 381

초록
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본 연구는 에탄올내성, 내열성, ${\beta}-glucanase$ 활성 및 xylose 대사가 가능한 새로운 생물시스템을 육종하기 위해 원형질체융합(protoplast fusion)이라는 방법을 사용하여 S. cerevisiae BYK-F11 균주와 P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주와의 genome shuffling을 시도하였다. P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주는 URA3 유전자를 결실시켜 uracil 영양요구주로 구축되었다. Protoplast fusion을 통해 몇몇의 융합체가 선별되었고, 두 모균주인 BYK-F11 균주와 P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주의 핵형(karyotype)를 모두 가지는 BYKPS-F8 균주가 22개의 융합체중에서 최종 선정되었다. 이어 ${\beta}-glucanase$ 활성, xylose 이용능, 에탄올내성, 내열성 및 에탄올생산성에 대한 다양한 표현형이 조사되었다. BYKPS-F8 균주는 모균주인 BYK-F11 균주가 가지는 ${\beta}-glucanase$ 활성을 가지게 되었고, P. $stipitis{\Delta}ura$ 균주가 가지는 xylose 이용능도 모균주보다 1.2배 증가되었음을 확인할 수 있었다. BYKPS-F8 균주는 $40^{\circ}C$에서 내열성을 보였으며, 8% 에탄올이 첨가된 배지에서 모균주에 비해 에탄올 내성이 증가되었음을 확인 할 수 있었다. 20 g/l의 xylose가 함유된 배지에서 72시간 배양에 의해 약 7.5 g/l의 에탄올을 생산할 수 있었으며, 260시간의 장기간의 배양에도 BYKPS-F8균주에 도입한 다형질이 안정적으로 유지됨을 확인하였다. 따라서, 본 연구에서 사용된 균주 육종방법을 통해 다형질을 가진 다른 속간의 균주 융합 및 산업적으로 유용한 생물시스템의 육종이 가능함을 확인하였다.

Abstract ▼ AI-Helper

To construct useful yeast strain for bioethanol production, we improved yeast harboring various phenotypes by using yeast protoplast fusion method. In this study, S. cerevisiae BYK-F11 strain which have ethanol tolerance, thermotolerance and ${\beta}-glucanase$ activity and P. $stipitis{\Delta}ura$ strain which has xylose metabolism pathway were fused by genome shuffling. P. $stipitis{\Delta}ura$ strain was constructed for protoplast fusion by URA3 gene disruption, resulting in uracil auxotroph. By protoplast fusion, several fused cells were selected and BYKPS-F8 strain (fused cell) showing both karyotypes from two parent strains (S. cerevisiae BYK-F11 and P. $stipitis{\Delta}ura$ strain) among 22 fused cells was finally selected. Sequentially, various phenotypes such as ${\beta}-glucanase$ activity, xylose utility, ethanol tolerance, thermotolerance and ethanol productivity were analyzed. The BYKPS-F8 strain obtained ${\beta}-glucanase$ activity from BYK-F11 strain and 1.2 fold increased xylose utility from P. $stipitis{\Delta}ura$ strain. Also, the BYKPS-F8 strain showed thermotolerance at $40^{\circ}C$ and increased ethanol tolerance in medium containing 8% ethanol. In this fused cell, 7.5 g/l ethanol from 20 g/l xylose was produced and the multiple phenotypes were stably remained during long term cultivation (260 hr). It was proved that novel biological system (yeast strains) is easily and efficiently bred by protoplast fusion among yeasts having different genus.

주제어

표/그림 (4)

그림 Fig. 1. Confirmation of uracil auxotroph in P. stipitisΔura strain (A) and screening of fusants by auxotrophic test and analysis of β-glucanase activity (B). Host strains and fusants were streaked on to YPD, SD containing geneticin and YPD containing MUG medium for 3 days. The β-glucanase activity was detected by MUG degradation on UV illumination. WT, P. stipitis wild type strain: Δura3, P. stipitisΔura strain: S, S. cerevisiae BYK-F11 strain: P, P. stipitisΔura strain; No.8, selected fusant (BYKPS-F8).
그림 Fig. 2 Karyotype analysis of BYKPS-F8 strain and comparison of cell growth in each strain on YPX (2%) medium. (A) Karyotype of each strain was analyzed by pulsed field gel electrophoresis (PFGE). Lane 1: S. cerevisiae BYK-F11 strain, lane 2: P. stipitisΔura strain, lane 3: BYKPS-F8 fusant. (B) Each strain was cultivated on YPX (2% xylose) at 30℃ for 48 hr. Graph bar □: S. cerevisiae BYK-F11 strain, ▨: P. stipitisΔura strain, ■: BYKPS-F8.
그림 Fig. 3. Analysis for ethanol tolerance of BYKPS-F8 fusant. Aliquots (3 μl) of 10-fold serially diluted cell suspensions from S. cerevisiae BYK-F11, P. stipitisΔura strain and BYKPSF8 fusant were spotted on to YPD containing 8% ethanol (YPDE), then incubated for 3 days at 30℃. #1 and #2 indicate independent clone from BYKPS-F8 fusant.
표 Table 1. Comparison of various phenotypes in S. cerevisiae BYK-F11, P. stipitisΔura strain and BYKPS-F8 fusant

AI 본문요약
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문제 정의

4Mb)은 염색체의 개수와 그 크기가 서로 다르다. 따라서 두 균주의 융합체인 BYKPS-F8 균주의 경우 두 균주의 genome이 융합된 형태로 존재할 가능성이 높으므로 BYKPS-F8 균주의 karyotype 분석을 PFGE를 통해 조사해보았다. S.
Genome shuffling을 위한 원형질체 융합을 위해서는 서로 다른 선택마커(영양요구 및 항생제내성 마커 등)를 가진 두개의 균주가 필요하다. 본 연구에서는 같은 속 간의 원형질체 융합이 아닌 다른 속 간의 원형질의 융합을 시도하고자 한다. Xylose 대사능이 뛰어난 P.
본 연구에서는 다양한 특성을 가진 균주의 육종을 위해 에탄올 내성, 내열성, β-glucanase활성을 가지는 S. cerevisiae 균주와 xylose를 탄소원으로 이용하는 특성을 가지는 P. stipitis 균주를 protoplast fusion의 genome shuffling방법을 이용하여 다른 속(genus)간의 융합을 통한 새로운 균주의 육종을 시도하였다.

제안 방법

CHEF gel electrophoresis의 조건은 106°의 angle로 3.0 V/cm에서 48시간 동안 500초의 interval로 switching 하였고, 전기영동 후 0.5 μg/ml의 ethidium bromide (EtBr)로 염색 후 UV상에서 karyotype을 확인하였다.
P. stipitisΔura 균주를 구축하기 위해서 URA3 유전자와 KanMX 유전자의 영역을 overlap PCR을 통해 증폭하였다.
S. cerevisiae BYK-F11과 P. stipitisΔura 균주를 각각 YPD 배지에 접종하여 30℃에서 하루 동안 배양하여 자란 균체(약 2×10 8 cells)를 원심분리하여 회수하였다.
URA3 유전자의 앞부분(5’-300bp 영역)을 증폭하기 위해 p.ura3-F1 (5’-ATGGTCAACGTCCAAACCTA-3’)과 p.ura3-R3 (5’-TGGAGCTCCAGCTTTTGTTCCCTTTTTTCC AATGTCTGCG-3’) primer를 사용하였으며, KanMX 유전자(1.69kb)를 증폭하기 위해서는 pBlue-F (5’-AAAGGGAACAAAAGCTGGAG-3’)와 pBlue-R (5’-GCCCGGGGGATCCACTAGTT-3’) primer 를 사용하였다.
구축된 3개의 PCR 단편을 template로 사용하고, p.ura3-F1과 p.ura3-R2 primer를 사용하여 5’-ura3-KanMXura3-3’ 단편을 증폭하였다.
그래서 S. cerevisiae BYK-F11와 P. stipitisΔura 그리고 BYKPS-F8 균주를 2%의 xylose가 포함된 YPX배지에서 배양하여 BYKPS-F8 균주에서도 P. stipitisΔura 균주에서처럼 xylose 이용능을 가지는지 조사하였다.
그리고 URA3 유전자의 뒷부분(3’-300bp 영역)을 증폭하기 위해 p.ura3-F2 (5’-TCTAGAACT AGTGGATCC CCCGGGCACTGTGGAAATCGCC-3’)와 p.ura3-R2 (5’-TTA CACTTGGCTTGTCTTCT-3’) primer를 사용하여 각각의 단편을 구축하였다.
다양한 phenotype을 가진 다른 속의 두 균주 융합을 통해 xylose 대사, β-glucanase 활성, 에탄올 내성 및 내열성을 모두 가진 새로운 생물시스템의 구축을 시도해 보았다.
융합체 BYKPS-F8 균주의 단일 클론(#1 and #2 independent clone)의내열성을 조사해 본 결과, 40°C에서 모균주 BYK-F11 균주 정도의 내열성을 나타내었고, 40℃를 초과한 온도에서는 모균주와 마찬가지로 성장속도가 저하됨을 관찰 할 수 있었다(data not shown). 다음으로 융합균주의 에탄올내성 정도를 알아보기 위해 8% 에탄올이 첨가된 YPD 고체배지에 각각의 균주를 동일한 농도로 spot 하여 30℃에서 3일 동안 배양하였다. 그결과 모균주인 BYK-F11 균주는 에탄올에 내성이 있기 때문에 YPDE (8%)배지에서 잘 자랐지만, P.
따라서 URA3 유전자를 선별마커로 사용하기 위해, KanMX 유전자의 삽입으로 URA3 유전자의 기능이 결실된 P. stipitisΔura 균주를 제작하였다.
먼저 BYK-F11 균주와 P. stipitisΔura 균주를 각각 zymolyase를 처리하여 원형질체화 시키고, 각각의 원형질체를 융합시켜 SD배지에서 자란 22개의 colony를 1차 선별하였다.
stipitisΔura 균주를 각각 zymolyase를 처리하여 원형질체화 시키고, 각각의 원형질체를 융합시켜 SD배지에서 자란 22개의 colony를 1차 선별하였다. 선별된 융합체들의 확실한 혼성화 유무를 알기 위해 2차 선별로 SD선별배지에 geneticin을 첨가한 배지에서 배양을 하였다. 선택된 22개의 융합체 중에서 2개의 융합체(No.
융합균주의 내열성 및 에탄올 내성 증가 정도를 알아보기 위해 먼저 모균주와 융합균주 BYKPS-F8 균주를 대상으로 한내열성 조사를 해보았다. 모균주 S.
융합체의 β-glucanase 활성을 보기 위해서 YPD 고체배지를 사용하여 plate assay를 수행하였다.
융합체의 확인을 위해 SD배지에 2 mg/ml geneticin을 넣은 배지를 사용하여 스크리닝을 하였으며 β-glucanase의 발현을 위한 배지로는 YPD 배지를 사용하고, xylose 이용능과 에탄올 생산성을 조사하기 위해 2% xylose가 포함된 YPX 배지를 사용하였다.
이렇게 증폭한 단편을 P. stipitis 균주에 도입하여 상동재조합에 의해 URA3 유전자가 결실된 P. sitipitisΔura 균주를 구축하였다.
효모균주들의 에탄올 생산성을 확인하기 위해 배양된 시료를 원심분리 후 상등액을 gas chromatograph (GC)를 이용하여 분석하였다. GC는 HP 5890 series II를 사용하였고, 컬럼은 HP-FFAP capillary column (Agilent technologies, Canada, Cross-Linked PEG-TPA)을 사용하였다.

대상 데이터

BYK-F11(MATα leu2-3Δ0 ura3-Δ0 his3-Δ200, Δ1 lys2-Δ0, pAInu-exgA (URA3)) 균주는 에탄올 내성과 내열성이 뛰어난 S. cerevisiae YKY020 균주와 Aspergillus oryzae 유래의 exo-β-1,3-glucanase 유전자(EXGA)가 도입되어 β-glucanase 활성을 가지는 S. cerevisiae BY4742Δexg1/pAInu-exgA 재조합균주의 genome shuffling에 의해 구축되었다.
효모균주들의 에탄올 생산성을 확인하기 위해 배양된 시료를 원심분리 후 상등액을 gas chromatograph (GC)를 이용하여 분석하였다. GC는 HP 5890 series II를 사용하였고, 컬럼은 HP-FFAP capillary column (Agilent technologies, Canada, Cross-Linked PEG-TPA)을 사용하였다. 각각의 실험은 3번의 independent 실험을 수행하였으며 그 평균값을 산출하였다.
S. cerevisiae BYK-F11과 P. stipitisΔura 균주의 chromosomal DNA는 1% low melting agarose (Sigma)를 사용하여 DNA plug를 만들어 준비하였다[12].
04% MUG (4-methylumbelliferyl-β-D-glucoside) (Fluka Analytical, USA) 용액 1 ml를 스프레이하여 37℃에서 10분 동안 반응 후 UV상에서 형광을 확인하였다 [7]. 에탄올 내성을 조사하기 위한 배지는 8%의 에탄올이 첨가된 YPDE배지를 사용하였다.
원형질체 융합에 의한 균주 개량을 위해 S. cerevisiae BYK-F11 균주[8]와 P. stipitisΔura 균주를 사용하였다.
효모의 성장배지로는 YPD (1% yeast extract, 2% peptone, 2% dextrose) 배지를 사용하였으며, 원형질체 융합을 선별하기 위한 선별배지로는 SD (0.67% yeast nitrogen without base amino acids, 2% dextrose) 배지에 원형질체의 삼투압 유지를위해 1.2 M sorbitol을 넣은 배지(SD-sorbitol)를 사용하였다. 융합체의 확인을 위해 SD배지에 2 mg/ml geneticin을 넣은 배지를 사용하여 스크리닝을 하였으며 β-glucanase의 발현을 위한 배지로는 YPD 배지를 사용하고, xylose 이용능과 에탄올 생산성을 조사하기 위해 2% xylose가 포함된 YPX 배지를 사용하였다.

데이터처리

GC는 HP 5890 series II를 사용하였고, 컬럼은 HP-FFAP capillary column (Agilent technologies, Canada, Cross-Linked PEG-TPA)을 사용하였다. 각각의 실험은 3번의 independent 실험을 수행하였으며 그 평균값을 산출하였다.

성능/효과

이러한 결과는 genome shuffling에 의해 Saccharomyces 속과 Pichia 속간의 protoplast fusion이 성공적으로 이루어졌음을 시사한다. Protoplast fusion에 의한 genome shuffling의 효율은 같은 속의 효모균주에 적용하였을 경우 약 15% 정도의 융합률(fusion efficiency)을 보이는데 반해[8] 다른 속의 효모균주에 적용한 본 연구에서는 약 9%의 융합률을 보였다. 이 융합률은 protoplast fusion법의 효율이 20% 이하임을 감안하면 결코 낮은 수치가 아니며 인위적인 다른 속간의 균주 융합에 이 방법이 효율적임을 시사한다.
S. cerevisiae BYK-F11 균주보다 상대적으로 염색체의 사이즈가 큰 P. stipitisΔura 균주의 염색체 분리조건으로 PFGE를 진행하였고, 그 결과, BYKPS-F8 균주의 경우, 모균주 S. cerevisiae BYK-F11와 P. stipitisΔura 균주의 genome을 모두 가지고 있는 형태의 karyotype을 보임을 확인 할 수 있었다(Fig. 2A, lane 3).
그 결과 S. cerevisiae인 BYK-F11 균주는 xylose를 직접적으로 이용하지 못해 배양 48시간까지 거의 자라지 못했음을 확인 할 수 있었고, 융합체인 BYKPS-F8 균주는 배양 48시간째에 모균주인 BYK-F11 균주보다 6배, P. stipitisΔura 균주보다는 1.2배 정도 더 잘 자랐음을 확인할 수있었다(Fig. 2B).
그 결과, 영양분이 풍부한 YPD배지에서는 P. stipitis 균주(WT)와 P. stipitisΔura 균주 모두 잘 자랐지만, uracil이 들어 있지 않은 최소배지(SC-uracil)에서는 P. stipitisΔura 균주가 자라지 못하는 것으로 보아 URA3 유전자가 결실되었음을 확인하였다(Fig. 1A).
그결과 모균주인 BYK-F11 균주는 에탄올에 내성이 있기 때문에 YPDE (8%)배지에서 잘 자랐지만, P. stipitisΔura 균주는 YPDE 배지에서 잘 자라지 못하는 것을 확인하였다.
하지만, 융합체의 경우, 혼성화에 의해 단순히 두 균주가 섞여있을 가능성도 배제할 수 없다. 그러므로 BYKPS-F8 균주를 YPD배지에서 24시간 배양한 후, SD배지에서 자란 single colony를 random하게 선택 하여 PFGE를 재실시해 본 결과, 융합체와 같은 karyotype을 보임을 확인하였다. 이러한 결과는 genome shuffling에 의해 Saccharomyces 속과 Pichia 속간의 protoplast fusion이 성공적으로 이루어졌음을 시사한다.
따라서 22개 융합체 중에서 2개의 융합체(No. 8, 20) 만이 각각 모균주의 표현형을 모두 가지고 있다고 판단하고, 그 중 β-glucanase 활성이 가장 높은 융합체 no.8 을 최종 선정하여 BYKPS-F8 균주로 명명하였다.
또한 BYKPS-F8 균주의 경우 이배체인 모균주 S. cerevisiae BYK-F11균주와 일배체인 P. stipitisΔura 균주의 융합에 의해 구축된 삼배체(triploid)로 추정되며, 일배체보다 성장속도가 더 향상되었을 가능성이 높고, 탄소원인 xylose의 이용능도 모균주 보다 다소 향상되었을 것이라고 생각된다.
3). 또한 에탄올 내성이 높은 BYKPS-F8 균주를 20 g/l의 xylose 배지에서 약 72시간정도 배양한 후 에탄올 생산성을 조사해 본 결과, 약 7.5 g/l의 에탄 올이 생산되었다. 이는 모균주인 BYK-F11 균주가 xylose를 거의 이용하지 못하는 것에 반해 BYKPS-F8 균주는 P.
본 연구에서는 protoplast fusion법을 통한 genome shuffling으로 다양한 표현형을 가진 다른 속간의 균주 융합을 시도하였고, 성공적으로 두 모균주의 특성을 모두 가지는 융합 균주를 구축할 수 있었다(Table 1). 비록 본 연구에서는 내열성, 에탄올 내성 및 xylose 이용능에 초점을 맞추어 균주개량을 유도하였지만, 이는 다양한 바이오매스(cellulose, glucan, xylan, agar 등)의 당화효소를 가진 균주[6, 10]의 이용으로 효율적인 바이오에탄올 생산이 가능한 생물시스템의 개량뿐만 아니라 산업적으로 유용한 균주의 개량에도 손쉽게 적용 가능할 것이라 기대한다.
선택된 22개의 융합체 중에서 2개의 융합체(No. 2, 10)는 모균주(S and P)와 같이 선별배지에서 자라지 못하는 것을 확인하였고, 3개의 융합체(No. 8, 10, 20)에서는 β-glucanase 활성이 나타남을 확인할 수 있었다(Fig. 1B).
융합체 BYKPS-F8 균주의 단일 클론(#1 and #2 independent clone)의내열성을 조사해 본 결과, 40°C에서 모균주 BYK-F11 균주 정도의 내열성을 나타내었고, 40℃를 초과한 온도에서는 모균주와 마찬가지로 성장속도가 저하됨을 관찰 할 수 있었다(data not shown).
이 결과는 BYKPS-F8 균주가 genome shuffling에 의해 P. stipitisΔura 균주가 가지는 xylose metabolism pathway를 가졌음을 시사한다.
이는 모균주인 BYK-F11 균주가 xylose를 거의 이용하지 못하는 것에 반해 BYKPS-F8 균주는 P. stipitisΔura 균주 정도의 에탄올을 생산할 수 있음을 알 수 있었다.
그러므로 BYKPS-F8 균주를 YPD배지에서 24시간 배양한 후, SD배지에서 자란 single colony를 random하게 선택 하여 PFGE를 재실시해 본 결과, 융합체와 같은 karyotype을 보임을 확인하였다. 이러한 결과는 genome shuffling에 의해 Saccharomyces 속과 Pichia 속간의 protoplast fusion이 성공적으로 이루어졌음을 시사한다. Protoplast fusion에 의한 genome shuffling의 효율은 같은 속의 효모균주에 적용하였을 경우 약 15% 정도의 융합률(fusion efficiency)을 보이는데 반해[8] 다른 속의 효모균주에 적용한 본 연구에서는 약 9%의 융합률을 보였다.
stipitisΔura 균주는 YPDE 배지에서 잘 자라지 못하는 것을 확인하였다. 하지만 BYKPS-F8 균주는 모균주인 BYK-F11 균주보다 높은 에탄올 내성을 나타냄을 확인 할 수 있었고, 각각의 단일 클론에서의 차이는 보이지 않았다(Fig. 3). 또한 에탄올 내성이 높은 BYKPS-F8 균주를 20 g/l의 xylose 배지에서 약 72시간정도 배양한 후 에탄올 생산성을 조사해 본 결과, 약 7.
다형질(multiple phenotypes) 균주를 구축하기 위해 외래의 형질(유전자 및 염색체)을 도입하고자 할 때, 세포는 종종 도입된 형질을 거부하고 plasmid의 결실이나 다배체의 경우는 염색체상에서 결실시키려는 경향이 있다. 하지만 BYKPS-F8 균주의 경우에는 약 260시간의 장기배양 후에도 도입한 형질을 모두 유지하고 있음을 확인하여 안정적으로 융합체를 형성하고 있음을 확인하였다(data not shown).

후속연구

stipitis 균주를 protoplast fusion의 genome shuffling방법을 이용하여 다른 속(genus)간의 융합을 통한 새로운 균주의 육종을 시도하였다. 본 연구에서 개량한 균주시스템을 이용하여 해조류나 목질계 유래의 biomass로 부터 바이오에탄올을 효율적으로 생산할 수 있을 것이라 생각되며, 또한 이 균주는 목적에 따라 더 개량되어 산업적으로 유용하게 사용될 것이라 기대된다.
본 연구에서는 protoplast fusion법을 통한 genome shuffling으로 다양한 표현형을 가진 다른 속간의 균주 융합을 시도하였고, 성공적으로 두 모균주의 특성을 모두 가지는 융합 균주를 구축할 수 있었다(Table 1). 비록 본 연구에서는 내열성, 에탄올 내성 및 xylose 이용능에 초점을 맞추어 균주개량을 유도하였지만, 이는 다양한 바이오매스(cellulose, glucan, xylan, agar 등)의 당화효소를 가진 균주[6, 10]의 이용으로 효율적인 바이오에탄올 생산이 가능한 생물시스템의 개량뿐만 아니라 산업적으로 유용한 균주의 개량에도 손쉽게 적용 가능할 것이라 기대한다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	바이오에탄올을 생산하기 위한 효모 균주는 어떤 것이 있는가?	바이오에탄올을 생산하기 위한 효모 균주로는 Saccharomyces cerevisiae, Pichia sp., Kluyveromyces marxianus 등이 있다. 이 중 S.
	바이오에탄올은 무엇으로부터 생산될 수 있는가?	이런 대체에너지들 중 휘발유의 대체 연료인 바이오에탄올의 생산에 관한 연구 및 보급이 빠르게 확산되고 있는 추세이다. 바이오에탄올은 다양한 곡물계, 목질계 또는 해조류 유래 바이오매스(cellulose, xylan, agar, laminaran 등)로부터 생산될 수 있으며, 이러한 바이오매스로부터 발효당으로의 당화(saccharification) 및 발효(fermentation)공정이 요구된다[2, 9, 15]. 에탄올의 효율적인 생산을 위해 다양한 미생물들이 사용되고 있지만, 에탄올은 미생물 생장의 저해제로 작용하여 배양 중 에탄올의 축적은 세포 성장과 목적 제품의 생산율 감소로 이어지는 등 세포에 스트레스를 준다고 알려져 있다 [1].
	바이오에탄올을 생산하기 위한 효모 균주 중 S. cerevisiae는 어떤 특징을 갖는가?	이 중 S. cerevisiae는 대표적인 전통 알코올발효 미생물로서 그 이용가치가 높고 genome 서열이 다 밝혀져 있기 때문에 재조합균주의 제작 등 분자유전학적 균주 육종에 유용하다. 또한 Pichia pastoris는 메탄올 자화효모로서 고농도 세포 배양 시발생되었던 단백질 발현률 저하를 막을 수 있다는 장점이 있으며[11], P.

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Zhu, Y., Wu, L., Zhu, J., Xu, Y. and Yu, S. 2018. Quantitative proteomic analysis of xylose fermentation strain Pichia stipitis CBS 5776 to lignocellulosic inhibitors acetic acid, vanillin and 5-hydroxymethylfurfural. FEMS Microbiol. Lett. 365, doi: 10.1093/femsle/fny245.

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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