[논문]16S rRNA 유전자 서열 분석을 이용한 DNA 및 cDNA 기반 장내 미생물 군집 분석의 비교

조혜준; 홍지완; 운노타쯔야

doi:10.7845/kjm.2019.9058

초록
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최근 10년간 미생물생태분석 기반의 연구는 차세대염기서열분석법이 개발된 이래로 지속적으로 증가하고 있다. 장내미생물생태와 건강의 연관성은 미생물 생태학 분야에 있어서 중요한 결과로 여겨지고 있다. 미생물 군집 분석은 주로 16S rRNA 유전자 가변 영역의 염기서열을 통해 분석되지만 이는 미생물의 활성 정보를 제공하지 않는다. 본 연구에서는 cDNA 기반의 미생물 생태분석을 수행하고 DNA 및 cDNA기반의 미생물생태분석 결과를 비교하였다. 두 가지의 서로 다른 접근법이 Butyrate producer와 probiotics와 같이 장내 대사과정에서 중요한 미생물의 abundance 뿐만 아니라 비만 지표로 알려진 Firmicutes 와 Bacteroidetes의 비율에 있어서 차이가 있음을 나타내었다. 따라서, cDNA 기반 미생물 군집은 이전에 수행된 DNA 기반 미생물 군집 분석과 비교하여 장내미생물생태의 역할과 관련된 또 다른 분석 방향성을 제공한다.

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Studies based on microbial community analyses have increased in the recent decade since the development of next generation sequencing technology. Associations of gut microbiota with host's health are one of the major outcomes of microbial ecology filed. The major approach for microbial community ana...

Studies based on microbial community analyses have increased in the recent decade since the development of next generation sequencing technology. Associations of gut microbiota with host's health are one of the major outcomes of microbial ecology filed. The major approach for microbial community analysis includes the sequencing of variable regions of 16S rRNA genes, which does not provide the information of bacterial activities. Here, we conducted RNA-based microbial community analysis and compared results obtained from DNA- and its cDNA-based microbial community analyses. Our results indicated that these two approaches differed in the ratio of Firmicutes and Bacteroidetes, known as an obesity indicator, as well as abundance of some key bacteria in gut metabolisms such as butyrate producers and probiotics strains. Therefore, cDNA-based microbial community may provide different insights regarding roles of gut microbiota compared to the previous studies where DNA-based microbial community analyses were performed.

주제어

표/그림 (3)

그림 Fig. 1. Analysis of ecological indices for species richness (A) and evenness (B).
그림 Fig. 2. Taxonomic composition analyses at the phylum level (A) and the genus level (B).
그림 Fig. 3. Differentially more abundant OTUs in cDNA (A) and DNA (B).

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제안 방법

PCR was performed using a KAPA HiFi HotStart ReadyMix PCR Kit (KAPABIOSYSTEMS) as follows: 95°C for 2 min, 25 cycles of 95°C for 20 sec, 55°C for 15 sec, and 72°C for 1 min, and 72°C for 5 min.

데이터처리

, richness and evenness). Distance between each sample was calculated using Bray-curtis coefficient. Nonmetric multidimensional scaling (NMDS) analysis and analysis of molecular variance (AMOVA) were performed using nmds and amova MOTHUR subroutines, respectively.

성능/효과

According to the differential abundance test, there were 43 and 20 OTUs significantly abundant in cDNA and DNA groups, respectively (Fig. 3). Significantly more abundant OTUs in cDNA group include unclassified OTUs in the order Clostridiales (n = 7) and the family Lachnospiraceae (n = 9), while including 5 OTUs in the genus Oscillospira, 5 OTUs in the genus Ruminococcus, and 2 OTUs in the genus Lactobacillus (Fig.
Results in Fig. 1 show that species richness (Chao) was not significantly different between DNA and cDNA groups, while species evenness (Shannon) was significantly higher in cDNA groups compared to that of DNA. These results suggest that species abundance in cDNA groups are more evenly distributed.

후속연구

, Firmicutes and Bacteroidetes) and several key bacteria such as SCFA producers and probiotic strains. While cDNAbased microbial community analysis is not an accepted protocol for the studies regarding gut microbiota, the study suggest it is worth investing further, which in future may provide new aspects of roles of gut microbiota.

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