[논문]난소 절제 동물모델을 이용한 경옥고의 갱년기 증후군 개선 효과

조경남; 정서윤; 배호정; 류종훈

doi:10.22889/kjp.2020.51.4.310

난소 절제 동물모델을 이용한 경옥고의 갱년기 증후군 개선 효과
The Ameliorating Effect of Kyung-Ok-Go on Menopausal Syndrome Observed in Ovariectomized Animal Model 원문보기

생약학회지, v.51 no.4, 2020년, pp.310 - 316

조경남 (경희대학교 나노의약생명과학과) , 정서윤 (경희대학교 나노의약생명과학과) , 배호정 (경희대학교 나노의약생명과학과) , 류종훈 (경희대학교 나노의약생명과학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Kyung-Ok-Go (KOK) is a traditional prescription used for debilitating natural aging and post-illness debilitation. KOK has been used in a variety of ways because it strengthens immunity, prevents illness, and helps recovery in case of illness. In particular, recent research has revealed that KOK helps improve memory and cognition. Therefore, in this study, we investigated whether KOK was effective in improving memory decline and depression-state observed during menopause. In the present study, we employed ovariectomized mouse as an animal model for measuring menopausal syndrome. The administration of KOK for 8 weeks, the object recognition memory and working memory were improved in novel object recognition test and Y-maze test. And in the forced swimming test, the immobility time were decreased. Additionally, the expression level of mature brain derived neurotropic factor (mBDNF) was increased by KOK administration in ovariectomized mouse hippocampus. These results suggested that KOK could improve cognitive decline and depression during menopausal period, and it might be come from enhancing expression level of mBDNF in hippocampus.

주제어

표/그림 (6)

그림 Fig. 1. The ameliorating effect of Kyung-Ok-Go on novel object recognition memory in ovariectomy-induced memory deficit in mice. The object preference ratio (A) and discrimination ratio (B) were presented. The results were expressed as mean means ± S.E.M (n = 8-10/group). (*P < 0.05, compared to the sham control group; ^#P < 0.05, compared to the ovariectomized group; ^$P < 0.05, compared to the estradiol treatment group). OVX, Ovariectomized group. KOK, Kyung-Ok-Go. Ed, estradiol.
그림 Fig. 2. The ameliorating effect of Kyung-Ok-Go in Y-maze test on ovariectomy-induced memory deficit in mice. The spontaneous alteration (A) and total arm entry (B) of mice were presented. Each data was expressed as means ± S.E.M (n = 8-10/group). (*P < 0.05, compared to the sham control group; ^#P < 0.05, compared to the ovariectomized group). OVX, Ovariectomized group. KOK, Kyung-Ok-Go. Ed, estradiol.
그림 Fig. 3. The ameliorating effect of Kyung-Ok-Go on ovariectomy-induced depression in mice measured in forced swimming test. The immobility time of mice were presented. Each data was expressed as means ± S.E.M (n = 8-10/group). (*P < 0.05, compared to the sham control group; ^#P < 0.05, compared to the ovariectomized group). OVX, Ovariectomized group. KOK, Kyung-Ok-Go. Ed, estradiol.
그림 Fig. 4. The expression levels of mBDNF in hippocampal tissue were measured by western blot analysis. The representative immunoblot of mBDNF and Gapdh were presented (A). The immunoreactivity of mBDNF/Gapdh was normalized to the sham control group (taken as 1.0) (B). The results were expressed as means ± S.E.M (n = 6/group). (*P < 0.05, compared to the sham control group; ^#P < 0.05, compared to the ovariectomized group). OVX, Ovariectomized group. KOK, Kyung-Ok-Go. Ed, estradiol.
표 Table I. The effects of Kyung-Ok-Go on uterine weight and uterine index in ovariectomized mice
표 Table II. The effects of Kyung-Ok-Go on the level of β-estradiol in blood of ovariectomized mice

AI 본문요약
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제안 방법

8주간 경옥고(200, 600과 1800 mg/kg)를 경구투여하였으며, 마지막 투여가 있은 60분 후, 마우스를 치사하여 뇌를 적출하였다. 적출한 뇌로부터 대뇌피질과 해마를 분리한 뒤, 각 무게의 10배에 해당하는 냉각 시킨 용액 ［1mM PMSF, 1 mM orthovanadate, 1 mM sodium fluoride, 1 mM EDTA, 0.
경옥고 장기투여로 인해 개선된 인지능력과 우울감이 난소절제 동물모델에서의 estrogen 양의 변화에 의한 것인지 확인하기 위해, 자궁의 크기변화 및 혈중 estradiol의 양을 측정하였다. 일원분산분석결과 각 군에서 자궁지수 및 혈중 estradiol 수치에 유의적인 차이를 확인하였다[자궁지수, F (5, 53) = 168.
난소절제(OVX)로 유도된 기억력 장애 동물모델에서 경옥고 200 mg/kg, 600 mg/kg 및 1800 mg/kg의 용량으로 8주간 투여하여 단기기억 개선 효과를 Y자 미로 시험을 이용하여 확인하였다. 일원분산분석 결과 각 투여군에서 변경 행동력에 유의적인 차이를 확인 하였다[F (5, 51) = 5.
본 연구에서는 경옥고 장기투여를 통해 갱년기에 발생되는 다양한 증후군 중 인지능력과 우울감 개선 효과를 검증 하기 위하여 난소 절제술로 유도한 갱년기 동물모델을 이용하여, 인지능력을 평가할 수 있는 새로운 물체 인지능 평가와 Y자 미로 시험을 진행하였으며, 우울감을 평가할 수 있은 강제수영실험을 진행하였다. 새로운 물체 인지능 평가에서는 경옥고, estradiol 투여 그룹에서 모두 갱년기로 인해 감소되었던 인지기능이 모든 용량에서 새로운 물체에 대한 관심도가 유의성 있게 증가됨을 확인할 수 있었다.
본 연구에서는 난소절제(ovariectomy OVX)된 동물 모델을 이용하여, Y자 미로 시험 및 새로운 물체 인식실험, 강제 수영 시험을 통해 경옥고의 갱년기 증상 중 인지력 결핍 및 우울증 개선 효능을 평가하고, Western blot을 통해 관련된 분자생물학적 기전을 탐색하였다. 난소절제를 통해 유도된 갱년기 증후군 동물에서 경옥고 투여에 의한 증상 개선 효능이 있다면, 경옥고가 여성 갱년기 증상 개선과 예방에 사용될 수 있는 치료제로서 가치가 있다고 사료된다.

대상 데이터

실험재료

실험에서 사용한 경옥고(Kyung-Ok-Go, KOK) 는 광동제약(주)에서 제공받아 사용하였다. 제공된 경옥고는 생지황(Rehmannia glutinosa Liboschitz var.
암컷의 ICR mouse 7주령(25-30 g)을 주식회사 오리엔트(경기도 성남시 중원구 상대원동)에서 공급받아 사용하였다. 실험동물은 1주일간 적응시켰으며 적응기간 동안 동물실의 온도는 23±1°C, 습도 60±10% 내외, 명암주기 12시간 주기로 일정하게 유지하였다.

데이터처리

으로 나타내었다. Y자 미로 시험 및 Western blot 실험결과는 일원분산 분석(One-way ANOVA)을 이용하여 통계적 유의성 여부를 판단하였고, 유의적인 차이가 있을 경우에 사후 검증으로 Turkey test를 실시하여 군간의 유의적 차이를 비교하였다. 새로운 물체 인식 시험은 이원분산분석을 이용하여 통계적 유의성 여부를 판단하였고, 유의적인 차이가 있을 경우 Bonferroni post-tests방법을 이용하여 군간의 유의성을 검정하였다.
Y자 미로 시험 및 Western blot 실험결과는 일원분산 분석(One-way ANOVA)을 이용하여 통계적 유의성 여부를 판단하였고, 유의적인 차이가 있을 경우에 사후 검증으로 Turkey test를 실시하여 군간의 유의적 차이를 비교하였다. 새로운 물체 인식 시험은 이원분산분석을 이용하여 통계적 유의성 여부를 판단하였고, 유의적인 차이가 있을 경우 Bonferroni post-tests방법을 이용하여 군간의 유의성을 검정하였다. 모든 실험결과는 95% 신뢰 수준 이하에서 실시하였으며, 유의성 검증은 p값이 0.

성능/효과

또한, 600과 1800 mg/kg에서 난소절제군(OVX)에 비해 유의적으로 변경 행동력이 증가되어(Fig. 2A), 난소절제된 동물에서 8주간의 경옥고 장기투여로 인해 단기 기억이 회복되었음을 확인하였다. 그러나 4주간의 경옥고 투여에서는 유의적인 변화를 관찰할 수 없었다(data not shown).
갱년기 동물모델에서 8주간의 경옥고 투여로 인한 우울감 개선을 확인하기 위하여 강제 수영 시험을 수행한 결과, 각 군에 유의적인 차이가 있음을 확인하였다[일원분산분석, F (5, 53) = 4.069, P<0.01](Fig
경옥고 장기투여를 통해 나타난 인지능력 및 우울감 개선 효과의 원인을 규명하고자 자궁지수와 혈중 estradiol 수치를 측정한 결과, 난소절제를 통해 저하된 자궁지수와 혈중 estradiol 수치를 경옥고 장기투여가 개선하지 못함을 확인 하였다. 이는 경옥고 장기투여를 통해 나타난 갱년기 증후군 개선효과가 여성호르몬 분비와는 관련이 없음을 시사한다.
난소절제된 동물에서 대조군에 비해 자궁지수 및 혈중 estradiol 수치가 유의적으로 감소함을 확인하였으며(P<0.05), 또한, estradiol 투여에 의해 난소절제된 동물에서 감소된 자궁지수 및 혈중 estradiol 수치가 대조군 수준으로 개선됨을 확인하였다(P<0.05)
또한, 단기기억을 평가하는 Y자 미로 시험(Y-maze task)에서는 경옥고 8주 투여 시 감소되었던 기억력이 농도 의존적으로 증가하는 경향을 보이며, 600 및 1800 mg/kg 용량에서는 유의성 있는 증가를 보여 단기기억 개선에 효과가 있음을 확인하였다. 난소절제로 유도된 갱년기 동물모델에서 강제 수영 실험을 실시한 결과, 난소 절제로 인한 우울감 및 의욕 저하는 8주간 경옥고 600 및 1800 mg/kg 투여에 의해 정상대조군 수준으로 개선됨을 확인하였다. 이러한 결과를 통해 경옥고 장기투여가 갱년기에서 보여지는 인지능력 저하와 우울감을 개선시킬 수 있음을 확인하였다.
05). 따라서 난소절제로 유도된 우울증 모델 마우스에서 경옥고 8주(600와 1800 mg/kg) 투여가 우울증 개선 효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.
새로운 물체 인지능 평가에서는 경옥고, estradiol 투여 그룹에서 모두 갱년기로 인해 감소되었던 인지기능이 모든 용량에서 새로운 물체에 대한 관심도가 유의성 있게 증가됨을 확인할 수 있었다. 또한, 단기기억을 평가하는 Y자 미로 시험(Y-maze task)에서는 경옥고 8주 투여 시 감소되었던 기억력이 농도 의존적으로 증가하는 경향을 보이며, 600 및 1800 mg/kg 용량에서는 유의성 있는 증가를 보여 단기기억 개선에 효과가 있음을 확인하였다. 난소절제로 유도된 갱년기 동물모델에서 강제 수영 실험을 실시한 결과, 난소 절제로 인한 우울감 및 의욕 저하는 8주간 경옥고 600 및 1800 mg/kg 투여에 의해 정상대조군 수준으로 개선됨을 확인하였다.
본 연구에서는 경옥고 장기투여를 통해 갱년기에 발생되는 다양한 증후군 중 인지능력과 우울감 개선 효과를 검증 하기 위하여 난소 절제술로 유도한 갱년기 동물모델을 이용하여, 인지능력을 평가할 수 있는 새로운 물체 인지능 평가와 Y자 미로 시험을 진행하였으며, 우울감을 평가할 수 있은 강제수영실험을 진행하였다. 새로운 물체 인지능 평가에서는 경옥고, estradiol 투여 그룹에서 모두 갱년기로 인해 감소되었던 인지기능이 모든 용량에서 새로운 물체에 대한 관심도가 유의성 있게 증가됨을 확인할 수 있었다. 또한, 단기기억을 평가하는 Y자 미로 시험(Y-maze task)에서는 경옥고 8주 투여 시 감소되었던 기억력이 농도 의존적으로 증가하는 경향을 보이며, 600 및 1800 mg/kg 용량에서는 유의성 있는 증가를 보여 단기기억 개선에 효과가 있음을 확인하였다.
음성대조군(OVX)은 대조군에 비해 부동 상태의 시간이 유의적으로 증가되는 것을 확인할 수 있으며(P<0.05), 8주 동안 경옥고 600 mg/kg과 1800mg/kg 투여군과 estradiol 투여군에서 부동 상태의 시간이 음성대조군 보다 유의성 있게 감소함을 관찰하였다(P<0.05)
064). 이러한 감소는 estradiol 투여에 의해 유의적으로 증가하였으며, 경옥고를 8주 동안 투여했을 때 200 mg/kg, 600 mg/kg 및 1800 mg/kg 에서 농도 의존적으로 변경 행동력이 증가함을 확인하였다. 또한, 600과 1800 mg/kg에서 난소절제군(OVX)에 비해 유의적으로 변경 행동력이 증가되어(Fig.
난소절제로 유도된 갱년기 동물모델에서 강제 수영 실험을 실시한 결과, 난소 절제로 인한 우울감 및 의욕 저하는 8주간 경옥고 600 및 1800 mg/kg 투여에 의해 정상대조군 수준으로 개선됨을 확인하였다. 이러한 결과를 통해 경옥고 장기투여가 갱년기에서 보여지는 인지능력 저하와 우울감을 개선시킬 수 있음을 확인하였다.

후속연구

본 연구에서는 난소절제(ovariectomy OVX)된 동물 모델을 이용하여, Y자 미로 시험 및 새로운 물체 인식실험, 강제 수영 시험을 통해 경옥고의 갱년기 증상 중 인지력 결핍 및 우울증 개선 효능을 평가하고, Western blot을 통해 관련된 분자생물학적 기전을 탐색하였다. 난소절제를 통해 유도된 갱년기 증후군 동물에서 경옥고 투여에 의한 증상 개선 효능이 있다면, 경옥고가 여성 갱년기 증상 개선과 예방에 사용될 수 있는 치료제로서 가치가 있다고 사료된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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