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문제 정의
- 질병관리본부에서는 매개체 전파 질환의 효율적인 예방·관리를 위해 매개체 발생 분포 및 병원체 감염률에 대한 정기적인 감시자료를 확보하고자 전국에 권역별 매개체 감시 거점센터를 구축하여 운영 중에 있다. 본 연구는 전북 권역거점센터를 운영하면서 전북지역의 쯔쯔가무시증 환자 발생에 따른 털진드기의 종류와 계절적 분포 양상을 알아보기 위해 채집기 이용과 야생 설치류를 포획하여 O. tsutsugamushi 감염 상태를 확인하고 역학적 기초 분포 자료 제공에 기여하고자 한다.
제안 방법
- tsutsugamushi의 특이적 시발체인 primer sets (First F: 5’-GCA ATA TTG CTA GTG CAA TGT CTG C-3’, First R: 5’-ATG CAT GCA TGR CGC TKC AAT TTA-3’; Second F: 5’-ATA GGC CTA TAA GTA TWG CKG ATC G-3’, Second R: 5’-CAT CTA GAY GCA CTA TTA GGC AAA-3’)을 이용하여 증폭된 475bp target size 밴드를 검출하였다[20]. DNA 추출은 G-spinTM Total DNA Extraction Mini Kit (iNtRON Biotech-nology, Seongnam, Korea)를 사용하였고, O. tsutsugamushi 를 확인하기 위해 INNOPLEXTM Tsutsu detection kit (iNtRON Biotechnology, Seongnam, Korea)를 사용하여 Nested PCR을 실시하였다[20]. 실험 방법은 첫 번째 PCR 단계로 pre-mixture tube에 First primer set 0.
- 그리고 24시간마다 물에 떨어진 털진드기를 채집해서 실체현미경 (Olympus SZ61; Olympus, Tokyo, Japan)으로 경검하고 보관하였다[15, 18].
- 보존된 털진드기를 한 마리씩 slide glass 위에 올려놓고 PVA 포매용액(polyvinyle alcohol 56%, lactic acid 22%, phenol solution 22%) 한 방울을 떨어뜨린 후 멸균 바늘을 사용하여 등 쪽을 위로 향하게 하고 cover glass를 씌웠다[15]. 마지막으로 Slide glass에 올려놓은 털진드기를 비등점까지 순간적으로 가열해서 털진드기 표본 내부를 투명하게 하고 동시에 다리를 곧게 뻗치도록 하였다[15, 19]. 제작된 털진드기 표본은 광학현미경(Olympus CX23; Olympus, Tokyo, Japan)을 이용하여 100배와 400배로 관찰하여 한국 털진드기 형태학적 특징의 표준 분류 방법[18]에 따라 동정하고 보관하였다[15].
- PCR에 사용하였다. 병원체의 검출방법은 O. tsutsugamushi의 특이적 시발체인 primer sets (First F: 5’-GCA ATA TTG CTA GTG CAA TGT CTG C-3’, First R: 5’-ATG CAT GCA TGR CGC TKC AAT TTA-3’; Second F: 5’-ATA GGC CTA TAA GTA TWG CKG ATC G-3’, Second R: 5’-CAT CTA GAY GCA CTA TTA GGC AAA-3’)을 이용하여 증폭된 475bp target size 밴드를 검출하였다[20]. DNA 추출은 G-spinTM Total DNA Extraction Mini Kit (iNtRON Biotech-nology, Seongnam, Korea)를 사용하였고, O.
- 제작된 털진드기 표본은 광학현미경(Olympus CX23; Olympus, Tokyo, Japan)을 이용하여 100배와 400배로 관찰하여 한국 털진드기 형태학적 특징의 표준 분류 방법[18]에 따라 동정하고 보관하였다[15]. 설치류인 쥐는 종류별로 쥐 한 마리에 기생한 털진드기 개체수를 나타내는 chigger index와 전체 trap에서 채집된 쥐 개체수를 나타내는 trap Index를 구하였다.
- 채집기와 설치류에서 채집한 털진드기는 최대 50마리씩 pooling하여 PCR에 사용하였다. 병원체의 검출방법은 O.
대상 데이터
- 2019년 3월∼11월까지 전라북도 진안군 백운면 일원에서 논, 수로, 밭, 저수지, 야산에서(Figure 1) 설치류가 서식할 만한 장소 주변에 5 m 정도 간격을 두고 각각 20개씩 100개의 Sherman collapsible trap (7.7×9×23 cm; H.B. Sherman, Tallahassee, FL, USA)을 설치해서[15] 들쥐를 포획하였다. 포획된 설치류는 다음날 아침(6∼8시)에 수거해서 trap 운반용 상자에 넣어 실험실로 이송하였다[15, 16].
- 2019년 9월∼12월 둘째 주까지 전라북도 진안군 진안읍 일원에서 논, 밭, 수로, 초지 구역에(Figure 1) 각각 5개씩 총 20개의 채집기를 설치하고 각각에 유인제를 넣어 매주 1회씩 채집된 털진드기를 대상으로 분석하였다[14].
- 야생 설치류에서 채집된 총 3,050마리의 털진드기 중에서 50%를 쯔쯔가무시 병원체 감시에 사용하였다. 야생설치류 1마리를 독립적 pool로 구분 지어 1개의 pool 당 30마리를 초과하지 않도록 설정하였으며 병원체 보유 여부 검사 결과 총 85개의 pools 중 5월과 9월에 각각 1개의 pools에서 양성으로 확인되었다(Figure 3).
- 채집기를 이용한 털진드기는 진안군 진안읍에서 2019년 9월부터 12월 둘째 주까지 일주일마다 한 번씩 논, 밭, 수로, 초지 4 지점에서 조사한 결과 전체 채집 개체 수는 8종 611마리가 채집되었다. 시기별로는 9∼10월 첫째 주까지는 털진드기가 채집되지 않았으나 10월 둘째 주에 5마리를 시작으로 11월 말 넷째 주에는 184마리로 가장 많이 채집되었다.
- 털진드기 종 분류를 위해 9∼12월 둘째 주까지 매주 1회씩, 총 20개의 채집기를 이용하여 채집한 결과 총 개체수는 8종 611 마리가 채집되었다. 종분류 결과는 둥근 혀털진드기(N.
- 털진드기 매개 감염병이다. 털진드기는 성충이 되기 위해서 유충(chigger)시기에 반드시 사람이나 동물의 체액을 흡입하는 과정에서 발생하므로 털진드기의 유충 번식기에 맞추어 채집기를 2019년 9월 첫째 주부터 12월 둘째 주까지 논, 밭, 수로, 초지 구여의 4지점에 각각 5개씩 총 20개의 채집기를 설치하여 8종 611마리가 채집되었다. 시기별 9월과 10월 첫째 주까지는 털진드기가 채집되지 않았으나 10월 둘째 주에 5마리를 시작으로 11월 넷째 주에는 184마리로 가장 많이 채집되었으며 이후에는 점차 개체 수가 감소하였다.
이론/모형
- 마지막으로 Slide glass에 올려놓은 털진드기를 비등점까지 순간적으로 가열해서 털진드기 표본 내부를 투명하게 하고 동시에 다리를 곧게 뻗치도록 하였다[15, 19]. 제작된 털진드기 표본은 광학현미경(Olympus CX23; Olympus, Tokyo, Japan)을 이용하여 100배와 400배로 관찰하여 한국 털진드기 형태학적 특징의 표준 분류 방법[18]에 따라 동정하고 보관하였다[15]. 설치류인 쥐는 종류별로 쥐 한 마리에 기생한 털진드기 개체수를 나타내는 chigger index와 전체 trap에서 채집된 쥐 개체수를 나타내는 trap Index를 구하였다.
- 포획한 설치류는 chloroform (Merck, NJ, USA)을 이용해서 흡입 마취한 후 Jackson 등[17]의 방법에 따라 쥐 종을 동정하였으며 플라스틱 용기에 물을 담아놓고 쥐를 거꾸로 매달아서 물과 약 1 cm 정도를 떨어뜨려 48시간 동안 놓아두었다. 그리고 24시간마다 물에 떨어진 털진드기를 채집해서 실체현미경 (Olympus SZ61; Olympus, Tokyo, Japan)으로 경검하고 보관하였다[15, 18].
성능/효과
- 2로 나타났다. 시기별 11월에 1, 443마리의 털진드기가 채집되어 chigger index는 206.1로 가장 높았고, 4월에 722마리의 털진드기가 채집되어 144.4, 10월에 664마리의 털진드기가 채집되어 110.7 순으로 나타났다(Table 4).
- 0%)로 가장 많이 분리되었다. 야생 설치류 포획으로 털진드기 채집은 66마리의 설치류를 포획해서 털진드기 총 3, 050마리 채집되어 chigger index는 46.2로 나타났다. 월별 chigger index는 11월 206.
- 야생 설치류를 이용한 털진드기 발생조사는 쯔쯔가무시증이 발생된 진안지역에서 2019년 3월부터 11월까지 sherman trap을 설치하여 66마리의 들쥐를 포획한 결과 trap index 0.66이었다. 월별은 9월에 11마리가 포획되어 Trap index 0.
- 쯔쯔가무시 병원체 감시에 사용하였다. 야생설치류 1마리를 독립적 pool로 구분 지어 1개의 pool 당 30마리를 초과하지 않도록 설정하였으며 병원체 보유 여부 검사 결과 총 85개의 pools 중 5월과 9월에 각각 1개의 pools에서 양성으로 확인되었다(Figure 3).
- 7 순으로 나타났다. 이는 털진드기의 생활사와도 일치하는 결과로서 봄부터 산란을 시작하여 무더운 여름철에는 거의 보이지 않다가 가을철부터 밀도가 높아져서 늦가을 11월에 그 수가 정점에 이르게 되는데 봄에는 털진드기를 보호해 주는 풀이나 잡초가 적고 가을철에는 농작물과 풀이 풍부해서 수확 철에 털진드기와 사람 간의 접촉 가능성이 높아짐으로써 환자 발생 호발 시기와도 일치하는 결과를 보였다. 포획된 야생 설치류에서 채집한 털진드기 병원체 감시를 위해 채집한 털진드기의 절반을 사용하였으며 1개의 pool 당 30마리를 초과되지 않도록 설정하였고, 쯔쯔가무시 병원체 보유여부 검사결과 총 85개의 pools 중 5월과 9월에 야산과 수로에서 포획된 등줄쥐로부터 채집한 털진드기에서 각각 1개의 pools에서 양성을 확인하였다.
- 5% 순으로 채집된 결과와 우점종이 서로 다른 차이를 보였다. 이러한 이유는 털진드기의 특성때문으로 선호하는 장소에 군집(진드기섬, mite island)하여 서식하는 특징으로 전북 진안 지역에서는 둥근 혀 털진드기(N. tamiyai) 밀도가 높게 군집하여 서식하고 있음을 확인할 수 있었다.
- 털진드기 종 분류를 위해 9∼12월 둘째 주까지 매주 1회씩, 총 20개의 채집기를 이용하여 채집한 결과 총 개체수는 8종 611 마리가 채집되었다. 종분류 결과는 둥근 혀털진드기(N. tamiyai) 434마리(71.0%)로 가장 많이 분리되었다. 야생 설치류 포획으로 털진드기 채집은 66마리의 설치류를 포획해서 털진드기 총 3, 050마리 채집되어 chigger index는 46.
- 시기별로는 9∼10월 첫째 주까지는 털진드기가 채집되지 않았으나 10월 둘째 주에 5마리를 시작으로 11월 말 넷째 주에는 184마리로 가장 많이 채집되었다. 지역별로는 논, 수로, 밭, 초지에서 각각 379, 172, 41, 19마리가 채집되었으며 채집된 털진드기를 동정한 결과 둥근 혀 털진드기(N. tamiyai) 434마리 (71.0%)로 가장 많이 분리되었고, 사촌수염털진드기(L. gemiticulum) 92마리(15.1%), 수염 털진드기(L. palpale) 40 마리(6.5%) 순으로 동정 되었다(Figure 2, Tables 2, 3).
- 질병관리본부에서는 전국 권역별 기후변화 매개체 감시사업을 16개 권역으로 나누어 전북권을 맡아 시행하는 사업에서 각각의 채집장소를 환자 발생 빈도가 높은 지역을 선정하는데 2018년 쯔쯔가무시증 환자 발생빈도는 전국평균(12.87명/10 만명)과 전북평균(35.32명/10만 명)보다 매우 높은 진안군지역 (122.53명/10만명)에서 가을철에 환자 발생이 지속되고 있어 쯔쯔가무시증의 발생정도를 예측하기 위해 실시한 결과 진안지역의 털진드기에서 쯔쯔가무시 병원체를 봄철과 가을철에 양성이 나타났음을 확인하였다. 특히 농촌 지역인 진안은 면역력이 낮은 노인들의 비율이 높아 쯔쯔가무시 병원체에 대한 인식 부족으로 예방조치가 미흡하여 농사철 중 특히 봄보다 농업 활동이 많고 수확철인 가을에 논이나 밭에서 일을 하거나 휴식을 취할때 털진드기에 대한 노출 기회가 많아 쉽게 감염될 수 있다.
- 11 보였고 채집되지 않은 3월을 제외한 5, 6, 8월에는 10마리씩 각각 포획되었으며 나머지 기간에는 큰 차이가 없었다(Table 4). 채집 환경별로는 야산 27 마리, 수로 18마리, 저수지 11마리, 논 5마리, 밭 5마리로 야산 (40.9%)에서 가장 많이 포획되었다. 포획된 종류로는 등줄쥐 (Apodemus agrarius) 61마리, 대륙밭쥐(Clethrionomys rufocanus) 4마리, 땃쥐(Crocidura lasiura) 1마리로 확인되었다.
- 그러므로 털진드기 산란기인 여름철의 평균기온이 직접적인 영향을 미치는 것으로 추정되지만 이와 같은 결과는 향후 여러 기후요소와 함께 다각적인 분석이 병행되어야 할 것으로 생각된다. 채집기를 이용하여 채집된 털진드기를 동정한 결과 둥근혀털진드기(N. tamiyai) 434마리(71.0%)로 가장 많이 채집된 우점종이었고, 사촌수염털진드기(L. gemiticulum) 92마리(15.1%), 수염털진드기(L. palpale) 40마리(6.5%) 순으로 동정되었던 결과와 비교해보면 2016년 Park 등[22]은 전국 분포 결과 활순털진드기(L. scutellare)가 39.1%로 우점종이었으며, 둥근혀털진드기(N. tamiyai) 23.9%, 광릉 털진드기(N. kwangneungensis) 14.8%, 대잎털진드기(L. pallidum) 14.4% 순으로, 최근 2019 년 전국적 분포[13]에서는 대잎털진드기(L. pallidum)가 53.9% 로 우점종이었고, 동양 털진드기(L. orientale) 13.2%, 활순털진드기(L. scutellare) 9.5% 순으로 채집된 결과와 우점종이 서로 다른 차이를 보였다. 이러한 이유는 털진드기의 특성때문으로 선호하는 장소에 군집(진드기섬, mite island)하여 서식하는 특징으로 전북 진안 지역에서는 둥근 혀 털진드기(N.
- 그러나 설치류 포획 시에 유의해야 할 점은 sherman trap의 설치방법에서 설치자가 얼마나 민감하게 설치하느냐에 따라서 차이가 날 수 있어 설치자의 숙련도가 많은 요인으로 작용하며 또한 설치할 주변의 환경 변화와 포식자의 출현 등이 변수로 작용 할 수도 있다. 포획된 야생 설치류에서 쯔쯔가무시 매개 털진드기 발생 밀도는 66마리의 야생 설치류에서 털진드기가 3,050마리 채집되어 쥐 한 마리당 붙어있는 털진드기 개체수인 chigger index는 46.2로 나타났다. 월별 chigger index는 11월 206.
- 이는 털진드기의 생활사와도 일치하는 결과로서 봄부터 산란을 시작하여 무더운 여름철에는 거의 보이지 않다가 가을철부터 밀도가 높아져서 늦가을 11월에 그 수가 정점에 이르게 되는데 봄에는 털진드기를 보호해 주는 풀이나 잡초가 적고 가을철에는 농작물과 풀이 풍부해서 수확 철에 털진드기와 사람 간의 접촉 가능성이 높아짐으로써 환자 발생 호발 시기와도 일치하는 결과를 보였다. 포획된 야생 설치류에서 채집한 털진드기 병원체 감시를 위해 채집한 털진드기의 절반을 사용하였으며 1개의 pool 당 30마리를 초과되지 않도록 설정하였고, 쯔쯔가무시 병원체 보유여부 검사결과 총 85개의 pools 중 5월과 9월에 야산과 수로에서 포획된 등줄쥐로부터 채집한 털진드기에서 각각 1개의 pools에서 양성을 확인하였다.
- 9%)에서 가장 많이 포획되었다. 포획된 종류로는 등줄쥐 (Apodemus agrarius) 61마리, 대륙밭쥐(Clethrionomys rufocanus) 4마리, 땃쥐(Crocidura lasiura) 1마리로 확인되었다.
- 포획한 66마리의 야생 설치류에서 털진드기가 총 3,050마리 채집되어 chigger index는 46.2로 나타났다. 시기별 11월에 1, 443마리의 털진드기가 채집되어 chigger index는 206.
후속연구
- 년 도별 채집 환경별 털진드기 밀도가 서로 일치하지 않고 다른 이유는 습도가 낮은 곳에서는 산란을 멈추고, 대체로 고습도에서 번식률이 높아져서 털진드기의 산란율은 기온이 올라가게 되면 증가하는 것으로 알려졌다[25]. 그러므로 털진드기 산란기인 여름철의 평균기온이 직접적인 영향을 미치는 것으로 추정되지만 이와 같은 결과는 향후 여러 기후요소와 함께 다각적인 분석이 병행되어야 할 것으로 생각된다. 채집기를 이용하여 채집된 털진드기를 동정한 결과 둥근혀털진드기(N.
- 특히 농촌 지역인 진안은 면역력이 낮은 노인들의 비율이 높아 쯔쯔가무시 병원체에 대한 인식 부족으로 예방조치가 미흡하여 농사철 중 특히 봄보다 농업 활동이 많고 수확철인 가을에 논이나 밭에서 일을 하거나 휴식을 취할때 털진드기에 대한 노출 기회가 많아 쉽게 감염될 수 있다. 이번 연구는 전북 진안 지역에서의 털진드기 채취를 환경별, 시기별 채집률 분포와 쯔쯔가무시 매개 털진드기 감염률 감시 결과를 통해서 쯔쯔가무시증 발생을 능동적으로 관리하기 위한 홍보의 근거자료로 사용할 수 있을 것으로 기대한다.
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