[논문]인천지역 공원 채집 모기에서 심장사상충 감염도 조사

정철; 송재성; 김명덕; 김경호; 이정구; 이성모

doi:10.7853/kjvs.2020.43.1.1

인천지역 공원 채집 모기에서 심장사상충 감염도 조사
Molecular survey of Dirofilaria immitis in mosquitoes collected from parks the in the Incheon metropolitan city in Korea 원문보기

韓國家畜衛生學會誌 = Korean journal of veterinary service, v.43 no.1, 2020년, pp.1 - 6

정철 (인천광역시 보건환경연구원) , 송재성 (인천광역시 보건환경연구원) , 김명덕 (인천광역시 보건환경연구원) , 김경호 (인천광역시 보건환경연구원) , 이정구 (인천광역시 보건환경연구원) , 이성모 (인천광역시 보건환경연구원)

Abstract ▼ AI-Helper

Unlike previous studies that reported the infection rates of Dirofilaria immitis in companion dogs, D. immitis genes were tested directly on mosquitoes to see how many mosquitoes actually carry larvae. Mosquito samples were collected from six parks in Incheon from March to August 2018. A total of 18,589 mosquitoes was collected, classified by type and then made 575 sample pools based on 50 mosquitoes. The PCR method was used to detect Dirofilaria immitis genes of sample pools. Dirofilaria immitis genes were detected in 7 of the 575 pools, and these positive mosquito samples were collected in 4 out of the 6 parks. The types of detected mosquitoes were Aedes dorsalis and Ochlerotatus koreanus which have been identified to act as a vector for heart worm propagation in Incheon. Based on these results, it was concluded that D. immitis genes were found in mosquitoes in the neighborhood park.

주제어

표/그림 (4)

그림 Fig. 1. Location of mosquito col-lection sites at Incheon metropoli-tan city (google map).
그림 Fig. 2. The PCR-based detection of D. immitis DNA in mosquitoes in South Korea.
표 Table 1. Results of PCR analysis for Dirofilaria immitis infection in parks of mosquito pool collected from May to August, 2018 in Incheon metropolitan city, Republic of Korea
표 Table 2. Results of PCR analysis for Dirofilaria immitis infection by mosquito species in mosquito pool collected from May to August, 2018 in Incheon metropolitan city, Republic of Korea

AI 본문요약
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문제 정의

본 실험을 통해 인천지역에 시민들이 자주 왕래하는 큰 규모의 공원 6곳에서 채집한 모기 중 암모기에서의 심장사상충 감염 여부를 확인해보았다. 총 6곳의 공원 중 4곳에서 채집된 모기에서 D.
현재까지 국내 연구결과 사육하는 개에서 심장사상충의 감염 정도에 관한 연구는 전국적으로 확인이 되였지만 모기에서 직접 심장사상충 자충의 감염 정도를 연구한 결과는 경기도와 강원도로 한정되어 있다. 본 연구는 인천지역에 위치한 반려동물들의 출입이 잦은 공원 6곳에서 채집된 암모기에서 개 심장사상충 유전자를 확인하였다. 심장사상충 항원 진단방법 중 간편하고 신속하게 사용할 수 있는 PCR 방법을 사용하여 심장사상충 항원을 확인함으로써 인천지역 공원 내에 사는 모기에서 심장사상충 감염 정도 확인을 통해 심장사상충 발생 위험도를 조사하였다.
현재까지 국내 모기에서 직접 심장사상충의 감염여부를 확인한 결과는 경기도와 강원도로 극히 한정되어 있었다. 특히 본 연구는 시민들의 일상생활과 밀접한 거주 지역 주변 공원에서 채집한 모기를 대상으로 실험을 진행한 국내 최초 보고이다. 본 실험을 토대로, 인천 지역과 같은 대도시의 공원에서 반려견과 산책을 통해서 심장사상충 감염의 위험성이 있을 것으로 판단된다.

제안 방법

D. immitis 감염 확인을 위해 genomic DNA를 추출하였으며 genomic DNA 추출은 QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN, USA)를 사용하였다. 채칩한 모기는 기간별, 종별로 구분하여 1∼50마리 단위로 pool로 만들어 실험을 수행하였다.
PCR 반응은 AccuPowerⓇ HotStart PCR PreMix (BIONEER, Korea)에 template DNA 4 µl와 각각 10 pmol/µl primer 1 µl를 넣고 DNA free water 를 총량이 20 µl 되게 첨가하였다.
1). 모기는 5월 1일부터 8월 30일까지 모기 활동성이 높은 계절에 1주일 단위로 총 16번에 걸쳐 채집하였다. 모기는 실체현미경을 이용하여 전 수에 대하여 형태학적 분류기준(전염성 매개체 생채 및 분류, 질병관리본부)에 따라 분류하였다.
모기는 5월 1일부터 8월 30일까지 모기 활동성이 높은 계절에 1주일 단위로 총 16번에 걸쳐 채집하였다. 모기는 실체현미경을 이용하여 전 수에 대하여 형태학적 분류기준(전염성 매개체 생채 및 분류, 질병관리본부)에 따라 분류하였다.
본 연구는 인천지역에 위치한 반려동물들의 출입이 잦은 공원 6곳에서 채집된 암모기에서 개 심장사상충 유전자를 확인하였다. 심장사상충 항원 진단방법 중 간편하고 신속하게 사용할 수 있는 PCR 방법을 사용하여 심장사상충 항원을 확인함으로써 인천지역 공원 내에 사는 모기에서 심장사상충 감염 정도 확인을 통해 심장사상충 발생 위험도를 조사하였다.
0, Anigen)를 사용하여 정기검사를 실시하였다. 양성이 확인된 개에서 혈액을 1 ml를 헤파린 튜브에 채혈하여 혈구도말(blood cell smear)법을 이용, 광학현미경으로 심장사상충 자충의 유무를 확인하였다. 자충이 확인된 혈액에서 DNA 추출 및 PCR 분석을 통해 실험 에 사용된 프라이머의 적합성 여부를 검증하였다(Fig.
인천수의사회에서 운영하는 유기견보호소에 보호중인 개에서 혈액을 채취하여 심장사상충 항원 진단 키트(Antigen Rapid Canine Heartworm Ag Test Kit 2.0, Anigen)를 사용하여 정기검사를 실시하였다. 양성이 확인된 개에서 혈액을 1 ml를 헤파린 튜브에 채혈하여 혈구도말(blood cell smear)법을 이용, 광학현미경으로 심장사상충 자충의 유무를 확인하였다.
양성이 확인된 개에서 혈액을 1 ml를 헤파린 튜브에 채혈하여 혈구도말(blood cell smear)법을 이용, 광학현미경으로 심장사상충 자충의 유무를 확인하였다. 자충이 확인된 혈액에서 DNA 추출 및 PCR 분석을 통해 실험 에 사용된 프라이머의 적합성 여부를 검증하였다(Fig. 2).
PCR반응 조건은 94℃ 5분 initial denaturation을 실시하고 denaturation 94℃에서 40초, annealing 55℃ 40초, elongation 72℃ 40초를 40회 반복하였다. 증폭된 PCR 산물은 1.5% agarose gel에 전기영동한 후 red safe (iNtRON, Korea) 20,000배 희석 염색하여 UV transilluminator (Gel DOC^TM XR+, BIO-RAD)로 440 bp의 양성밴드를 확인하였다.
채칩한 모기는 기간별, 종별로 구분하여 1∼50마리 단위로 pool로 만들어 실험을 수행하였다.

대상 데이터

2018년 5월 1일부터 8월 30일까지 인천지역 공원 6곳에서 모기를 채집하여 PCR 방법을 통해 심장사상충 유전자 확인을 통해 다음과 같은 결과를 도출하였다.
2018년 5월 1일부터 8월 30일까지 총 16주 동안 1주일 간격으로 1회씩 모기를 채집하였으며 중구 자유 공원에서 2,139마리, 동구 송현공원에서 2,539마리, 송 도 중앙공원에서 6,196마리, 인천대공원에서 1,193마리, 계양구 다남체육공원에서 3,902마리 그리고 청라 1호 문화공원에서 2,620마리로 총 18,589마리의 암모기를 채취하였다. 채집한 모기는 채집 지역, 시기별로 1∼50마리 단위로 575개의 pool로 만들어 심장사상충 자충 항원검사를 실시하였으며 그 결과, 중구 자유공원 등줄숲모기(Aedes dorsalis)에서 1개, 인천대공원 한국숲모기(Ochlerotatus koreicus)에서 1개, 계양구 다남 체육공원 등줄숲모기(Aedes dorsalis)에서 1개 그리고 청라 1호 문화공원 한국숲모기(Ochlerotatus koreicus) 에서 4개 pool에서 양성이 확인되었다.
실험에 사용된 모기는 디지털모기측정기(주식회사 이티엔디)를 사용하여 채취하였다. 디지털모기측정기는 모기의 동물이 호흡을 통해 내뿜는 이산화탄소에 끌리는 특성을 이용하여 암모기 유인의 선택성을 높인 채집기이다.
디지털모기측정기는 모기의 동물이 호흡을 통해 내뿜는 이산화탄소에 끌리는 특성을 이용하여 암모기 유인의 선택성을 높인 채집기이다. 인천광역시 내에 위치한 6곳의 공원 (중구 자유공원, 송현 근린공원, 송도 센트럴파크, 인천대공원, 계양구 다남체육공원, 청라 1호문화공원)에 설치된 디지털모기측정기에서 채집한 모기를 이용하여 실험을 실시하였다(Fig. 1). 모기는 5월 1일부터 8월 30일까지 모기 활동성이 높은 계절에 1주일 단위로 총 16번에 걸쳐 채집하였다.

이론/모형

DNA 추출물은 50 µl TE buffer 에 녹여 각 분석에 4 µl를 사용하였다. D. immitis 확인을 위해 사용한 Watt등이 사용한 프라이머를 사용하였다 (Watts 등, 1999; Liu 등, 2005). PCR 반응은 AccuPower^Ⓡ HotStart PCR PreMix (BIONEER, Korea)에 template DNA 4 µl와 각각 10 pmol/µl primer 1 µl를 넣고 DNA free water 를 총량이 20 µl 되게 첨가하였다.

성능/효과

1. 인천지역 총 6곳의 공원에서 총 18,589마리의 암모기를 채집하여 공원 4곳 7건의 pool에서 심장사상충 유전자 양성을 확인하였다.
2. 채집한 모기는 총 9종이며 심장사상충 최소감염률은 총 0.38로 중구 자유공원이 0.47, 인천대공원은 0.84, 계양구 다남체육공원이 0.26 그리고 청라 1호문 화공원에서 1.53으로 나타났으며 한국숲모기(Ochlerotatus koreicus)에서 최소감염률은 5.5, 등줄숲모기(Aedes dorsalis)에서는 50으로 나타났다.
채집한 모기는 채집 지역, 시기별로 1∼50마리 단위로 575개의 pool로 만들어 심장사상충 자충 항원검사를 실시하였으며 그 결과, 중구 자유공원 등줄숲모기(Aedes dorsalis)에서 1개, 인천대공원 한국숲모기(Ochlerotatus koreicus)에서 1개, 계양구 다남 체육공원 등줄숲모기(Aedes dorsalis)에서 1개 그리고 청라 1호 문화공원 한국숲모기(Ochlerotatus koreicus) 에서 4개 pool에서 양성이 확인되었다. 각 공원별 최 소감염률은 중구 자유공원이 0.47, 인천대공원은 0.84, 계양구 다남체육공원이 0.26 그리고 청라 1호문화공원에서 1.53으로 나타났으며 공원에서 채집된 전체 모기에서 최소감염률은 0.38로 나타났다(Table 1).
11%)로 분포하였다(Table 2). 각 모기 종별 심장사상충 최소감염률은 중구 자유공원 등줄숲모기에서 25, 인천대공원 한국숲모기에서 1.1, 계양구 다남체육공원 등줄숲모기에서 25, 청라 1호문화공원 한국숲모기에서 4.4로 나타났다. 인천지역 공원에서 채집한 모기종 중 한국 숲모기에서 최소감염률은 5.
실험에 사용한 모기는 50마리씩 pool로 만들었기 때문에 최소감염률이 1이라는 의미는 최소 1000마리당 1마리의 감염 모기가 있으며 최대 50마리까지 존재할 수 있다는 의미이다. 동구 송현 공원과 송도 중앙공원은 감염은 확인되지 않았으며 청라 1호 문화공원에서 최소감염률이 1.53으로 심장 사상충 감염에 가장 높은 위험도를 나타내는 것으로 확인되었다. 심장사상충을 매개하는 모기는 종 특이성이 없이 대부분 모기에 의해 이뤄지는 것으로 알려져 있으나(Cancrini 등, 1995; Pampiglion 등, 2000) 인천지역에서 한국숲모기(Ochlerotatus koreicus)의 최소 감염률은 5.
4로 나타났다. 인천지역 공원에서 채집한 모기종 중 한국 숲모기에서 최소감염률은 5.5, 등줄숲모기에서는 50으로 나타났다(Table 2).
채집한 모기는 채집 지역, 시기별로 1∼50마리 단위로 575개의 pool로 만들어 심장사상충 자충 항원검사를 실시하였으며 그 결과, 중구 자유공원 등줄숲모기(Aedes dorsalis)에서 1개, 인천대공원 한국숲모기(Ochlerotatus koreicus)에서 1개, 계양구 다남 체육공원 등줄숲모기(Aedes dorsalis)에서 1개 그리고 청라 1호 문화공원 한국숲모기(Ochlerotatus koreicus) 에서 4개 pool에서 양성이 확인되었다.
채집한 모기는 총 9종이 관찰되었으며 얼룩날개모기속(Anopheles spp) 283마리(1.52%), 반점날개집모기 (Culex bitaeniorynchus) 100마리(0.54%), 동양집모기(Culex orientalis) 15마리(0.08%), 빨간집모기(Culex pipens) 16,409마리(88.27%), 반점날개늪모기(Mansonia uniformis) 8마리(0.04%), 금빛숲모기(Aedes vexan nipponi) 811마 리(4.36%), 한국숲모기(Ochlerotatus koreicus) 904마리 (4.86%), 등줄숲모기(Aedes dorsalis) 40마리(0.22%), 큰 검정들모기(Armigeres subalbatus) 20마리(0.11%)로 분포하였다(Table 2). 각 모기 종별 심장사상충 최소감염률은 중구 자유공원 등줄숲모기에서 25, 인천대공원 한국숲모기에서 1.
총 6곳의 공원 중 4곳에서 채집된 모기에서 D. immitis에 대한 유전자를 확인하였고, 이를 바탕으로 확인한 최소감염률은 0.26∼1.53로 나타났으며 인천지역 6곳 전체 공원 모기에 대한 최소감염률은 0.38으로 나타났다.

후속연구

3. 본 실험에서 확인된 채집 모기 내 심장사상충 유전자 확인 결과는 모기 발생 예보제 시스템 구축과 모기 구제 및 방역실시 등을 위한 기초 자료로 활용할 수 있을 것으로 생각되며 개 심장사상충 감염 예방에 큰 효과를 얻을 수 있을 것이다.
특히 본 연구는 시민들의 일상생활과 밀접한 거주 지역 주변 공원에서 채집한 모기를 대상으로 실험을 진행한 국내 최초 보고이다. 본 실험을 토대로, 인천 지역과 같은 대도시의 공원에서 반려견과 산책을 통해서 심장사상충 감염의 위험성이 있을 것으로 판단된다.
현재까지는 광범위한 모기에 대한 구제는 쉽지 않기 때문에 심장사상충 예방약 복용에 대한 홍보와 실행이 심장사상충 예방에 있어 가장 효율적이며 실현 가능한 예방법이라 하겠다. 본 연구로 대도시에서 반려동물과 삶을 공유하는 일반 시민들에게 심장사상충 감염의 위험도가 상당히 높다는 사실을 인식시킬 수 있는 계기가 마련되었으며, 앞으로 심장사상충 유전자 검출 모기가 확인되었을 경우 인터넷과 방송 매체 등을 통해 심장사상충 감염 모기 발생 등을 시민에게 알리는 발생 예보제 시스템 구축과 해당 지역 모기 구제 방역차량 운행 등을 위한 기초자료로 활용된다면 심장사상충 예방 효과에 큰 역할이 될 것으로 생각한다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	개 심장사상충(Dirofilaria immitis)은 무엇인가 ?	개 심장사상충(Dirofilaria immitis)은 개, 고양이, 여우 및 다른 포유류동물에 기생하며 특히 갯과에 속하는 동물이 중요한 숙주의 역할을 하며 열대, 아열대지방 중심으로 유행하는 질병이다(Lee 등, 2007). 개 심장사상충은 모기를 매개로 전파되는데 감염된 모기가 흡혈하는 과정에서 개에게 전염되며, 개의 근육 등에 발현되거나 정맥을 통해 침입하여 성장 발육하여 제3기 유충(감염유충)이 된다.
	모기 채집 과정에서 이산화탄소의 역할은 ?	지금까지 모기 채집은 주로 조사지역에 유문등과 같은 채집기구를 설치하여 채집하는 방법으로 모기에 대한 선택적인 구분 없이 블랙라이트(UV-light, 356 nm) 에 유인되는 곤충에 대하여 전부 채집하여 분류하는 방법이었다. 본 실험에 사용된 디지털모기측정기 시 스템 방식은 모기 유인의 선택적인 증대를 위해 이산 화탄소(CO2)를 주 유인제로 사용하였기 때문에 암모기에 대한 선택성을 높여 채집할 수 있다. 설치와 철 거를 반복해야하는 유문등과 달리 고정식으로 설치되어 일정지역에서 장기간 모기 발생 모니터링에 유리 하며 이산화탄소를 유인제로 사용하기 때문에 유문등을 이용한 채집방법과는 달리 주간 활동성 모기 종에 대한 채집과 채집 모기수를 자동으로 계측할 수 있어 실시간 모기 모니터링에 효율적인 방식이다.
	일반적인 모기 채집 방법은 ?	일반적인 모기 채집 방법은 유문등(誘蚊燈)을 이용한 방법으로 빛(블랙라이트, UV-Light, 356 nm)에 모기가 유인되는 원리지만 불빛을 이용하여 모기를 유인하기 때문에 주간 활동성 모기의 유인 효율이 낮은 단점이 있다. 최근 새로 개발된 디지털모기측정기 시스템(DMS, Digital Mosquito Monitoring System)은 일산화탄소를 유인 물질로 사용하여 질병 매개의 원인이 되는 암컷 모기 유인의 선택성을 높인 방식으로 유 문등을 이용한 방법의 한계인 주간 활동 모기 채집의 효율성도 높였으며, 채집된 모기를 자동으로 계수하고 정보를 실시간으로 모니터링하는 방식의 채집기로 감염병 매개모기 계측에 있어 새로 급부상하는 방식이다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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