[논문]세균을 이용한 CP 약침의 복귀돌연변이 시험

황지혜; 구자승; 정철

doi:10.13048/jkm.20025

세균을 이용한 CP 약침의 복귀돌연변이 시험
Bacterial Reverse Mutation Test of CP pharmacopunture 원문보기

Journal of Korean Medicine = 대한한의학회지, v.41 no.3, 2020년, pp.55 - 65

황지혜 (가천대학교 한의과대학 침구의학과) , 구자승 (보광한의원) , 정철 (남상천한의원)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives: This study aimed to evaluate the toxicity of CP pharmacopunture using bacterial reverse mutation test. Methods: To determine the mutagenic potential of CP pharmacopunture, histidine requiring Salmonella typhimurium (TA98, TA100, TA1535, and TA1537) and tryptophan requiring Escherichia coli (WP2uvrA, pKM101) strains were used. The negative (normal saline solution) and positive (Sodium azide, 2-Nitrofluorene, 2-Aminoanthracene, 9-Aminoacridine, and 4-Nitroquinoline N-oxide) control groups were used. To determine the dose levels of the main study, a dose range-finding study was conducted. Results: As a results of the dose range-finding study, the growth inhibition by CP pharmacopunture was not evident at any dose levels in the absence and presence of metabolic activation. As a results of the main study, the mean number of revertant colonies was less than twice when compared to the negative control values at all dose levels of the CP pharmacopuncture in the presence and absence of metabolic activation, showing no dose-related increase. In the positive control group, the number of revertant colonies was markedly increased by more than twice when compared to the negative control group. Conclusion: According to the results of this study, CP pharmacopunture did not show any signs of mutagenic potential.

주제어

AI 본문요약
AI-Helper

문제 정의

따라서 본 연구는 CP 약침의 안전성에 대한 과학적 근거 확보를 위하여, GLP 독성시험 기관인 ㈜바이오톡스텍 (충북, 한국)에 의뢰하여(시험번호: B18664)<비임상시험 관리기준>²⁸⁾, [Good Laboratory Practice Regulation for Non-Clinical Laboratory Studies of Drug]²⁹⁾, [OECD Principles of Good Laboratory Practice]³⁰⁾ 등을 준수하고, 식품의약품 안전처 고시 <의약품 등의 독성시험 기준>³¹⁾에 따라 CP약침액의 복귀돌연변이 시험을 실시하여, CP 약침액의 안전성에 대한 근거가 확보됨에 따라 이를 보고하고자 한다.

제안 방법

25% 등의 4가지 용량의 CP약침 처리군을 설정하였으며, CP 약침액이 용해되는 것이 확인된 생리식염주사액을 음성대조물질로 사용하였다. 또한 양성대조군의 경우 일반적으로 사용되고 있는 SA, 2-NF, 2-AA, 9-AA, 4-NQO 를 본 시험에서도 양성대조군으로 사용하였다³²⁾.
본 시험에 앞서 실시한 용량설정시험 결과를 토대로 하여, 본 시험에서 최고용량을 시험물질 그대로인 100%로 하여, 이하 공비 2로 50.0, 25.0, 12.5 및 6.25% 등의 4가지 용량의 CP약침 처리군을 설정하였으며, CP 약침액이 용해되는 것이 확인된 생리식염주사액을 음성대조물질로 사용하였다. 또한 양성대조군의 경우 일반적으로 사용되고 있는 SA, 2-NF, 2-AA, 9-AA, 4-NQO 를 본 시험에서도 양성대조군으로 사용하였다³²⁾.
coli(WP2uvrA pKM101) 중 최소 5개 이상의 균주에서 실시해야 하고, 용량 단계 설정은 5단계 이상으로 매 용량마다 3매 이상의 플레이트를 사용해야 한다. 이 연구에서는 CP 약침액의 안전성을 평가하기 위해, 히스티딘 요구성인 살모넬라균(Salmonella typhimurium) TA98, TA100, TA1535, TA1537과 트립토판 요구성인 대장균 (Escherichia coli) WP2uvrA pKM101를 사용하여 상기 조건에서 유전독성평가방법 중 하나인 복귀돌연변이시험을 실시하였다.

대상 데이터

1) 시험물질: 실험에 사용된 CP약침(45.45 mg/ml)은 사향(0.1 mg/ml), 웅담(0.075 mg/ml), 우황(0.05 mg/ml), 황금(10 mg/ml), 황백(10 mg/ml), 백두옹 (10 mg/ml), 산두근(10 mg/ml), 목향(5 mg/ml), 고추(0.005 mg/ml)의 비율로 혼합된 갈색 투명 액체로, KGMP에 준하는 시설을 갖춘 남상천원외탕전실(용인, 한국)에서 제공받아 실험에 사용하였다. 제조 과정은 다음과 같다.
2) 음성대조물질: 음성대조물질로는 생리식염주사액(Lot No. 17166, JW Pharmaceutical Co., Ltd., Korea)을 사용하였다.
3) 양성대조 물질: 양성대조물질로는 Sigma-Aldrich, Co., (USA)로부터 Sodium azide (SA, Lot No. MKBX7529V), 2-Nitrofluorene (2-NF, Lot No. S43858V), 2-Aminoanthracene (2-AA, Lot No. STBD3302V), 9-Aminoacridine (9-AA, Lot No. BCBR5712V), 4-Nitroquinoline N-oxide (4-NQO, Lot No. WXBC1554V)를 구입하여 사용하였다.
본 실험에서는 Molecular Toxicology, Inc. (MOLTOXTM, Inc., U.S.A.)에서 구입한 Salmonella typhimurium TA98, Salmonella typhimurium TA100, Salmonella typhimurium TA1535, Salmonella typhimurium TA1537, Escherichia coli WP2uvrA (pKM101)를 사용하였다. 이 균주들은 가이드라인에서 추천되고 있는 균주로써, 변이원성물질에 대한 감수성이 높고, 변이원성시험에 가장 일반적으로 사용되고 있기 때문에 선택되었다.

이론/모형

의약품등의 독성시험기준^31,32)에서 정한 3가지 표준유전독성시험법 중 복귀돌연변이시험은 ① TA98, ② TA100, ③ TA1535, ④ TA1537 또는 TA97, 또는 TA97a, ⑤ TA102 또는 E. coli(WP2uvrA pKM101) 중 최소 5개 이상의 균주에서 실시해야 하고, 용량 단계 설정은 5단계 이상으로 매 용량마다 3매 이상의 플레이트를 사용해야 한다. 이 연구에서는 CP 약침액의 안전성을 평가하기 위해, 히스티딘 요구성인 살모넬라균(Salmonella typhimurium) TA98, TA100, TA1535, TA1537과 트립토판 요구성인 대장균 (Escherichia coli) WP2uvrA pKM101를 사용하여 상기 조건에서 유전독성평가방법 중 하나인 복귀돌연변이시험을 실시하였다.

성능/효과

본시험 결과, 각 균주에 대한 양성대조군의 복귀 변이콜로니수는 음성대조군과 비교하여 2배 이상 확실하게 증가하였지만, CP 약침액에 의한 복귀변이콜로니수가 대사활성화 유무에 관계없이 각 균주의 모든 용량에서 음성대조군의 2배를 초과하지 않았음이 관찰되었으며, CP 약침액에 의한 생육저해 및 침전은 대사활성화 비존재하 및 존재하의 각 균주의 모든 용량에서 관찰되지 않았다. 의약품등의 독성시험 기준³¹⁾에서는 대사활성화 비존재하 및 존재하에서 최소 1개의 균주에서 플레이트 당 복귀변이콜로니수가 1개 이상의 농도에서 재현성이 있는 증가가 관찰될 때 양성으로 판정하기 때문에, 본 연구결과는 음성으로 판정된다.
이상의 결과로부터, Salmonella typhimurium (TA98, TA100, TA1535, TA1537)과 Escherichia coli(WP2uvrA(pKM101)) 등의 세균을 이용한 복귀 돌연변이 시험에서 CP 약침은 본 시험 조건 하에서 사용한 시험균주들의 복귀돌연변이를 유발하지 않는 물질로 판단되었으며, 이전의 단일용량 독성평가²⁵⁾ 결과와 함께 CP 약침의 안전성에 대한 근거를 일부 확보하였다고 판단된다. 하지만, 의약품 등의 허가 등을 목적으로 할 경우 유전독성의 잠재성에 대하여 포괄적 평가가 요구되며, 임상에서의 보다 안전한 사용을 위한 더 많은 과학적 근거 확보가 필요하기에, 본 연구 이외에 추가적으로 다른 종류의 표준유전독성시험법 관련 연구들이 수행되어야 할 것이다.

후속연구

결과와 함께 CP 약침의 안전성에 대한 근거를 일부 확보하였다고 판단된다. 하지만, 의약품 등의 허가 등을 목적으로 할 경우 유전독성의 잠재성에 대하여 포괄적 평가가 요구되며, 임상에서의 보다 안전한 사용을 위한 더 많은 과학적 근거 확보가 필요하기에, 본 연구 이외에 추가적으로 다른 종류의 표준유전독성시험법 관련 연구들이 수행되어야 할 것이다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	면역약침의 장점은?	약침요법은 남상천이 1965년 약업신문에 “경락주입치료”라는 글을 발표하고 1967년 경락 1,2권을 저술함으로써 보급되기 시작하였다1-3). 특히 면역약침(경락약침)은 부작용이 거의 없고, 동통 치료에 탁월한 장점이 있으며, 인체 내부 장기와 모든 조직 및 기관을 임의로 움직일 수 있게 하고, 면역을 증강시켜 난치병에 대처할 수 있게 하는 우수한 한의 치료 방법으로 알려져 있다1). 실제 한의 임상에서 면역약침은 거의 모든 분야의 질환에 활용되고 있으며, 특히 근골격계 질환 환자의 급만성 염증 및 동통 치료에 대하여 대표적인 기제(氣劑) 약침액인 V를 비롯 하여 OK, TA 약침 등이 사용되고 있다1,2).
	CP약침은 무엇인가?	CP약침은 캡사이신 성분을 활용하여 신경포착증, 신경 감각 이상 등의 신경병성 통증 및 근육경결통증, 비증 등을 치료하기 위하여 개발된 면역약침으로, V약침에 고추를 추가하여 총 9가지 약물을 주성분으로 한다. 캡사이신은 고추에 함유되어 있는 alkylamide 성분으로 매운 맛을 내며, Transient Receptor Potential Vanilloid (TRPV) cation channels 에 주요 작용을 나타낸다4).
	캡사이신의 효능은 무엇인가?	캡사이신은 고추에 함유되어 있는 alkylamide 성분으로 매운 맛을 내며, Transient Receptor Potential Vanilloid (TRPV) cation channels 에 주요 작용을 나타낸다4). 신경병증성 통증5-7), 비뇨기계 질환8,9), 비만10,11), 외음전정부통증 증후군12), 암13-15), 피부 질환16-18) 등에 효능이 보고되어 왔다.

참고문헌 (32)

Jung C, Jung JH, Lee MS. A clinical study of immune pharmacopuncturology. Kyungrak medical publishing co. Chungnam 2011 : 127-33.
Nam SC. Immune Pharmacopuncturology. Kyungrak medical publishing co. Chungnam, 2009.
Korean Acupuncture & Moxibustion Society. Hanmi Medical Publishing Co., Seoul, 2020.
Ramirez-Barrantes R, Cordova C, Gatica S, Rodriguez B, Lozano C, Marchant I, et al. Transient receptor potential vanilloid 1 expression mediates capsaicin-induced cell death. Frontiers in physiology. 2018;9:682.

상세보기
Tandan R, Lewis GA, Krusinski PB, Badger GB, Fries TJ. Topical capsaicin in painful diabetic neuropathy: controlled study with long-term follow-up. Diabetes care. 1992;15(1):8-14.

상세보기
Drake HF. Justins, Randomised double-blind study of topical capsaicin for treatment of post-herpetic neuralgia. Pain 1990;5:S58.
Bernstein JE, Parish LC, Rapaport M, Rosenbaum MM, Roenigk Jr HH. Effects of topically applied capsaicin on moderate and severe psoriasis vulgaris. Journal of the American Academy of Dermatology. 1986;15(3):504-507.

상세보기
Maggi CA, Barbanti G, Santicioli P, Beneforti P, Misuri D, Meli A, Turini D. Cystometric evidence that capsaicin-sensitive nerves modulate the afferent branch of micturition reflex in humans. The Journal of urology. 1989;142(1):150-154.

상세보기
Silva C, Rio ME, Cruz F. Desensitization of bladder sensory fibers by intravesical resiniferatoxin, a capsaicin analog: long-term results for the treatment of detrusor hyperreflexia. European urology. 2000;38(4):444-452.

상세보기
McCarty MF, DiNicolantonio JJ, O'keefe JH. Capsaicin may have important potential for promoting vascular and metabolic health. Open Heart. 2015;2(1):e000262.

상세보기
Westerterp-Plantenga MS, Smeets A, Lejeune MPG. Sensory and gastrointestinal satiety effects of capsaicin on food intake. Int. J. Obes. 2005;29(6):682-688.

상세보기
Steinberg AC, Oyama IA, Rejba AE, Kellogg-Spadt S, Whitmore KE. Capsaicin for the treatment of vulvar vestibulitis. American journal of obstetrics and gynecology. 2005;192(5):1549-1553.

상세보기
Zhang J, Nagasaki M, Tanaka Y, Morikawa S. Capsaicin inhibits growth of adult T-cell leukemia cells. Leukemia research. 2003;27(3):275-283.

상세보기
Ito K, Nakazato T, Yamato K, Miyakawa Y Yamada T, Hozumi N, et al. Induction of apoptosis in leukemic cells by homovanillic acid derivative, capsaicin, through oxidative stress: implication of phosphorylation of p53 at Ser-15 residue by reactive oxygen species. Cancer research. 2004;64(3):1071-1078.

상세보기
Hail Jr N, Lotan R. Examining the role of mitochondrial respiration in vanilloid-induced apoptosis. Journal of the National Cancer Institute. 2001;94(17):1281-1292.

상세보기
Nolano M, Simone DA, Wendelschafer-Crabb G, Johnson T, Hazen E, Kennedy WR. Topical capsaicin in humans: parallel loss of epidermal nerve fibers and pain sensation. Pain. 1999;81(1-2):135-145.

상세보기
Stander S, Luger T, Metze D. Treatment of prurigo nodularis with topical capsaicin. Journal of the American Academy of Dermatology. 2001;44(3):471-478.

상세보기
Ehsani AH, Toosi S, Seirafi H, Akhyani M, Hosseini M, Azadi R, et al. Capsaicin vs. clobetasol for the treatment of localized alopecia areata. Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. 2009;23(12):1451-1453.

상세보기
Kim HJ, Gwan R, Han JW, Jung C. Anti-oxidant and anti-inflammatory effects of V Yakchim. J Korea Immuno-Yakchim Soc 2013:2(1):1-8.
Kim HJ. In Vitro Chromosome Aberration Test of V-YAKCHIM in Chinese Hamster Lung Cell. J Korea Immuno-Yakchim Soc 2013:2(2):19-27.
Jung C. In vivo Micronucleus test of V-YAKCHIM in ICR Mice. J Korea Immuno-Yakchim Soc 2013:2(2):5-10.
Lee MS, Jung C. Comparative Sutdies on the Biological Activity of V and A Yakchim. J Korea Immuno-Yakchim Soc 2015:4(2):37-45.
Cho S, Jung C, Kim K, Ko S, Jung H, Park J. A Case Study of Acute Appendicitis Improved by Pharmacopuncture Treatment. The Journal of Internal Korean Medicine. 2019;40(2):208-219.
Chung YJ, Lee HJ, Lee YK, Lee JH, Gong HM, Jun SA, et al. Case Report of Hypoesthesia of Lower Limb with Additional CP Pharmacopuncture. Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine. 2019;33(2):158-162.
Hwang JH, Ku J, Jung C. Evaluation of the Single-Dose Toxicity of Capsaicin Containing Pharmacopuncture in Rats. Journal of Acupuncture Research. 2020;37(3):167-172.

원문보기 상세보기
Teschke R, Wolff A, Frenzel C, Schulze J. Review article: Herbal hepatotoxicity-an update on traditional Chinese medicine preparations. Aliment Pharmacol Ther. 2014;40(1):32-50.

상세보기
Kim EJ, Chen Y, Huang JQ, Li KM, Razmovski -Naumovski V, Poon J, Chan K, Roufogalis BD, McLachlan AJ, Mo SL, Yang D, Yao M, Liu Z, Liu J, Li GQ. Evidence-based toxicity evaluation and scheduling of Chinese herbal medicines. J Ethnopharmacol. 2013;146(1):40-61.

상세보기
Korea Food and Drug Administration (KFDA). Good Laboratory Practice (GLP), 2017. http://www.law.go.kr/admRulInfoP.do?admRulSeq2100000086689.
China Food and Drug Administration (CFDA). Good Laboratory Practice for Non-Clinical Laboratory Studies of Drug: Notification No. 34. 2017.
Organisation for Economic Co-operation and Development.OECD Principles of Good Laboratory Practice. OECD ENV/MC/CHEM(98)17. 1997.
Korea Food and Drug Administration (KFDA). Toxicity test standard of drugs. 2017.
National Instutute of food and drug safety evaluation. Explanation of toxicity test standard of drugs. 2012.

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증