[논문]제생신기환이 허혈-재관류로 유발된 급성 신부전 마우스에 미치는 효과

한병혁; 이현경; 장세훈; 태애림; 윤정주; 김혜윰; 이윤정; 이호섭; 강대길

doi:10.14374/hfs.2021.29.1.33

[국내논문] 제생신기환이 허혈-재관류로 유발된 급성 신부전 마우스에 미치는 효과
Effect of Jesaeng-sinkihwan on Renal Dysfunction in Ischemia/Reperfusion-Induced Acute Renal Failure Mouse 원문보기

大韓韓醫學方劑學會誌 = Herbal formula science, v.29 no.1, 2021년, pp.33 - 44

Abstract ▼ AI-Helper

Renal ischemia-reperfusion injury(IRI), an important cause of acute renal failure (ARF), cause increased renal tubular injury. Jesaeng-sinkihwan (JSH) was recorded in a traditional Chines medical book named "Bangyakhappyeon (方藥合編)". JSH has been used for treatment of diabetes and glomerulonephritis with patients. Here we investigate the effects of Jesaeng-sinkihwan (JSH) in a mouse model of ischemic acute kidney injury. The animals model were divided into four groups at the age of 8 weeks; sham group: C57BL6 male mice (n=9), I/R group: C57BL6 male mice with I/R surgery (n=9), JSH Low group: C57BL6 male mice with surgery + JSH 100 mg/kg/day (n=9) and JSH High group: C57BL6 male mice with surgery + JSH 300 mg/kg/day (n=9). Ischemia was induced by clamping the both renal arteries during 25 min, and reperfusion was followed. Mouse were orally given with JSH (100 and 300 mg/kg/day during 3 days after surgery. Treatment with JSH significantly ameliorates creatinine clearance(Ccr), Creatinine (Cr) and blood urea nitrogen(BUN) in obtained plasma. . Treatment with JSH reduced kidney inflammation markers such as Neutrophil Gelatinase Associated Lipocalin (NGAL) and kidney injury molecule-1 (KIM-1). JSH also reduced the periodic acid schiff (PAS) staining intensity and picro sirius red staining intensity in kidney of I/R group. These findings suggest that JSH ameliorates tubular injury including renal dysfunction in I/R induced ARF mouse.

주제어

표/그림 (7)

표 Table 1. Composition of JSH
표 Table 2. Effects of JSH on Plasma BUN and creatinine
그림 Fig. 1. Effects of JSH on Kidney Weight % of BW and Kidney Size. Values were expressed as mean ± S.E. (n=5). **p < 0.01 vs. sham; ##p < 0.01 vs. JSH.
그림 Fig. 2. Effects of JSH on Creatinine Clearance. Values were expressed as mean ± S.E. (n=5). **p < 0.01 vs. sham; #p < 0.05 vs. JSH.
그림 Fig. 3. Effect of JSH on KIM-1 and NGAL Levels in Kidney. (A) Western blots analysis on KIM-1 and NGAL protein expression. The experiment was repeated three times and similar results were obtained. (B) Real-time RT-qPCR analysis of KIM-1 and NGAL mRNA expression. Values were expressed as mean ± S.E. (n=5). **p < 0.01 vs. sham; ##p < 0.01 vs. JSH.
그림 Fig. 4. Periodic Acid Shiff (PAS) Staining of Kidney in Sham, I/R, JSH Low and JSH High mouse. The histological damages were in terms of glomerular fibrosis and tubular expansion in I/R group, which were administration of JSH improved tubular damage induced by ARF (Original magnification: X200).
그림 Fig. 5. Effect of JSH on Fibrosis in Kidney Tissues. Typical findings of picro sirius red staining in kidney of mouse (Original magnification: X200).

AI 본문요약
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문제 정의

또한 신장 손상이 일어나게 되면 사구체 간질의 확장, 사구체 기저막과 내피세포, 외피 세포들의 비대화, 세포외기질의 축적등이 일어나게 된다25). 따라서 본 실험에서는 신장의 부상을 확인하고 제생신기환에 의한 신장 손상의 회복 효과를 PAS 염색을 통하여 확인하였다. 그 결과 허혈-재관류를 통한 급성신손상이 생긴 군에서 사구체의 손상을 확인하였다.
특히 신기환가미방 중 제생신기환은 신장 염증 증후군을 통하여 급성신부전증이 발생할 때 단백뇨, 저단백혈증, 고지혈증 개선 등의 효과를 나타내었다12). 따라서 제생신기환이 허혈-재관류에 의하여 유발된 급성 신부전증에서 신장 기능의 개선과 치료에 효과가 있을 것으로 판단되어 본 연구를 수행하게 되었다.
또한 섬유화는 면역매개물질에 의하여 유도되며 이는 세포 외기질의 축적 및 콜라겐 합성을 증가시켜 조직의 경화를 유도 한다²⁷⁾. 본 실험에서는 제생신기환에 의한 신장 섬유화의 억제 효능을 확인하기 위하여 picro sirius red 염색을 통하여 신장을 염색한 후 신장의 섬유화 정도를 관찰하였다. 실험 결과, 허혈-재관류 모델에서 증가한 신장의 섬유화 정도가 제 생 신기환에 의하여 감소되는 것을 확인하였다.
이러한 다양한 급성신부전의 원인 중 특히 허혈에 의한 급성세뇨관 괴사가 높은 빈도를 차지하고 있다고 알려져 있다²⁾. 본 연구는 제생신기환을 허혈-재관류에 의하여 유발된 급성신부전 동물모델에 투여하여 제생신기환의 신장 기능 및 신장 손상에 대한 개선 효과를 조사하였다. 실험은 정상군 (sham), 급성신부전증 모델군 (I/R), 제생신기환 저농도 처리군 (I/R + JSH 100 mg/kg/day), 그리고 제 생신 기환 고농도 처리군 (I/R + JSH 300 mg/kg/day)인 4 군으로 나누어 진행하였으며, 다음과 같은 결론을 얻었다.
본 연구에서는 C₅₇BL6 mouse에 허혈-재관류에 의한 급성신부전증을 유발시켜 제생신기환을 투여한 후 신장 기능에 미치는 효과를 연구하고 그 결과를 보고하였다.
특히 제생신기환은 신장의 음(陰)과 양(陽)의 기운을 보하기 위하여 주로처방되어져 왔다¹³⁾. 본 연구에서는 제생신기환이 허혈(虛血)로 인한 급성신부전 모델에서의 신장 기능개선과 신손상에 효과가 있음을 확인하고자 실험을 수행하였다.

제안 방법

KIM-1 (forward: 5’-GCA ACG GAC ATG CCA ACA TA-3’, reverse: 5’-TGG CAC TGT GAC ATC CTC AGA-3’), NGAL (forward: 5’-TCA CGC TGG GCA ACA TTA-3’, reverse: 5’-TTG GGA CAG GGA AGA CGA-3’), GAPDH (forward: 5’-CGA GAA TGG GAA GCT TGT CAT C-3’, reverse: 5’-CGG CCT CAC CCC ATT TG-3’). 1 mL cDNA sample, 1 mL primer pairs, 8 mL ultra-pure distilled water, 그리고 10 ml SYBR Green PCR Master Mix를 섞어준 다음 Step-One™ Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)를 이용하여 9 5℃ 에서 10 분 동안 denaturation step 을 거쳤다. 그 후 95℃ 에서 15 초 동안 총 40 번을 반복하였으며, 60℃ 에서 60 초 진행하였다.
4)에 3 일 고정시킨 후, 수세로써 조직 내에 남아있는 포르말린을 제거하였다. 50% 알코올에서부터 100% 알코올까지 농도 상승 순으로 탈수하고 xylene으로 치환하였다. 파라핀 침투과정을 거친 후 포매하여 블록을 제작하였다.
비특이적 항체 결합을 방지하기 위하여 BSA 가 함유된 용액에 상온에서 1 시간 동안 blocking 하였다. Blocking된 membrane을 1:1000으로 희석한 각 타겟 단백질의 1차 항체 (KIM-1, NGAL; Santa Cruz, TX, USA)를 처리한 다음 1:2000으로 희석한 2차 항체 (Goat anti-mouse IgG, Enzo, NY, USA) 를 상온에서 1 시간 반응시키고 ECL solution을 반응 시켜 발현 정도를 Chemi-doc image analyzer (iBright FL100, Thermofisher scientific, MA, USA)를 사용하여 측정 후 정량 하였다.
각각의 RNA sample 은 세번 반복 실험을 하였다. mRNA 측정 결과는 GAPDH mRNA 측정 결과에 의하여 표준화하였다.
간략하게 요약하면, 먼저 조직 절편을 탈 파라핀, 수화시켜준 다음 Hematoxylin으로 염색하여 준 다음 세척하여준다. 그 다음 Phosphomolybic acid, Picrosirius Red 염색 용액, .1 N Hydrochloride acid를 차례로 처리하여준 다음 70% 에탄올로 세척한 다음 탈수 후 Canada balsam (Junsei chemical co., Ltd, Chuo-ku, Tokyo, Japan)으로 봉입한 후 광학현미경으로 관찰하였다 (Nikon Eclipse Ti, Tokyo, Japan).
4). 또한, 신장의 섬유화 정도를 확인하기 위하여 picrosirius red 염색을 시행하였다. 그 결과 I/R군에서 섬유화를 확인할 수 있었으며 제생신기환을 처리한 군에서 섬유화가 감소되었음을 확인하였다.
따라서 NGAL과 KIM-1은 급성 신부전증과 관련된 매우 정확한 평가 지표로 사용되고 있다. 본 연구에서는 제 생 신기환을 통한 신장 손장 지표인 NGAL과 KIM-1 의 발현을 분석하였다. 허혈-재관류 수술을 통하여 급성 신부전증이 유발된 군에서는 NGAL과 KIM-1의발현이 유의성 있게 증가하는 것을 확인하였으며 제 생 신기환이 유의하게 감소시키는 것으로 나타났다.
분리된 단백질을 sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)로 전기 영동 하여 분리한 후 nitrocellulose membrane으로 transfer 하였다. 비특이적 항체 결합을 방지하기 위하여 BSA 가 함유된 용액에 상온에서 1 시간 동안 blocking 하였다. Blocking된 membrane을 1:1000으로 희석한 각 타겟 단백질의 1차 항체 (KIM-1, NGAL; Santa Cruz, TX, USA)를 처리한 다음 1:2000으로 희석한 2차 항체 (Goat anti-mouse IgG, Enzo, NY, USA) 를 상온에서 1 시간 반응시키고 ECL solution을 반응 시켜 발현 정도를 Chemi-doc image analyzer (iBright FL100, Thermofisher scientific, MA, USA)를 사용하여 측정 후 정량 하였다.
반응 후, 흐르는 물에 수세 한 후, Schiff 시약으로 10 분간 반응시켰다. 수세 한 후, hematoxylin으로 3 분간 반응 시킨 후 탈수 과정을 거치고 Canada balsam (Junsei chemical co., Ltd, Chuo-ku, Tokyo, Japan)으로 봉입한 후 광학현미경으로 관찰하였다 (Nikon Eclipse Ti, Tokyo, Japan).
본 연구는 제생신기환을 허혈-재관류에 의하여 유발된 급성신부전 동물모델에 투여하여 제생신기환의 신장 기능 및 신장 손상에 대한 개선 효과를 조사하였다. 실험은 정상군 (sham), 급성신부전증 모델군 (I/R), 제생신기환 저농도 처리군 (I/R + JSH 100 mg/kg/day), 그리고 제 생신 기환 고농도 처리군 (I/R + JSH 300 mg/kg/day)인 4 군으로 나누어 진행하였으며, 다음과 같은 결론을 얻었다.
9 주령수컷 C₅₇BL6 마우스는 샘타코에서 구입하였다. 실험이 진행되는 동안 metabolic cage에서 온도(23 ± 2℃), 습도(50~60%), 그리고 12시간 동안 암기와 명기 주기를 유지해 주었다. 적응기 3일을 거친 후, 다음과 같이 군을 나누었다.
JSH Low 군은 허혈-재관류 수술 후 제생신기환 10 mg/kg/day를 식이로 투여해 주었고, JSH High 군은 제생신기환 300 mg/kg/day를 투여 해주었다. 약물 투여는 3일 동안 진행하였다.
I/R 군은 신장 허혈 -재관류 수술을 시켰다. 양쪽의 신동맥에 클립을 25 분 동안 끼워 허혈을 시켜준 후, 재관류를 시행하였다. JSH Low 군은 허혈-재관류 수술 후 제생신기환 10 mg/kg/day를 식이로 투여해 주었고, JSH High 군은 제생신기환 300 mg/kg/day를 투여 해주었다.
파라핀 침투과정을 거친 후 포매하여 블록을 제작하였다. 이렇게 준비된 파라핀 블록을 회전형 박 절기 (Microtome; Thermo Electron Corporation, Pittsburg, PA)를 사용하여 3 ㎛으로 자른 뒤 슬라이드 위에 부착 시켜 절편을 만들고 Picrosirius Red Stain Kit (Picrosirius Red stain, Polysciences, USA)의 제조사에서 제공하는 실험 방법에 따라 염색을 진행하였다. 간략하게 요약하면, 먼저 조직 절편을 탈 파라핀, 수화시켜준 다음 Hematoxylin으로 염색하여 준 다음 세척하여준다.
파라핀 침투과정을 거친 후 포매하여 블록을 제작하였다. 이렇게 준비된 파라핀 블록을 회전형 박 절기 (Microtome; Thermo Electron Corporation, Pittsburg, PA)를 사용하여 3 ㎛으로 자른 뒤 슬라이드 위에 부착 시켜 절편을 만들었다. PAS staining은 Xylene과 에탄올 100%을 이용하여 슬라이드의 파라핀을 제거한 후, 0.
전라북도). 제생신기환 추출물을 얻기 위하여 Table 1과 같이 약재 10 종류 (총 중량 = 1520g)를 혼합하여 100℃ 증류수 4L에서 전기추출기 (COSMOS-660, Kyungseo Machine Co., 인천, 한국)를 사용하여 2시간 동안 추출하였다. 추출물은 4℃의 온도에서 10 분 동안 3, 000 rpm의 속도로 원심분리 하였다.
50% 알코올에서부터 100% 알코올까지 농도 상승 순으로 탈수하고 xylene으로 치환하였다. 파라핀 침투과정을 거친 후 포매하여 블록을 제작하였다. 이렇게 준비된 파라핀 블록을 회전형 박 절기 (Microtome; Thermo Electron Corporation, Pittsburg, PA)를 사용하여 3 ㎛으로 자른 뒤 슬라이드 위에 부착 시켜 절편을 만들었다.
cDNA 합성을 위하여 500 ng mRNA과 20 ml 의 reverse transcription reaction incubated in the SimpliAmp Thermal Cycler (Life technology, Carlsbad, CA, USA)를섞은 후 42℃ 에서 60 분, 94℃ 에서 5분 배양하여 합성된 cDNA 실험에 사용할 때까지 -20℃에서 보관하였다. 합성된 cDNA를 이용하여 Real time RT-qPCR을 실시하였다. 사용된 primer의 염기 서열은 다음과 같다.
허혈-재관류에 유발된 급성신부전증 모델에서 제 생 신기환에 의한 신장의 조직 병리학적 변화를 측정하기 위해 PAS 염색을 시행하였다. 그 결과, 정상군에서 관찰되지 않았던 기저막(basement membrane) 과메산지움 기질(mesangial matrix)을 포함한 세포외기질 (extracellularmatrix: ECM)의 형태학적인 손상이 확인되었다.
혈청의 Blood urea nitrogen (BUN)과 소변과 혈청의 creatinine의 혈액생화학적 수치는 자동 생화학측정기(automated clinical chemistry analyzer, FUZI DRI-CHEM NX700, FUJIFILM Corporation, Tokyo, Japan)를 사용하여 분석하였다. 신장 기능 지표로서 creatinine청소율 (Ccr)을 확인하였으며 그 계산 방법은 아래와 같다.

대상 데이터

준수하였다 (승인번호, WKU16-59). 9 주령수컷 C₅₇BL6 마우스는 샘타코에서 구입하였다. 실험이 진행되는 동안 metabolic cage에서 온도(23 ± 2℃), 습도(50~60%), 그리고 12시간 동안 암기와 명기 주기를 유지해 주었다.
신장으로부터 RNA 분리는 Trizol reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA)를 이용하였으며 RNA 농도는 흡광도 260 nm 에서 정량하였다. cDNA 합성을 위하여 500 ng mRNA과 20 ml 의 reverse transcription reaction incubated in the SimpliAmp Thermal Cycler (Life technology, Carlsbad, CA, USA)를섞은 후 42℃ 에서 60 분, 94℃ 에서 5분 배양하여 합성된 cDNA 실험에 사용할 때까지 -20℃에서 보관하였다.
실험에 사용한 약재는 ㈜청웅제약에서 구입하였다 (임실, 전라북도). 제생신기환 추출물을 얻기 위하여 Table 1과 같이 약재 10 종류 (총 중량 = 1520g)를 혼합하여 100℃ 증류수 4L에서 전기추출기 (COSMOS-660, Kyungseo Machine Co.

데이터처리

실험 결과의 유의성은 실험 결과를 SigmaPlot 10.0 프로그램을 이용하여 Students t-test 를 통하여 p가 0.05 이하인 경우 유의한 차이로 판정하였다.

이론/모형

급성신부전모델에서 제생신기환이 신장기능과 신장 질환 지표인 KIM-1, NGAL 발현에 미치는 영향을 확인하기 위하여 western blot법을 시행하였다. 그 결과 I/R에 의하여 유발된 급성신부전모델 군에서 정상군에 비하여 KIM-1과 NGAL의 단백질 발현양이 현저하게 증가된 것을 확인할 수 있었다 (p < 0.
6) 으로 용해 시켜 단백질을 추출하였다. 추출한 단백질은 bradford 법을 이용하여 정량하였으며, 10% SDS-polyacrylamide gel에서 전기영동하여 분리하였다. 분리된 단백질을 sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)로 전기 영동 하여 분리한 후 nitrocellulose membrane으로 transfer 하였다.

성능/효과

또한, 신장의 섬유화 정도를 확인하기 위하여 picrosirius red 염색을 시행하였다. 그 결과 I/R군에서 섬유화를 확인할 수 있었으며 제생신기환을 처리한 군에서 섬유화가 감소되었음을 확인하였다. 특히 고농도의 제 생 신기환을 처리한 군에서 정상군과 거의 유사한 정도로 회복되었음을 확인하였다 (Fig.
위하여 western blot법을 시행하였다. 그 결과 I/R에 의하여 유발된 급성신부전모델 군에서 정상군에 비하여 KIM-1과 NGAL의 단백질 발현양이 현저하게 증가된 것을 확인할 수 있었다 (p < 0.01). 반면, 제생신기환을 투여한 군에서는 유의한 감소를보였다 (p < 0.
따라서 본 실험에서는 신장의 부상을 확인하고 제생신기환에 의한 신장 손상의 회복 효과를 PAS 염색을 통하여 확인하였다. 그 결과 허혈-재관류를 통한 급성신손상이 생긴 군에서 사구체의 손상을 확인하였다. 또한 내수질과 외수질을 관찰한 결과 형택학적인 변형 및 액포 (vacuole)의 생성을 확인할 수 있었다.
위해 PAS 염색을 시행하였다. 그 결과, 정상군에서 관찰되지 않았던 기저막(basement membrane) 과메산지움 기질(mesangial matrix)을 포함한 세포외기질 (extracellularmatrix: ECM)의 형태학적인 손상이 확인되었다. 제생신기환을 투여한 군에서는 정상군과 유사하게 회복되었고, 메산지움 기질을 포함한 세포외기질의 일부 손상이 관찰되었으나, 이 역시정상군에 비해 현저히 낮았다 (Fig.
그 결과 허혈-재관류를 통한 급성신손상이 생긴 군에서 사구체의 손상을 확인하였다. 또한 내수질과 외수질을 관찰한 결과 형택학적인 변형 및 액포 (vacuole)의 생성을 확인할 수 있었다. 제생신기환은 이러한 사구체의 손상과 신장의 형태학적 손상을 저하시켜주는 효과를 나타내었다.
제생신기환을 투여한 군에서 BUN과 creatinine 수치가 유의성 있게 감소하는 것을 확인하였다 (Table 2). 또한 실험 종료 시점에서, 신장의 사구체 여과율의 지표인 creatinine clearance(Ccr) 를 측정한 결과, I/R 군은 sham 군과 비교했을 때, 유의하게 Ccr 수치가 감소하였고 (p < 0.01), 제생신기환 저농도 군과 고농도군 모두에서 유의하게 Ccr 수치가 증가하였다 (p < 0.05, Fig. 2).
3A). 또한 허혈-재관류 수술을 통하여 증가된 mRNA 발현양 역시 제생신기환 투여군에서 유의한 감소를 나타냄을 확인할 수 있었다 (p < 0.01, Fig. 3B).
따라서 creatinine의 요 중 배설량은 체내의 creatinine 생성량과 동일하며, 혈중 creatinine 수치는 신장 기능의 평가에 매우 중요하게 사용되는 지표이다¹⁸⁾. 본 실 험 결과에서 제 생 신기환은 허혈성 급성신부전증 군에 비해 creatinine 청소율이 현저하게 증가되었다. 따라서 제 생 신기환은 신장의 여과 기능과 재흡수 기능을 동시에 억제하고, 신기능을 부분적으로 회복하는 것으로 사료된다.
본 연구 결과를 통하여 제생신기환을 통한 신장 손상 개선 효과 및 신장 기능의 개선 효과를 확인해 볼 수 있었으며, 허혈로 인한 급성신부전증 동물 모델의 신장 손상을 제생신기환이 억제함으로써 허혈성 질환의 억제제로 효과가 있다고 사료된다. 따라서 이에 대한 추가 연구 및 심도 있는 연구를 통하여 제 생 신기환이 허혈성 신장 질환의 치료에 매우 우수한 보조제로 개발될 수 있을 것으로 생각된다.
실험 결과 제생신기환을 투여한 군은 허혈성 급성 신부전증에 의해 증가된 신장의 비대화와 신장 무게/체중의 수치가 유의성 있게 감소하였다. Blood urea nitrogen(BUN)은 체내에서 단백질의 이화작용으로 생긴 대사산물로써 90% 이상이 신장으로 배설된다.
본 실험에서는 제생신기환에 의한 신장 섬유화의 억제 효능을 확인하기 위하여 picro sirius red 염색을 통하여 신장을 염색한 후 신장의 섬유화 정도를 관찰하였다. 실험 결과, 허혈-재관류 모델에서 증가한 신장의 섬유화 정도가 제 생 신기환에 의하여 감소되는 것을 확인하였다.
따라서 BUN 수치는 신장 배설 기능을 알아볼 수 있는 지표이다¹⁷⁾. 실험동물으로부터 얻은 혈액을 이용하여 BUN 수치를 측정한 결과 제생신기환은 허혈성 급성신부전증 유발군에 비해 BUN 수치가 유의하게 감소시켜주었다. 이와 같은 결과를 통하여 제 생 신기환이 신장의 손상과 신장의 기능을 회복하는 것으로 사료된다.
실험이 진행이 되는 동안, 제생신기환 투여 시 실험이 끝나는 날 신장무게를 몸무게로 나눈 %를 측정한 결과 I/R군에서 유의성 있는 증가가 있었으며 (p < 0.01), 제생신기환 투여군에서 감소하는 효과를 확인하였다 (p < 0.01, Fig. 1A). 실험동물 희생 후 신장을 촬영한 결과에서도 I/R군에서 신장이 비대해 졌음을 확인할 수 있었다 (Fig.
제생신기환을 투여한 군에서 BUN과 creatinine 수치가 유의성 있게 감소하는 것을 확인하였다 (Table 2). 또한 실험 종료 시점에서, 신장의 사구체 여과율의 지표인 creatinine clearance(Ccr) 를 측정한 결과, I/R 군은 sham 군과 비교했을 때, 유의하게 Ccr 수치가 감소하였고 (p < 0.
그 결과, 정상군에서 관찰되지 않았던 기저막(basement membrane) 과메산지움 기질(mesangial matrix)을 포함한 세포외기질 (extracellularmatrix: ECM)의 형태학적인 손상이 확인되었다. 제생신기환을 투여한 군에서는 정상군과 유사하게 회복되었고, 메산지움 기질을 포함한 세포외기질의 일부 손상이 관찰되었으나, 이 역시정상군에 비해 현저히 낮았다 (Fig. 4). 또한, 신장의 섬유화 정도를 확인하기 위하여 picrosirius red 염색을 시행하였다.
그 결과 I/R군에서 섬유화를 확인할 수 있었으며 제생신기환을 처리한 군에서 섬유화가 감소되었음을 확인하였다. 특히 고농도의 제 생 신기환을 처리한 군에서 정상군과 거의 유사한 정도로 회복되었음을 확인하였다 (Fig. 5).
허혈-재관류 수술 1일 후 얻은 혈액과 실험동물 희생 후 얻은 혈액에서 신장 기능 지표인 blood urea nitrogen (BUN)과 creatinine을 측정한 결과 I/R 군은 sham군과 비교하였을 때, 유의하게 수치가 증가하였다. 제생신기환을 투여한 군에서 BUN과 creatinine 수치가 유의성 있게 감소하는 것을 확인하였다 (Table 2).
본 연구에서는 제 생 신기환을 통한 신장 손장 지표인 NGAL과 KIM-1 의 발현을 분석하였다. 허혈-재관류 수술을 통하여 급성 신부전증이 유발된 군에서는 NGAL과 KIM-1의발현이 유의성 있게 증가하는 것을 확인하였으며 제 생 신기환이 유의하게 감소시키는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 제생신기환이 신장의 손상을 개선시키는데 효과를 갖는다는 것을 나타낸다.

후속연구

억제제로 효과가 있다고 사료된다. 따라서 이에 대한 추가 연구 및 심도 있는 연구를 통하여 제 생 신기환이 허혈성 신장 질환의 치료에 매우 우수한 보조제로 개발될 수 있을 것으로 생각된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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