[논문]양송이 원형질체 분리와 PEG 형질전환법의 최적화

김민식; 장갑열; 이윤상; 오민지; 임지훈; 오연이

doi:10.14480/jm.2021.19.3.256

[국내논문] 양송이 원형질체 분리와 PEG 형질전환법의 최적화
Optimization of protoplast isolation and PEG-mediated transformation in Agaricus bisporus 원문보기

Journal of mushrooms = 한국버섯학회지, v.19 no.3, 2021년, pp.256 - 259

김민식 (농촌진흥청 국립원예특작과학원 버섯과) , 장갑열 (농촌진흥청 국립원예특작과학원 버섯과) , 이윤상 (농촌진흥청 국립원예특작과학원 버섯과) , 오민지 (농촌진흥청 국립원예특작과학원 버섯과) , 임지훈 (농촌진흥청 국립원예특작과학원 버섯과) , 오연이 (농촌진흥청 국립원예특작과학원 버섯과)

초록
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현재 양송이 품종의 개발은 1980년대에 개발된 방법에 의존하여 진행되고 있다. 유전자가위를 이용한 유전자교정 기술이 다양한 분야에서 각광받고 있고, 이 기술을 버섯 육종에도 적용하기 위하여 진행된 이 연구에서는, CRISPR/Cas9 활용에 필수적인 원형질체 분리 효율을 1.0 × 10⁸/mL까지 안정적으로 끌어올렸고, spermidine을 이용하여 PEG 형질전환의 효율 또한 기존 방법에 비해 100배가량 끌어올렸음을 보고한다.

Abstract ▼ AI-Helper

Currently, button mushroom, Agaricus bisporus is one of the most consumed mushroom in the world. However, despite of its importance in food market, molecular genetic modification method for breeding of A. bisporus is not well established. In this study, we optimized yield of A. bisporus protoplast with Lysing enzyme, Chimax-N and cellulase. With this composition, 1.0 × 108/mL of protoplasts were obtained reliably. PEG-mediated transformation with spermidine showed almost 100-fold higher yield than non-spermidine method.

Keyword

표/그림 (4)

표 Table 1. Yield of protoplasts according to enzyme composition.
그림 Fig. 1. Protoplast of Agaricus bisporus. (a) Lysing enzyme, Chimax-N, Yatalase and cellulase; (b) Lysing enzyme, Chimax-N and yatalase; (c) lysing enzyme, Chimax-N and cellulase; (d) lysing enzyme and Chimax-N; (e) lysing enzyme, yatalase and cellulase; (f) lysing enzyme and yatalase; (g) lysing enzyme and cellulase; (g) lysing enzyme. Red arrows indicate protoplasts.
그림 Fig. 2. Regeneration of transformants on 1^st selection media. (a) Protoplast that did not treated vector(control). No colony was observed;(b) vector treated protoplast without spermidine. 1.3 × 10¹ of colonies were observed;(c) vector treated protoplast with spermidine. 1.27 × 10³ of colonies were observed.
그림 Fig. 3. Isolated transformants on 2^nd selection media. (a) Original strain(KMCC00591) on 2^nd selection media(up) and CDA without hygromycinB(down). No growth was observed on 2^nd selection media;(b) isolated transformants on 2^nd selection media.

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