[논문]제주지역 양식 넙치(Paralichthys olivaceus)의 점액포자충 감염조직에 대한 병리조직학적 관찰

이남실; 김아란; 서한길; 최혜승; 조미영

doi:10.5657/kfas.2021.0660

제주지역 양식 넙치(Paralichthys olivaceus)의 점액포자충 감염조직에 대한 병리조직학적 관찰
Histopathological Examination of Myxosporean-Infected Olive Flounders Paralichthys olivaceus, Cultured in Jeju Island, South Korea 원문보기

한국수산과학회지 = Korean journal of fisheries and aquatic sciences, v.54 no.5, 2021년, pp.660 - 667

이남실 (국립수산과학원 양식산업연구부 병리연구과) , 김아란 (국립수산과학원 양식산업연구부 병리연구과) , 서한길 (국립수산과학원 남해연구소 양식산업과) , 최혜승 (국립수산과학원 양식산업연구부 병리연구과) , 조미영 (국립수산과학원 연구기획과)

Abstract ▼ AI-Helper

In recent years, myxosporean infection from the cultured olive flounders Paralichthys olivaceus, have been frequently observed in Jeju island, South Korea. This study aimed to compare histopathological and molecular-biological methods of examining myxosporean infection from these flounders. Samples were obtained from affected individuals exhibiting emaciation or abdominal distention and a polymerase chain reaction (PCR) indicative of Parvicapsular anisocaudata, Enteromyxum leei and Kudoa septempunctata were initiated. Histopathological examination were conducted with H&E stained tissue sections, and then in-situ hybridization (ISH) reaction were processed with selected sections using P. anisocaudata, E. leei, K. septempunctata and Scuticociliate probes. Renal and intestinal tissue degeneration were common symptoms associated with all samples. Sever glomerular and renal tubular degeneration were evident, as were intestinal epithelial desquamation and spore formation in the epithelial cells. The results of conventional PCR analysis and ISH reactions revealed differences, and we suspect that various microparasites may have been associated with the symptoms manifested.

주제어

표/그림 (9)

표 Table 1. Information about sampled fish in the present study
표 Table 2. Primer sets information for conventional PCR in the present study
표 Table 3. Primer pairs used for ISH (in-situ hybridization) probe synthesis in the present study
표 Table 4. The results of PCR analysis about Parvicapsular anisocaudata, Enteromyxum leei and Kudoa septempunctata for tissue samples at 8 farms
그림 Fig. 1. Common finding about kidney and intestine sections of olive flounder have pathognomonic symptoms. G, glomerulus; Rt, renal tubule; white arrow, plasmodium; white circle, degenerate of glomerulus; black arrow, myxospore; black circle, desquamation of epithelial cells (H&E stain); A&B, kidney of C farm (bar, 50 μm); C&D, intestine of C farm (bar, 100 μm).
그림 Fig. 2. Protozoan cells in uro-genetic tissue of D1 farm sample (bar,100 μm). A, mass of protozoan cells in intratesticular coelome; B, ciliates in coelome adjacent to urinary bladder; C, testis tissue after ISH reaction with scuticociliate probe. Arrows, protozoan cells (=ciliates); ISH, in-situ hybridization.
그림 Fig. 3. Kidney and intestine tissue after ISH. A, kidney of A farm after ISH with Parvicapsular anisocaudata probe (bar=100 μm); B, kdney of D1 farm after ISH with Enteromyxum leei probe (bar=50 μm); C, intestine of D2 farm after ISH with E.leei probe (bar=100 μm); D, intestine of D2 farm after ISH with P. anisocaudata probe (bar=100 μm); Arrows, positive reacted cells; ISH, in-situ hybridization.
표 Table 5. Histopathological observations on H&E stained kidney and intestine tissue
표 Table 6. The result of ISH (in-situ hybridization) reaction against 4 kinds of probe

AI 본문요약
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제안 방법

leei, Scuticociliate 그리고 K. septempunctata에 특이적으로 결합 반응하도록 Dig DNA labeling mix(Roche)를 사용하여 Dig이 부착된 PCR product를 200bp내외의 크기로 합성하였고, 이 합성물을 probe로 하여 조직 절편과 hybridization 반응 시켜 광학현미경으로 발색 반응 여부를 확인하였다. ISH(insitu hybridization)반응시켜 관찰하는 전반의 제작과정은 Lee et al.
부검 시 병리조직학적 검사를 위한 조직슬라이드표본 제작을 위해, 중성완충포르말린에 각 개체의 신장(후신)과 소화관(후장)을 고정하고 표본 제작을 위한 수세, 탈수, 투명화, 파라핀 침투의 일련의 과정을 거쳐 파라핀 블럭을 만들고, Rotary 형 마이크로톰(HistoCore MULTICUT; Leica, Nussloch, Germany)을 사용하여 조직을 박절하였다. 슬라이드글라스에 부착 시켜 건조시킨 후 Hematoxylin and Eosin 염색을 실시하였다.
이러한 점액포자충에 의한 다양한 감염 증상이 단일 감염에 의한 증상인지에 대한 의문이 생기던 중, 여윔증 증상을 나타내는 넙치 병어의 병리조직학적 검사에서 점액포자충의 감염과 함께 다량의 섬모충이 관련조직 내에서 관찰되었다. 이러한 소견은 점액포자충(myxozoa)의 감염으로 의심되는 증상들에 대하여 원생생물(protozoa)과 같은 다른 미세기생체(micropara-sites)의 복합적인 관여가 의심되어 병리조직학적 관찰과 함께 분자 조직학적 분석을 실시하였으며, 그 내용과 지금까지의 결과를 정리하였다.

대상 데이터

제주 연안의 넙치 양어장 가운데 어류 질병의 원인 세균 혹은 바이러스는 검출되지 않았으나 외관상 마르거나 복부가 팽창되는 개체가 나타나는 양어장 8(A-H)곳에서 각 한 수조를 선택하여(단, D와 E는 2개 수조)에서 3-5마리씩 채취하여 총 40마리의 넙치를 대상으로 체장, 체중을 계측하고, 육안적 소견과 부검소견을 기록하였다. Table 1에 그 내용을 정리하였다.

이론/모형

ISH(insitu hybridization)반응시켜 관찰하는 전반의 제작과정은 Lee et al. (2009)을 참고하였다. Probe 합성에 사용된 Primer sets의 정보는 Table 3에 나타내었다.

성능/효과

H&E 염색을 통한 신장조직의 관찰에서는 다양한 형태의 영양체(trophic stage)가 관찰되어 본 연구에서 동정되지 않은 점액포자충의 감염도 의심되었다
H&E 염색을 통한 신장조직의 관찰에서는 다양한 형태의 영양체(trophic stage)가 관찰되어 본 연구에서 동정되지 않은 점액포자충의 감염도 의심되었다. 또한 plasmodium보다 그 크기가 큰 원생생물이 생식소에서 관찰되어 ISH로 확인한 결과 Scuticociliate인 것으로 확인되어 점액포자충 만이 아니라 섬모충도 복합감염 되어 있었다.

후속연구

또한 모든 소화관에서 P. anisocaudata가 검출되지 않은 가운데 D2의 소화관 점액세포 내에서 반응 양성이 확인되어 이후 추가적인 조사가 필요할 것으로 보인다(Table 4, Table 5, Table 6). 최근에 양식 넙치에서 보고된 Parvicapsular 종 가운데 P.
septempunctata가 D1수조의 소화관 조직에서 검출되었지만 ISH 반응에서는 K. septempunctata에 대한 반응은 모든 샘플에서 음성으로 나타나 앞으로 더 많은 감염 개체를 대상으로 분석이 필요할 것으로 생각된다.
그러나 아직 원인으로 크게 거론되지 않는 Scuticociliate와 같은 섬모충의 생식소 내 감염과 동정 되지 않은 점액포자충류의 검출은 의외의 다양한 미세기생충이 복합적으로 관여하여 발병할 가능성을 고려해 보아야 하는 것은 아닐까 생각된다. 관련 병증의 발생 조건에 대한 정확한 데이터베이스를 기반으로 예방할 수 있는 방법에 대한 연구도 집중적으로 이루어져야 할 것이며, 또한 이후 유사 병증이 나타나는 경우에 비뇨생식계의 분자생물학적, 병리조직학적인 계획적인 검토는 물론 혈액 성분의 분석도 추가적으로 실시해 볼 필요가 있을 것으로 생각된다. 본 연구를 통하여 넙치양식장의 연안에서 발생하는 해양미생물이 양식 환경에 미치는 영향에 대하여 조금 더 고민해 보아야 할 것으로 여겨진다.
관련 병증의 발생 조건에 대한 정확한 데이터베이스를 기반으로 예방할 수 있는 방법에 대한 연구도 집중적으로 이루어져야 할 것이며, 또한 이후 유사 병증이 나타나는 경우에 비뇨생식계의 분자생물학적, 병리조직학적인 계획적인 검토는 물론 혈액 성분의 분석도 추가적으로 실시해 볼 필요가 있을 것으로 생각된다. 본 연구를 통하여 넙치양식장의 연안에서 발생하는 해양미생물이 양식 환경에 미치는 영향에 대하여 조금 더 고민해 보아야 할 것으로 여겨진다.

참고문헌 (28)

Cho JB and Kim KH. 2004. Light and electro microscopical observation of Parvicapsula anisocaudata (Myxosporea: Parvicapsulidae) from urinary system of cultured olive flounder Paralichtys olivaceus. J Fish Pathol 17, 179-189.
Cho JB, Lee MK, Huh MD and Kim KH. 2005. Co-infection of two myxosporean parasites-Parvicapsula anisocaudata and an unidentified myxosporean-in the kidney of cultured olive flounder Paralichthys olivaceus. J Fish Pathol 18, 119-124.

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Dykov I, Kodadkov A, Buron I, Fiala I and Roumillat WA. 2013. Sinuolinea infections in the urinary system of Cynoscion species (Sciaenidae) and phylogenetic position of the type species of Sinuolinea Davis, 1917 (Myxozoa:Myxosporea). Int J Parasitol Parasites Wildl 2, 10-17. https://doi.org/10.1016/j.ijppaw.2012.11.004.

상세보기
Fiala Ivan. 2006. The phylogeny of Myxosporea (Myxozoa) based on small subunit ribosomal RNA gene analysis. Int J Parasitol 36, 1521-1534. https://doi.org/10.1016/j.ijpara.2006.06.016.

상세보기
Grabner DS, Yokoyama H, Shirakashi S and Kinami R. 2012. Diagnostic PCR assay to detect and differentiate Kudoa septempunctata, K. thyrsites and K. lateolabracis (Myxozoa, Multivalvulida) in muscle tissue of olive flounder Paralichthys olivaceus. Aquaculture 338-341, 36-40. https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.2012.01.022.

상세보기
Jones SRM, Prosperi-Porta G, Dawe SC and Barnes DP. 2004a. Distribution, prevalence and severity of Parvicapsular minibicornis infections among anadromous salmonids in the Fraser River, Britich Columbia, Canada. Dis Aquat Org 54, 49-54. https://doi.org/10.3354/dao054049.

상세보기
Jones SRM, Prosperi-Porta G, Dawe SC, Blackbourn J, Taylor K, Lowe G and Osborn A. 2004b. Proliferative renal myxosporidiosis in adult coho salmon Oncorhynchus kisutch in British Columbia and Washington. Folia Parasitologica 51, 221-227. https://doi.org/10.14411/fp.2004.027.

상세보기
Kim H, Baek KW, Kim A, Luan MT, Lim Y, Roh HJ, Kim N, Kim DH, Choi YH, Kim S, Kim HS, Ock MS and Cha HJ. 2019. Genome based quantification of Miamiensis avidus in multiple organs of infected olive flounder Paralichthys olivaceus by real-time PCR. Genes Genomics 41, 567-572. https://doi.org/10.1007/s13258-019-00792-z.

상세보기
Kim SM, Jun LJ, Lee DW, Park HK, Jeong HD, Kim JS and Jeong JB. 2018. Monitoring of emaciation disease in cultured Paralichthys olivaceus of Jeju island during 2014-2015. Fish Aquat Sci 21, 17. https://doi.org/10.1186/s41240-018-0094-z.

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Kim SM, Jun LJ, Park MA, Jeong HD and Jeong JB. 2015. Characterization of the myxosporean parasite isolated from emaciated olive flounder Paralichthys olivaceus on Jeju Island. Korean J Fish Aquatic Sci 48, 337-345. https://doi.org/10.5657/KFAS.2015.0337.

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Kim YK, Jeong JB, Lee MK, Park SI, Park MA, Choe MK and Yeo IK. 2011. Pathophysiology of olive flounder Paralichthys olivaceus suffering from emaciation. J Fish Pathol 24, 11-18. https://doi.org/10.7847/jfp.2011.24.1.011.

원문보기 상세보기
Kodadkova A, Dykova I, Tyml T, Ditrich O and Fiala I. 2014. Myxozoa in high arctic: Suvey on the central part of Svalbard archipelago. Int J Parasitol Parasites Wildl 3, 41-56.

상세보기
Lee NS, Do JW, Park JW and Kim YC. 2009. Characterization of virus distribution in rock bream (Oplegnathus fasciatus; Temminck and Schlegel) infected with Megalocytivirus. J Comp Path 141, 63-69. https://doi.org/10.1016/j.jcpa.2009.03.008.

상세보기
Lee NS, Do JW, Kim MS, Won K, Cho M and Jung SH. 2019. Examination about Infection form of Kudoa septempunctata in muscle of olive flounder Paralichthys olivaceus using molecular and morphological methods. J Kor Fish Mar Edu 31, 154-162. https://doi.org/10.13000/JFMSE.2019.2.31.1.154.

상세보기
Matsukane Y, Sato H, Tanaka S, Kamata Y and Yoshiko SK. 2010. Kudoa septempunctata n.sp.(Myxosporea:Multivalvulida) from an aquacultured olive flounder Paralichthys olivaceus imported from Korea. Parasitol Res 107, 865-872. https://doi.org/10.1007/s00436-010-1941-8.

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Moustafa EMM, Tange N, Shimada A and Morita T. 2010. Experimental scuticociliatosis in Japanese flounder Paralichthys olivaceus infected with Miamiensis avidus: Pathological study on the possible neural routes of invasion and dissemination of the scuticociliate inside the fish body. J Vet Med Sci 72, 1557-1563. https://doi.org/10.1292/jvms.10-0214.

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Rossteuscher S, Wenker C, Jermann T, Wahli T, Oldenberg E and Schmidt-Posthaus H. 2008. Severe scuticociliate Philasterides dicentrarchi infection in population of sea dragons (Phycodurus eques and Phyllopteryx taemidlatus). Vet Pathol 45, 546-550. https://doi.org/10.1354/vp.45-4-546.

상세보기
Sekiya M, Setsuda A, Sato H, Song K, Han JK, Kim GJ and Yeo IK. 2016. Enteromyxum leei (Myxosporea:Bivalvulida) as the cause of myxosporean emaciation disease of farmed olive flounders Paralichthys olivaceus and a turbot Scophthalmus maximus on Jeju Island, Korea. Parasitol Res 115, 4229-4237. https://doi.org/10.1007/s00436-016-5200-5.

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Shin SP, Jin CN, Sohn HC and Lee J. 2018a. Parvicapsula curvatura n. sp. in cultured olive flounder Paralichthys olivaceus and phylogenetic characteristics of the genus Parvicapsula. Dis Aquat Org 130, 199-207. https://doi.org/10.3354/dao03276.

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Shin SP, Jin CN, Sohn HC and Lee J. 2019a. Sinuolinea capsularis (Myxosporea:Sinuolineidae) isolated from urinary bladder of cultured olive flounder Paralichthys olivaceus. Korean J Parasitol 57, 127-134. https://doi.org/10.3347/kjp.2019.57.2.127.

원문보기 상세보기
Shin SP, Jin CN, Sohn HC, Yokoyama H and Lee J. 2019b. A new species Myxodavisia jejuensis n. sp. (Myxosporea: Sinuolineidae) isolated from cultured olive flounder Paralichthys olivaceus in South Korea. Parasitol Res 118, 3105-3112. https://doi.org/10.1007/s00436-019-06454-z.

상세보기
Shin SP, Sohn HC, Jin CN, Kang BJ and Lee J. 2018b. Molecular diagnostics for verifying an etiological agent of emaciation disease in cultured olive flounder Paralichthys olivaceus in Korea. Aquaculture 493, 18-25. https://doi.org/10.1016/j.aquaculture.2018.04.041.

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Stephen WF and Matt L. 2006. Phylum Myxozoa. In: Fish disease and disorder Vol.1 Protozoan and Metazoans infections. P.T.K.Woo, ed. CAB International., London, U.K., 231-296.
Takeuchi F, Ogasawara Y, Kato K, Skizuka T, Nozaki T, Yoshiko SK and Ohnish T. 2016. Genetic variants of Kudoa septempunctata (Myxozoa:Multivalvulida), a flounder parasite causing foodborne disease. J Fish Dis 39, 667-672. https://doi.org/10.1111/jfd.12395.

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Tun T, Ogawa K and Wkabayashi H. 2002. Pathological changes induced by three myxosporeans in the intestine of cultured tiger puffer Takifugu rubripes (Temminck and Schlegel). J Fish Dis 25, 63-72. https://doi.org/10.1046/j.1365-2761.2002.00333.x.

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Yanagida T. 2017. Myxosporean emaciation disesease. Fish Pathol 52, 63-67. https://doi.org/10.3147/jsfp.52.63.

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Yasuda H, Ooyama T, Nakamura A, Iwata K, Palenzuela O and Yokoyama H. 2005. Occurrence of the myxosporean emaciation disease caused by Enteromyxum leei in cultured Japanese flounder Paralichthys olivaceus. Fish Pathol 40, 175-180. https://doi.org/10.3147/jsfp.40.175.

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Yoshiko SK, Fukuda Y, Mori K, Mekata T, Namba T, Kuroda M, Yamazaki A and Ohnishi T. 2015. New validated rapid screening methods for identifying Kudoa septempunctata in olive flounder Paralichthys olivaceus. Jpn J Infect Dis 68,145-147. https://doi.org/10.7883/yoken.JJID.2014.133.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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