[논문]폴리도파민으로 코팅된 다공성 PCL/PLGA 복합 폴리머 지지체를 이용한 흉선상피세포의 3차원 세포배양

최승미; 이도영; 임예선; 황선영; 송원훈; 정영훈; 윤식

doi:10.5352/jls.2023.33.8.612

폴리도파민으로 코팅된 다공성 PCL/PLGA 복합 폴리머 지지체를 이용한 흉선상피세포의 3차원 세포배양
Three-Dimensional Culture of Thymic Epithelial Cells Using Porous PCL/PLGAComposite Polymeric Scaffolds Coated with Polydopamine 원문보기

생명과학회지 = Journal of life science, v.33 no.8, 2023년, pp.612 - 622

최승미 (부산대학교 의과대학 해부학교실) , 이도영 (부산대학교 의과대학 해부학교실) , 임예선 (부산대학교 의과대학 해부학교실) , 황선영 (부산대학교 의과대학 해부학교실) , 송원훈 (양산부산대학교병원 비뇨의학과) , 정영훈 (경북대학교 기계공학부) , 윤식 (부산대학교 의과대학 해부학교실)

초록
AI-Helper

생체 면역조직에서는 면역세포의 성장, 분화에 있어서 매우 중요한 역할을 수행하는 면역조직 기질세포가 존재하며, 이들은 서로 연결된 3차원적인 그물구조를 형성하면서 그 사이의 공간에 위치한 면역세포와의 상호작용을 통해 다양한 면역반응을 수행한다. 따라서 생체환경을 모사한 면역세포의 배양이 이루어지기 위해서는 면역세포들이 상호작용할 수 있는 3차원적 면역조직 기질세포 뼈대의 구축이 매우 중요한 의의를 지닌다. 특히 면역반응에서 핵심적인 기능을 수행하는 T세포의 생존, 성장 및 분화에 있어서 필수적인 역할을 하는 흉선상피세포에 대한 3차원적 배양은 T세포의 연구에 필수적으로 요구되지만, 아직 이에 관한 연구가 거의 이루어지지 않은 실정이다. 본 연구에서 흉선상피세포는 폴리도파민으로 코팅된 PCL 및 PCL/PLGA 지지체에서 비코팅군에 비해 부착 및 성장이 촉진되었다. 또한 폴리도파민으로 코팅된 지지체에서 흉선상피세포를 배양하였을 때 2차원 배양군에 비해 흉선세포형성촉진인자의 유전자 발현이 더 증가하였다. 따라서 본 연구는 면역조직 기질세포의 3차원 배양 기술의 개발에 크게 기여할 수 있을 것으로 사료된다.

Abstract ▼ AI-Helper

T-cell deficiency may occur in various clinical conditions including congenital defects, cell/organ transplantation, HIV infection and aging. In this regard, the development of artificial thymus has recently been attracting much attention. To achieve this aim, the development of techniques for 3D culture of thymic stromal cells is necessary because thymocytes grown only in a 3D thymic microenvironment can be differentiated fully to become mature, immunocompetent T cells; the same cannot be achieved for thymocytes grown in 2D. This study aimed to develop a nanotechnology-based 3D culture technique using polymeric scaffolds for thymic epithelial cells (TECs), the main component of thymic stromal cells. Scanning electron microscopic observation revealed that the pores of both PCL and PCL/PLGA scaffolds were filled with TECs. Interestingly, TECs grown in 3D on polydopamine-coated scaffolds exhibited enhanced cell attachment and proliferation compared to those grown on non-coated scaffolds. In addition, the gene expression of thymopoietic factors was upregulated in TECs cultured in 3D on polydopamine-coated scaffolds compared to those cultured in 2D. Taken together, the results of the present study demonstrate an efficient 3D culture model for TECs using polymeric scaffolds and provide new insights into a novel platform technology that can be applied to develop functional, biocompatible scaffolds for the 3D culture of thymocytes. This will eventually shed light on techniques for the in vitro development of T cells as well as the synthesis of artificial thymus.

주제어

표/그림 (9)

그림 Fig. 1. Scanning electron microscopic images of CRECs cultured on PCL scaffolds for 1 day after cell seeding with different densities. Scale bars, top, 500 μm; bottom, 100 μm.
그림 Fig. 2. Scanning electron microscopic images of CRECs cultured on PCL scaffolds to show the distribution of cells at different planes of the scaffolds. CRECs were cultured for 1 day after cell seeding at a density of 1×10⁵. The scaffolds were cut into three pieces with similar thicknesses. The top aspect of each piece of the scaffold was observed. Arrows, CRECs. Scale bars, ×80, 500 μm; ×200, 200 μm.
그림 Fig. 3. Evaluation of cell proliferation by different cell seeding methods. (A) Scanning electron microscopic images of CRECs cultured on PCL scaffolds for 1 day. CRECs (1×10⁵) were seeded by single surface seeding, suspension seeding or multiple surface seeding. Arrows, CRECs. (B) cell proliferation assay for CRECs cultured on PCL scaffold for 1 day by a CCK-8-based cell viability test. Data are presented as a bar graph depicting the means of optical density values ± SD from three independent experiments with 3 replicates (**p<0.01). Scale bar, 500 μm.
그림 Fig. 4. Evaluation of cell proliferation by different coating methods. (A) Scanning electron microscopic images of CRECs cultured on PCL scaffolds for 1 day. Scaffolds were coated by PLL, collagen and polydopamine at a concentration as indicated in the Materials and Methods. Arrows, CRECs. (B) Cell proliferation assay for CRECs cultured on PCL scaffold for 1 day by a CCK-8-based cell viability test. Data are presented as a bar graph depicting the means of optical density values ± SD from three independent experiments with 3 replicates (*p<0.05). Scale bar, 200 μm.
그림 Fig. 5. Evaluation of cell attachment by the coating of scaffold surface. Semithin and transmission electron microscopic images of CRECs cultured on PCL/PLGA scaffolds for 1 day. Scaffolds were either non-coated or polydopamine-coated. Arrows, CRECs. Scale bars, Semithin, 50 μm; Ultrathin, 5 μm.
그림 Fig. 6. Evaluation of cell proliferation by different types of scaffolds with or without coating of scaffold surface. CRECs and SNECs were cultured on PCL or PCL/PLGA scaffolds for 1 or 3 day(s). Each scaffold type was either non-coated or coated by polydopamine at a concentration as indicated in the Materials and Methods. Cell proliferation was measured by a CCK-8-based cell viability test. Data are presented as a bar graph depicting the means of optical density values ± SD from three independent experiments with 3 replicates (*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001)
그림 Fig. 7. Phase contrast microscopic images of CRECs and SNECs cultured on PCL/PLGA scaffolds for 3 days. Scaffolds were either non-coated or polydopaminecoated. Scale bar, 50 μm.
그림 Fig. 8. Scanning electron microscopic images to observe the morphology of the CRECs and SNECs cultured on PCL/PLGA scaffolds for 7 days. Scaffolds were either non-coated or polydopamine-coated. Scale bar, 50 μm.
그림 Fig. 9. Evaluation of gene expression by 2D culture for 4 days or 3D culture of CRECs on polydopamine-coated PCL/ PLGA scaffold for 21 days. RT-PCR analysis was performed to measure mRNA levels, and densitometry results are expressed as ratios of GM-CSF and ICAM-1 mRNA normalized to GAPDH mRNA, plotted in a bar graph depicting the means of ratio values ± SD from three independent experiments with 3 replicates.

AI 본문요약
AI-Helper

문제 정의

따라서 본 연구는 마우스 흉선상피세포를 대상으로 PCL 및 PCL/PLGA 지지체에서 세포의 파종 밀도와 방법에 따른 세포의 부착 및 성장 특성, 폴리머 지지체의 표면 개질에 따른 세포의 부착 및 형태학적 특성, 그리고 폴리머 지지체에 대한 흉선상피세포의 활성과 관련된 유전자의 발현 변화를 알아보고자 실시하였다.
본 연구의 목적은 면역반응에서 핵심적인 기능을 수행하는 T세포의 성장 및 분화에 필수적인 역할을 하는 흉선상피세포를 대상으로 (1) 폴리머 지지체에서 세포의 파종밀도와 파종법에 따른 부착 및 성장 특성, (2) 폴리머 지지체의 표면개질에 따른 흉선상피세포의 부착 및 형태학적 특성, 및 (3) 폴리머 지지체에서 3차원 배양된 흉선상피세포의 T세포형성조절유전자의 발현 특성을 알아보고자 하는 것이다.

이론/모형

PCL 및 PCL/PLGA 지지체는 정밀적층가공기술(additive manufacturing technique)의 한 종류인 압출적층기술(fused deposition modeling)을 사용하여 3D 바이오프린터로 출력하여 제작하였다.

성능/효과

결론적으로, 본 연구에서 폴리도파민으로 코팅된 PCL 및 PCL/PLGA 지지체를 이용하여 흉선상피세포를 효과적으로 3차원 배양할 수 있음을 입증하였다. 이러한 결과는 향후 인공면역조직의 개발뿐만 아니라 뼈, 연골 그리고 간 등 다양한 조직을 조직공학적으로 제작하는데 매우 유용하게 활용될 수 있을 것이다.
3A). 또한 각 지지체에서 세포들의 증식능을 CCK-8 측정법을 이용하여 분석한 결과, 주사전자현미경 관찰 결과와 유사하게 다회표면파종법이 나머지 파종법에 비하여 약 3배 이상의 세포 증식 효과가 있는 것을 알 수 있었다(Fig. 3B).
이러한 결과는 폴리도파민을 이용한 표면개질은 PCL 및 PCL/PLGA와 같이 생체활성물질이 부족하고 소수성 성질로 인해 세포 부착 및 성장에 어려움이 있어 세포적합성이 낮은 소재의 단점을 극복하는데 유용한 방법이 될 수 있음을 시사한다. 또한 폴리도파민으로 표면개질된 PCL/PLGA 지지체에서 3차원적 배양된 흉선상피세포에서 흉선세포형성촉진인자인 GM-CSF 및 ICAM-1 유전자의 발현은 2차원 배양된 대조군에 비해 현저히 높아지는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 흉선상피세포의 활성을 증가시킬 수 있는 효율적인 생체모사 3차원 흉선상피세포 배양 기술 개발에 기여할 수 있을 것이다.
본 연구에서도 폴리도파민으로 표면개질된 PCL 및 PCL/PLGA 지지체에서 배양된 흉선상피세포는 표면개질 하지 않은 대조군과 PLL 및 콜라겐으로 표면개질한 실험군과 비교하여 세포의 접착, 생존 및 증식이 증가한다는 사실을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 폴리도파민을 이용한 표면개질은 PCL 및 PCL/PLGA와 같이 생체활성물질이 부족하고 소수성 성질로 인해 세포 부착 및 성장에 어려움이 있어 세포적합성이 낮은 소재의 단점을 극복하는데 유용한 방법이 될 수 있음을 시사한다.
통상적인 2차원적 세포배양 방법으로 4일 동안 배양한 CREC와 폴리도파민으로 표면개질된 PCL/PLGA 지지체에서 21일 동안 3차원적으로 배양한 CREC를 대상으로 역전사 중합효소연쇄반응법을 이용하여 흉선세포형성촉진인자인 GM-CSF 및 ICAM-1 유전자의 발현 특성을 분석한 결과, 2차원적 세포배양법에 비해 3D 세포배양법에서 이들 유전자의 발현이 현저히 높아지는 것을 확인할 수 있었다(Fig. 9).
폴리머 지지체에 대한 적절한 세포 파종법을 알아보기 위하여 PCL 폴리머 지지체에 흉선상피세포인 CREC를 일회표면파종법, 다회표면파종법 및 부유파종법으로 파종하고 각각 1일 동안 배양하여 지지체 표면에 세포를 부착시킨 다음, 주사전자현미경 및 CCK-8 측정법으로 세포의 부착 및 증식 특성을 관찰한 결과, 다회표면파종법은 일회표면파종법 및 부유파종법과 비교하였을 때 지지체의 중심부 및 상부에서 세포가 훨씬 더 많이 부착되었으며 또한 더 넓은 지역에 걸쳐 분포함을 확인할 수 있었다(Fig. 3A).

후속연구

결론적으로, 본 연구에서 폴리도파민으로 코팅된 PCL 및 PCL/PLGA 지지체를 이용하여 흉선상피세포를 효과적으로 3차원 배양할 수 있음을 입증하였다. 이러한 결과는 향후 인공면역조직의 개발뿐만 아니라 뼈, 연골 그리고 간 등 다양한 조직을 조직공학적으로 제작하는데 매우 유용하게 활용될 수 있을 것이다.
또한 폴리도파민으로 표면개질된 PCL/PLGA 지지체에서 3차원적 배양된 흉선상피세포에서 흉선세포형성촉진인자인 GM-CSF 및 ICAM-1 유전자의 발현은 2차원 배양된 대조군에 비해 현저히 높아지는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 흉선상피세포의 활성을 증가시킬 수 있는 효율적인 생체모사 3차원 흉선상피세포 배양 기술 개발에 기여할 수 있을 것이다.

참고문헌 (41)

Asnaghi, M. A., Barthlott, T., Gullotta, F., Strusi, V.,？Amovilli, A., Hafen, K., Srivastava, G., Oertle, P., Toni,？R., Wendt, D., Hollander, G. A. and Martin, I. 2021. Thymus？extracellular matrix-derived scaffolds support graft-resident thymopoiesis and long-term in vitro culture of adult？thymic epithelial cells. Adv. Funct. Mater. 31, 2010747.

상세보기
Baruffaldi, D., Palmara, G., Pirri, C. and Frascella, F. 2021.？3D cell culture: recent development in materials with tunable stiffness. ACS Appl. Bio. Mater. 4, 2233-2250.

상세보기
Bitar, M., Brown, R. A., Salih, V., Kidane, A. G., Knowles,？J. C. and Nazhat, S. N. 2008. Effect of cell density on osteoblastic differentiation and matrix degradation of biomimetic dense collagen scaffolds. Biomacromolecules 9,？129-135.

상세보기
Burg, K. J., Holder, W. D. Jr., Culberson, C. R., Beiler,？R. J., Greene, K. G., Loebsack, A. B., Roland, W. D.,？Eiselt, P., Mooney, D. J. and Halberstadt, C. R. 2000.？Comparative study of seeding methods for three-dimensional polymeric scaffolds. J. Biomed. Mater. Res. 52, 576.
Capuana, E., Lopresti, F., Ceraulo, M. and La Carrubba,？V. 2022. Poly-l-lactic acid (PLLA)-based biomaterials for？regenerative medicine: a review on processing and applications. Polymers (Basel) 14, 1153.

상세보기
Chisti, Y. 2001. Hydrodynamic damage to animal cells. Crit.？Rev. Biotechnol. 21, 67-110.

상세보기
Dai, W., Dong, J., Chen, G. and Uemura, T. 2009. Appli- cation of low-pressure cell seeding system in tissue engineering. Biosci. Trends 3, 216-219.

상세보기
Dunn, J. C., Chan, W. Y., Cristini, V., Kim, J. S., Lowengrub, J., Singh, S. and Wu, B. M. 2006. Analysis of cell？growth in three-dimensional scaffolds. Tissue Eng. 12, 705-716.

상세보기
Essa, D., Kondiah, P. P. D., Choonara, Y. E. and Pillay,？V. 2020. The design of poly (lactide-co-glycolide) nanocarriers for medical applications. Front. Bioeng. Biotechnol. 8, 48.

상세보기
Felix Lanao, R. P., Jonker, A. M., Wolke, J. G., Jansen,？J. A., Van Hest, J. C. and Leeuwenburgh, S. C. 2013.？Physicochemical properties and applications of poly？(lactic-co-glycolic acid) for use in bone regeneration.？Tissue Eng. Part B Rev. 19, 380-390.
Figueiredo, M., Zilhao, R. and Neves, H. 2020. Thymus inception: molecular network in the early stages of thymus？organogenesis. Int. J. Mol. Sci. 21, 5765.
Gloria, A., De-Santis, R. and Ambrosio, L. 2010. Polymer-based composite scaffolds for tissue engineering. J. Appl.？Biomater. Biomech. 8, 57-67.
Hong, S., Kim, K. Y., Wook, H. J., Park, S. Y., Lee, K.？D., Lee, D. Y. and Lee, H. 2011. Attenuation of the in？vivo toxicity of biomaterials by polydopamine surface？modification. Nanomedicine 6, 793-801.
Huang, X., Huang, Z., Gao, W., Gao, W., He, R., Li, Y.,？Crawford, R., Zhou, Y., Xiao, L. and Xiao, Y. 2022. Current advances in 3D dynamic cell culture systems. Gels？8, 829.
Jain, R. A. 2000. The manufacturing techniques of various？drug loaded biodegradable poly (lactide-co-glycolide)？(PLGA) devices. Biomaterials 21, 2475-2490.

상세보기
Kao, C. T., Lin, C. C., Chen, Y. W., Yeh, C. H., Fang,？H. Y. and Shie, M. Y. 2015. Poly (dopamine) coating of？3D printed poly (lactic acid) scaffolds for bone tissue？engineering. Mater. Sci. Eng. C Mater. Biol. Appl. 56, 165-173.
Kim, K., Dean, D., Mikos, A. G. and Fisher, J. P. 2009.？Effect of initial cell seeding density on early osteogenic？signal expression of rat bone marrow stromal cells cultured on cross-linked poly (propylene fumarate) disks.？Biomacromolecules 10, 1810-1817.

상세보기
Kim, T. H., Yun, Y. P., Park, Y. E., Lee, S. H., Yong,？W., Kundu, J., Jung, J. W., Shim, J. H., Cho, D. W., Kim,？S. E. and Song, H. R. 2014. In vitro and in vivo evaluation？of bone formation using solid freeform fabrication-based？bone morphogenic protein-2 releasing PLC/PLGA scaffolds. Biomed. Mater. 9, 025008.
Kundu, J., Shim, J. H., Jang, J., Kim, S. W. and Cho,？D. W. 2013. An additive manufacturing-based PCL-alginate-chondrocyte bioprinted scaffold for cartilage tissue？engineering. J. Tissue Eng. Regen. Med. 9, 1286-1297.
Lee, H., Dellatore, S. M., Miller, W. M. and Messersmith,？P. B. 2007. Mussel-inspired surface chemistry for multifunctional coatings. Science 318, 426-430.

상세보기
Lee, S. J., Kim, M. E., Nah, H., Seok, J. M., Jeong, M.？H., Park, K., Kwon, I. K., Lee, J. S. and Park, S. A. 2019.？Vascular endothelial growth factor immobilized on mussel-inspired three-dimensional bilayered scaffold for artificial vascular graft application: In vitro and in vivo？evaluations. J. Colloid Interface Sci. 537, 333-344.
Liberio, M. S., Sadowski, M. C., Soekmadji, C., Davis,？R. A. and Nelson, C. C. 2014. Differential effects of tissue？culture coating substrates on prostate cancer cell adherence, morphology and behavior. PLoS One 9, e112122.

상세보기
Liu, Y., Ai, K. and Lu, L. 2014. Polydopamine and its？derivative materials: synthesis and promising applications？in energy, environmental, and biomedical fields. Chem.？Rev. 114, 5057-5115.
Makadia, H. K. and Siegel, S. J. 2011. Poly lactic-co-glycolic acid (PLGA) as biodegradable controlled drug delivery carrier. Polymers (Basel) 3, 1377-1397.

상세보기
Park, K., Kim, S., Jo, Y., Park, J., Kim, I., Hwang, S.,？Lee, Y., Kim, S. Y. and Seo, J. 2022. Lubricant skin on diverse biomaterials with complex shapes via polydopamine-mediated surface functionalization for biomedical？applications. Bioact. Mater. 25, 555-568.
Qin, X., Wu, Y., Liu, S., Yang, L., Yuan, H., Cai, S.,？Flesch, J., Li, Z., Tang, Y., Li, X., Zhuang, Y., You, C.,？Liu, C. and Yu, C. 2022. Surface modification of polycaprolactone scaffold with improved biocompatibility and？controlled growth factor release for enhanced stem cell？differentiation. Front. Bioeng. Biotechnol. 7, 802311.
Roh, J. D., Brennan, M. P., Lopez-Soler, R. I., Fong, P.？M., Goyal, A., Dardik, A. and Breuer, C. K. 2007. Construction of an autologous tissue-engineered venous conduit from bone marrow-derived vascular cells: optimization of cell harvest and seeding techniques. J. Pediatr.？Surg. 42, 198-202.

상세보기
Ruhe, P. Q., Hedberg, E. L., Padron, N. T., Spauwen, P.？H., Jansen, J. A. and Mikos, A. G. 2003. rhBMP-2 release？from injectable poly (D, L-lactic-co-glycolic acid)/calcium-phosphate cement composites. J. Bone Jt. Surg. 85,？75-81.
Sawadkar, P., Mohanakrishnan, J., Rajasekar, P., Rahmani,？B., Kohli, N., Bozec, L. and Garcia-Gareta, E. 2020. A？synergistic relationship between polycaprolactone and natural polymers enhances the physical properties and biological activity of scaffolds. ACS Appl. Mater. Interfaces？12, 13587-13597.

상세보기
Schmitt, P. R., Dwyer, K. D. and Coulombe, K. L. K. 2022.？Current applications of polycaprolactone as a scaffold material for heart regeneration. ACS Appl. Bio Mater. 5,？2461-2480.

상세보기
Shim, J. H., Kim, A. J., Park, J. Y., Yi, N., Kang, I., Park,？J., Rhie, J. W. and Cho, D. W. 2013. Effect of solid freeform fabrication-based polycaprolactone/poly (lactic-coglycolic acid)/collagen scaffolds on cellular activities of？human adipose-derived stem cells and rat primary hepatocytes. J. Mater. Sci. Mater. Med. 24, 1053-1065.

상세보기
Shoiche, M. S. 2010. Polymer scaffolds for biomaterials？applications. Macromolecules 43, 581-591.
Torigoe, I., Sotome, S., Tsuchiya, A., Yoshii, T., Takahashi,？M., Kawabata, S. and Shinomiya, K. 2007. Novel cell？seeding system into a porous scaffold using a modified？low-pressure method to enhance cell seeding efficiency？and bone formation. Cell Transplant. 16, 729-739.
Tsai, W. B., Chen, W. T., Chien, H. W., Kuo, W. H. and？Wang, M. J. 2014. Poly (dopamine) coating to biodegradable polymers for bone tissue engineering. J. Biomater.？Appl. 28, 837-848.

상세보기
Vunjak-Novakovic, G., Obradovic, B., Martin, I., Bursac,？P. M., Langer, R. and Freed, L. E. 1998. Dynamic cell？seeding of polymer scaffolds for cartilage tissue engineering. Biotechnol. Prog. 14, 193-202.

상세보기
Wu, C., Han, P., Liu, X., Xu, M., Tian, T., Chang, J. and？Xiao, Y. 2014. Mussel-inspired bioceramics with self-assembled Ca-P/polydopamine composite nanolayer: Preparation, formation mechanism, improved cellular bioactivity？and osteogenic differentiation of bone marrow stromal？cells. Acta Biomater. 10, 428-438.
Yan, J., Yang, L., Lin, M. F., Ma, J., Lu, X. and Lee,？P. S. 2012. Polydopamine spheres as active templates for？convenient synthesis of various nanostructures. Small 9,？596-603.
Zhang, Y. Z., Su, B., Venugopal, J., Ramakrishna, S. and？Lim, C. T. 2007. Biomimetic and bioactive nanofibrous？scaffolds from electrospun composite nanofibers. Int. J.？Nanomedicine 2, 623-638.
Zhou, H., Weir, M. D. and Xu, H. H. 2011. Effect of cell？seeding density on proliferation and osteodifferentiation？of umbilical cord stem cells on calcium phosphate cement-fiber scaffold. Tissue Eng. Part A 17, 2603-2613.

상세보기
Zhou, Y., Deng, G., She, H., Bai, F., Xiang, B., Zhou,？J. and Zhang, S. 2023. Polydopamine-coated biomimetic？bone scaffolds loaded with exosomes promote osteogenic？differentiation of BMSC and bone regeneration. Regen.？Ther. 23, 25-36.
Zhu, H., Shi, Z., Cai, X., Yang, X. and Zhou, C. 2020.？The combination of PLLA/PLGA/PCL composite scaffolds integrated with BMP-2 loaded microspheres and？low-intensity pulsed ultrasound alleviates steroid-induced？osteonecrosis of the femoral head. Exp. Ther. Med. 20, 126.

상세보기

저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증