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논문 상세정보

민들레에서 enhanced green fluorescent protein(EGFP) 유전자의 발현

Expression of Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) Gene in Taraxacum mongolicum H. Mazz

초록

민들레의 효과적인 형질전환 방법을 개발하기 위하여 발아 후 6일 된 배축 조직을 reporter 유전자인 EGFP와 kanamycin 저항성 유전자인 npt Ⅱ를 운반하는 Agrobacterium tumefaciens LBA4404에 감염시켰다. 0.5㎎ㆍL⁻½ NAA와 1.0㎎ㆍL⁻½ BA를 첨가한 shoot 유도배지(SI medium)에 2일간 공동 배양한 후 50㎎ㆍL⁻½ kanamycin을 첨가한 선발배지(SM medium)에서 형질 전환된 shoot를 선발하였다. EGFP 유전자의 민들레 염색체 내 삽입은 EGFP와 npt II유전자에 특이적인 primer를 이용하여 PCR분석으로 확인하였다. 또한 형광현미경을 이용하여 도입된 유전자의 발현을 확인하였다. 이 결과 Agrobacterium tumefaciens-mediated 형질전환 체계를 이용하여 유용한 유전자가 삽입된 형질 전환된 민들레의 생산이 가능할 것으로 생각되었다.

Abstract

To develop an efficient protocol for the transformation of the Taraxacum mongolicum H. Mazz, hypocotyls taken from 6-day old plantlets were infected with Agrobacterium tumefaciens LBA4404 harboring the binary vector which carries the reporter gene EGFP (enhanced green fluorescent protein) and the kanamycin resistance gene npt Ⅱ. Infected explants were cocultured on shoot induction medium with 0.5 ㎎ㆍL⁻½ NAA, 1.0 ㎎ㆍL⁻½ BA (SI medium). After 2 days of culture, explants were transferred to SM medium (SI medium with 50 ㎎ㆍL⁻½ kanamycin). Putative transformed shoots were selected on SM medium. Integration of EGFP gene into host plant chromosome was confirmed through genomic PCR with specific primer in EGFP gene and npt II gene. In addition, expression of introduced EGFP gene was observed in transformed Taraxacum mongolicum using fluorescent microscope. These results suggest that transformants containing the useful foreign gene could be produced using Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation system in Taraxacum mongolicum.

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