Quantitative Real-Time PCR을 이용한 배추 Myrosinase 유전자 발현 형질전환 담배의 선발과 발현수준 분석 Selection of Tobacco Plants Expressing Chinese Cabbage Myrosinase Gene and Quantification of Myrosinase Gene Expression Level using Quantitative Real-Time PCR Method
배추에서 발견되는 isothiocyanate의 형태인 phenylethyl isothiocyanate는 강한 세포독성을 가지고 있으며 사람의 HL-60 백혈구 세포주에 apoptosis를 유도하는 능력을 가지고 있다는 사실이 보고되었다. isothiocyanate의 하나인 sulforaphane(1-isothiocyanato-4-(methylsulfinyl)-butane)은 myrosinase에 의한 glucosinolate-glucoraphainin의 대사물질이다. 따라서 배추에서 myrosinase의 과발현을 유도함으로써 sulforaphane 함유량이 높은 기능성 배추를 생산하는 것이 가능할 것으로 보인다. 이에 배추로부터 분리된 myrosinase 유전자를 도입시킨 형질전환담배들 중 유용한 개체를 선별하기 위한 효과적인 분석방법의 필요성이 제기되었다. 본 연구는 형질전환체에 도입된 myrosinase 유전자의 mRNA 수준에서의 정량과 monitoring을 위한 quantitative real-time PCR법을 고안하였다. 이 방법에 사용된 primer 쌍은 myrosinase 유전자에 대해 183bp의 증폭산물을 생산하며 높은 특이성을 가지고 있는 것으로 관찰되었다. Myrosinase sense와 antisense 유전자를 도입시킨 25개체의 형질전환담배를 대상으로 실험한 결과에서 성공적인 분석결과를 얻을 수 있었다. 따라서 이 방법은 유용한 형질전환체의 선별은 물론 myrosinase 유전자에 대한 mRNA 수준에서의 효과적인 정량법으로서 사용되어 질 수 있을 것으로 기대된다.
배추에서 발견되는 isothiocyanate의 형태인 phenylethyl isothiocyanate는 강한 세포독성을 가지고 있으며 사람의 HL-60 백혈구 세포주에 apoptosis를 유도하는 능력을 가지고 있다는 사실이 보고되었다. isothiocyanate의 하나인 sulforaphane(1-isothiocyanato-4-(methylsulfinyl)-butane)은 myrosinase에 의한 glucosinolate-glucoraphainin의 대사물질이다. 따라서 배추에서 myrosinase의 과발현을 유도함으로써 sulforaphane 함유량이 높은 기능성 배추를 생산하는 것이 가능할 것으로 보인다. 이에 배추로부터 분리된 myrosinase 유전자를 도입시킨 형질전환담배들 중 유용한 개체를 선별하기 위한 효과적인 분석방법의 필요성이 제기되었다. 본 연구는 형질전환체에 도입된 myrosinase 유전자의 mRNA 수준에서의 정량과 monitoring을 위한 quantitative real-time PCR법을 고안하였다. 이 방법에 사용된 primer 쌍은 myrosinase 유전자에 대해 183bp의 증폭산물을 생산하며 높은 특이성을 가지고 있는 것으로 관찰되었다. Myrosinase sense와 antisense 유전자를 도입시킨 25개체의 형질전환담배를 대상으로 실험한 결과에서 성공적인 분석결과를 얻을 수 있었다. 따라서 이 방법은 유용한 형질전환체의 선별은 물론 myrosinase 유전자에 대한 mRNA 수준에서의 효과적인 정량법으로서 사용되어 질 수 있을 것으로 기대된다.
Phenylethyl isothiocyanate, a isothiocyanate found in chinese cabbage (Brassica campestris), was reported to have a potent cytotoxicity and to be able to induce apoptosis against HL-60 human leukemic cell line. Sulforaphane (1-isothiocyanato-4-(methylsulfinyl)-butane), is a metabolite of the glucosi...
Phenylethyl isothiocyanate, a isothiocyanate found in chinese cabbage (Brassica campestris), was reported to have a potent cytotoxicity and to be able to induce apoptosis against HL-60 human leukemic cell line. Sulforaphane (1-isothiocyanato-4-(methylsulfinyl)-butane), is a metabolite of the glucosinolate-glucoraphainin by myrosinase in chinese cabbage. Hence, it would be possible to produce functional chinese cabbages having high sulforaphane contents by means of inducing myrosinase over-expression in the plant. In this study, we developed quantitative real-time PCR detection method for the quantification of myrosinase mRNA level in the transformants. The detection primer set of the method showed high specificity to the target gene and produced 183 base-pairs of PCR amplicon. 26 transformants, Nicotiana tabacum having myrosinase sense or antisense genes, were analysed and quantified successfully. In conclusion, this method would not only facilitate to select the useful transformants but also assay effectively the quantification of expressed myrosinase in the transformants.
Phenylethyl isothiocyanate, a isothiocyanate found in chinese cabbage (Brassica campestris), was reported to have a potent cytotoxicity and to be able to induce apoptosis against HL-60 human leukemic cell line. Sulforaphane (1-isothiocyanato-4-(methylsulfinyl)-butane), is a metabolite of the glucosinolate-glucoraphainin by myrosinase in chinese cabbage. Hence, it would be possible to produce functional chinese cabbages having high sulforaphane contents by means of inducing myrosinase over-expression in the plant. In this study, we developed quantitative real-time PCR detection method for the quantification of myrosinase mRNA level in the transformants. The detection primer set of the method showed high specificity to the target gene and produced 183 base-pairs of PCR amplicon. 26 transformants, Nicotiana tabacum having myrosinase sense or antisense genes, were analysed and quantified successfully. In conclusion, this method would not only facilitate to select the useful transformants but also assay effectively the quantification of expressed myrosinase in the transformants.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.