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재조합 E. coli로부터 발현되는 철단백질의 분리 및 정제 원문보기

한국생물공학회 2001년도 추계학술발표대회, 2001 Nov. 07, 2001년, pp.697 - 700  

박현규 (충남대학교 화학공학과) ,  이지원 (생명공학연구원) ,  김인호 (충남대학교 화학공학과)

Abstract AI-Helper 아이콘AI-Helper

Iron is an essential nutrient for most organisms, which supplied to them in a protein-iron complex known as ferritin. Ferritins are multimeric proteins found in prokaryotes, plants and animals. They are consisted of spherical shell of 24 subunits defining a cavity of about 8nm in diameter, where an ...

AI 본문요약
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제안 방법

  • 배양액을 원심분리(6, 000rpm, 20min)하여 균체를 수확하였으며, 얻어진 세포들은 washing buffer A(50mM Tris-HCl, pH 8.0, l.OmM EDTA)에 의해 세척한 후 초음파 파쇄기로 세포파쇄를 수행하였다. 얻어진 상등액과 침전물을 각각 washing buffer B(50mM Tris-HCl, pH 8.
  • 본 연구에서는 수정된 전처리 단계를 이용하여 많은 양의 훼리틴을 용해시키며 오염 둘질을 제거한 후 DEAE-celluk)se[3]를 이용하여 훼 리 틴을 정 제하였다 읻어진분획들을 SDS-PAGE, 역상 HPLC와 GF(Gel filtration)-HPLC를 통하여 그 순도와양을 예측하였다. 최대의 순도와 수율을 얻기 위해 보다 간단하고 실용적인 공정을 개발함에 초점을 맞추었다.
  • LB 배지에(50ppm Amp') 배양하였다. 선택적인 배지에서 재조합된 대장균을 진탕배양(37C, 200rpm)하여 OD 0.6부근에서 IPTG로(최종농도 LOmM) 유도 후 계속해서 9시간 동안 배양하였다.
  • 전처리 시료를 선택하여 이온 교환크로마토그래피를 수행하였다. 얻어진 분획들을 역상 HPLC와 GF, HPLC를 통하여 그 양과 분자량 분포등을 확인하였다. 역상 HPLC는 Cig 킬럼에서 이동상으로 50% 증류수와 50% 아세토나이트릴을 사용하여 분석하였다.
  • OmM EDTA)에 의해 세척한 후 초음파 파쇄기로 세포파쇄를 수행하였다. 얻어진 상등액과 침전물을 각각 washing buffer B(50mM Tris-HCl, pH 8.0, l.OmM EDTA, l.OM or 4.0M Urea)로 용해한 후 전기영동을 이용하여 훼리틴을 확인하였다. 그 정제단계는 Fig.
  • 얻어진 분획들을 역상 HPLC와 GF, HPLC를 통하여 그 양과 분자량 분포등을 확인하였다. 역상 HPLC는 Cig 킬럼에서 이동상으로 50% 증류수와 50% 아세토나이트릴을 사용하여 분석하였다. 또한 GF-HPLC에서 BIOSEP-SEC-S3CXX)의 컬림을 사용하였으미, 이동상으로 50mM Tris HCl, pH 8.
  • 전처리 시료를 선택하여 이온 교환크로마토그래피를 수행하였다. 얻어진 분획들을 역상 HPLC와 GF, HPLC를 통하여 그 양과 분자량 분포등을 확인하였다.

대상 데이터

  • 본 연구에 사용된 재조합 대장균은 생명공학연구소 생물공정실에서 분주된 것으로서 LB 배지에(50ppm Amp') 배양하였다. 선택적인 배지에서 재조합된 대장균을 진탕배양(37C, 200rpm)하여 OD 0.
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