백화사설초에 함유되어 있는 oleanolic acid를 세포배양을 이용하여 생산하기 위한 연구를 수행하였다. Oleanolic acid를 생산하기 위해, 백화사설초의 캘러스와 현탁세포를 2,4-D 0.5 mg/L, kinetin 0.1 mg/L가 포함된 SH 배지에서 유도하였다. Oleanolic acid의 분석을 위해, Rexchrom S5-100-ODS column을 사용한 HPLC를 이용하였다. 분석 결과, oleanolic acid의 retention time은 12.6분 이었고, 그 양은 0.41 mg/g dry weight였다.
백화사설초에 함유되어 있는 oleanolic acid를 세포배양을 이용하여 생산하기 위한 연구를 수행하였다. Oleanolic acid를 생산하기 위해, 백화사설초의 캘러스와 현탁세포를 2,4-D 0.5 mg/L, kinetin 0.1 mg/L가 포함된 SH 배지에서 유도하였다. Oleanolic acid의 분석을 위해, Rexchrom S5-100-ODS column을 사용한 HPLC를 이용하였다. 분석 결과, oleanolic acid의 retention time은 12.6분 이었고, 그 양은 0.41 mg/g dry weight였다.
Oleanolic acid is a triterpenoid compound that exists in Oldenlandia diffusa. Recently, oleanolic acid has been noted for antitumor effect. Application of both plant growth regulators, 2,4-D and kinetin, was found to be essential for the induction of callus and suspension cells. Optimum induction co...
Oleanolic acid is a triterpenoid compound that exists in Oldenlandia diffusa. Recently, oleanolic acid has been noted for antitumor effect. Application of both plant growth regulators, 2,4-D and kinetin, was found to be essential for the induction of callus and suspension cells. Optimum induction condition for callus and suspension cells of Oldenlandia diffusa was determined to be 0.5 mg/L 2,4-D and 0.1 mg/L kinetin. Chromatographic separation of oleanolic acid from its derivatives was achieved using Rexchrom S5-100-ODS column. The retention time of oleanolic acid was 12.6 min and the specific content of oleanolic acid was 0.41 mg/g dry weight.
Oleanolic acid is a triterpenoid compound that exists in Oldenlandia diffusa. Recently, oleanolic acid has been noted for antitumor effect. Application of both plant growth regulators, 2,4-D and kinetin, was found to be essential for the induction of callus and suspension cells. Optimum induction condition for callus and suspension cells of Oldenlandia diffusa was determined to be 0.5 mg/L 2,4-D and 0.1 mg/L kinetin. Chromatographic separation of oleanolic acid from its derivatives was achieved using Rexchrom S5-100-ODS column. The retention time of oleanolic acid was 12.6 min and the specific content of oleanolic acid was 0.41 mg/g dry weight.
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제안 방법
Oleanolic acid가 소수성 물질이라는 것에 착안하여 역상 컬럼을 사용한 HPLC로 분석하였다. 분석에 사용한 컬럼으로는 Rexchrom S5-100-ODS colunm, Metasil 5卩 ODS column, Capcell Pak C18 column이 며, 이 중에 서 Rexchrom S5-100-ODS colunm의 분리 능이 가장 좋았다.
건조량을 측정한 현탁세포를 막자사발을 이용하여 분쇄한 후 추출에 사용하였다. 현탁 세포 1.
무균 조건 하에서 발아된 백화사설초의 잎에 상처를 낸 다음, 2, 4-D와 kinetin을 농도별로 첨가한 MS, SH 배지에서 캘러스를 유도하였다. 캘러스를 SH 배지에 넣고 25°C, 100 rpm, 암조건에서 배양하여 현탁세포를 유도하였다.
발아시켰다. 무균 조건하에서 발아시킨 백화사설초의 잎을 사용하여 0.5 mg/L 2, 4-D와, 0.1 mg/L kinetin이 첨가된 SH배지에서 캘러스를 유도하였다. 또한 동일한 배지를 사용하여 캘러스로부터 현탁세포를 유도하였다(Figure 1).
백화사설초의 캘러스를 유도하기 위하여 먼저, 백화사설초의 종자를 표면멸균을 하여 발아시켰다. 무균 조건하에서 발아시킨 백화사설초의 잎을 사용하여 0.
본 연구에서는 oleanolic acid의 생산을 위해 백화사설초의 현탁세포를 유도하여 배양하였고, oleanolic acid의 추출 및 분석 조건을 확립하였다.
세척한 종자를 1% NaOCl에 15분간 멸균 후' 멸균한 증류수로 3회 세척하였고, 생장조절제가 없는 MS, SH, White 배지에서 발아시켰다.
성능/효과
분석에 사용한 컬럼으로는 Rexchrom S5-100-ODS colunm, Metasil 5卩 ODS column, Capcell Pak C18 column이 며, 이 중에 서 Rexchrom S5-100-ODS colunm의 분리 능이 가장 좋았다. Photodiode array detector로 oleanolic acid의 최적 UV 파장을 검 색한 결고卜, 200 nm에서 최적의 UV 흡광도가 나타났다. 이동상은 acetonitrile과 water를 80:20으로 하고, 유속은 1.
9분에서 두 개의 피크가 나왔다. 따라서 백화사설초 현탁세포에서 oleanolic acid가 생산된다고 결론을 내렸다. 정량 분석 결과, 건조 세포 1 g 당 0.
분석에 사용한 컬럼으로는 Rexchrom S5-100-ODS colunm, Metasil 5卩 ODS column, Capcell Pak C18 column이 며, 이 중에 서 Rexchrom S5-100-ODS colunm의 분리 능이 가장 좋았다. Photodiode array detector로 oleanolic acid의 최적 UV 파장을 검 색한 결고卜, 200 nm에서 최적의 UV 흡광도가 나타났다.
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