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제안 방법
- 16S rRNA 염기배열의 유전자 분석 : 시험 균주의 genomic DNA를 분리한 후, 16S rRNA의 약 1,350 bp를 PCR로 증폭하여 정제했다. 이 PCR 산물의 염기배열을 분석하고 BLAST program/NCBI로 비교하였다.
- 1999년 여름철 고수온기에 경북, 경남 및 부산 인근의 몇몇 넙치 양식장에서 세균성 감염증으로 보이는 질병에 의해 넙치의 폐사가 발생하여 그 원인을 조사하였다. 감염어는 복부팽만, 장충혈, 장액삼출 및 간출혈 등의 특징적 증상을 보이면서 폐사하여, 에드워드병이나 연쇄구균증으로 의심되었다.
- 5% (v/v)]을 첨가한 후, luminometer로측정하였다. 또한 발광능에 관여하는 유전자를 조사하기 위하여 luciferase alpha subunit (LuxA) 유전자에 대한 PCR 반응을 시행하였다.
- 발광능 측정 및 luciferase 유전자 검사 : 1SB에서 24h 배양된 시험 균주를 단독 혹은 발광자극제인 n-decyl aldehyde [0.2 and 0.5% (v/v)]을 첨가한 후, luminometer로측정하였다. 또한 발광능에 관여하는 유전자를 조사하기 위하여 luciferase alpha subunit (LuxA) 유전자에 대한 PCR 반응을 시행하였다.
- 분리균은 1.5% NaCl 첨가 TSA에 접종한 후, 27℃, 24시간 배양하여 swarming하는 특성을 확인하였다. 감염어의 주요 증상은 심한 장충혈과 장액 삼출이었다.
- 생화학적 성상 검사 : 본 실험에 사용된 균주는 standard methods에 따라 제작된 생화학배지에 배양하여 판정하였고, TCBS와 SS plate에서의 발육성상을 관찰하였다.
- 약 1,350 bp를 PCR로 증폭하여 정제했다. 이 PCR 산물의 염기배열을 분석하고 BLAST program/NCBI로 비교하였다.
- 전자현미경적 형태 관찰 : Negative strain법으로 염색하여 TEM으로 관찰하였다.
- harueyi의 junior synonym으로 규정되어 분류학적으로 재정립되었다. 하지만 현재까지도 혼용되고 있는 경우가 많아, 본 연구에서는 2가지 type strain을 참조 균주로 사용하여, 분리 균주의 생화학 실험, 16S rRNA 염기배열 분석 등을 실시하고 그 특성을 비교 검토하였다.
대상 데이터
- 감염어의 주요 증상은 심한 장충혈과 장액 삼출이었다. V. harueyi type strain ATCC 14126과 V. carchariae type strain ATCC 35084는 참조 균주로 사용하였다.
- 병원균의 분리 및 시험 균주 : 실험에 사용한 7 균주는 1999년에서 2001년 사이에 경상도와 부산 일대의 넙치, 조피볼락, turbot, 감성돔, 숭어에서 분리되었다. 분리균은 1.
이론/모형
- 약제 감수성 시험 : 총 10가지의 약제에 대해 disk법으로 시험하였다.
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