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제안 방법
- 식약청 약초시험장에서 체취한 신이 식물체와 현재 시중에서 유통되고 있는 신이(한국산, 중국산) 한약재를 구입하여 액체질소로 얼린 후 유발에서 마쇄하고 Invisorb Spin Plant Mini DNA isolation kit(Invitek 社)를 이용하여 DNA를 추출하였다. agarose gel과 UV spectrophotometer를 이용하여 정량하였다.(1∼2 ng/㎕)
- 계통수를 그리기 위하여 Bioedit 프로그램으로 식물체의 염기서열들을 편집하였고, ClustalX 프로그램으로 염기서 열을 정렬하였다. phylogenetic tree는 MEGA4 프로그램을 사용하였으며, 종감별용 특이 프라이머는 Bioedit 프로그램으로 디자인 하였다.
- ▣ trnL-F 염기서열을 결정하기 위해, trnLF 영역의 universal primer인 c와 f 프라이머를 이용하여 PCR 증폭을 pre-denaturation 96°C, 2 min; denaturation 96°C, 30 sec;annealing 57°C, 30 sec; extension 72°C, 90 sec; 35 cycles 조건으로 수행하였고, ndhF 영역을 결정하기 위해, ndhF 영역의 universal primer인 F1과 R1 프라이머를 이용하여 PCR 증폭을 pre-denaturation 95°C, 3 min; denaturation 95°C, 30 sec; annealing 58°C, 30 sec; extension 72°C, 90 sec; 35 cycles 조건으로 수행하였다.
- ▣ 신이의 염기서열과 근연관계에 있는 식물들의 염기서열을 정렬하여 비교 분석한 후, 신이에만 특이적으로 반응할 수 있는 특이 프라이머 염기서열을 결정하였다.
- ▣ 얻어진 신이의 염기서열을 NCBI에서 Blast를 수행하였다. 계통수를 그리기 위하여 Bioedit 프로그램으로 식물체의 염기서열들을 편집하였고, ClustalX 프로그램으로 염기서 열을 정렬하였다.
- ▣ 얻어진 신이의 염기서열을 NCBI에서 Blast를 수행하였다. 계통수를 그리기 위하여 Bioedit 프로그램으로 식물체의 염기서열들을 편집하였고, ClustalX 프로그램으로 염기서 열을 정렬하였다. phylogenetic tree는 MEGA4 프로그램을 사용하였으며, 종감별용 특이 프라이머는 Bioedit 프로그램으로 디자인 하였다.
- 식약청 약초시험장에서 체취한 신이 식물체와 현재 시중에서 유통되고 있는 신이(한국산, 중국산) 한약재를 구입하여 액체질소로 얼린 후 유발에서 마쇄하고 Invisorb Spin Plant Mini DNA isolation kit(Invitek 社)를 이용하여 DNA를 추출하였다. agarose gel과 UV spectrophotometer를 이용하여 정량하였다.
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