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유황오리 추출물로부터 항종양활성 성분의 분리 및 정제 원문보기

한국축산식품학회 2004년도 정기총회 및 제33차 춘계 학술대회, 2004 May 28, 2004년, pp.373 - 375  

윤원호 (서일대학 식품가공과) ,  황진용 (건국대학교 축산가공학과) ,  김창한 (건국대학교 축산가공학과)

초록
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본 연구는 유황오리로부터 항종양 효과를 나타내는 물질을 용매추출과 각종 chromatography를 사용하여 분리 및 정제하였다. HPLC를 사용하여 정제한 항종양활성 성분의 수율은 유황오리 1Kg당 10mg이었다. HPLC를 이용하여 정제한 항종양활성 물질을 Clonogenic assay로 측정한 결과 $200{\mu}g/m{\ell}$의 농도에서 HEp-2, KB 및 SW-156에서 각각 26%, 28%및 30%의 생존율을 나타내어 항종양 효과가 나타났다. MTT assay에서는 $100{\mu}g/m{\ell}$의 농도는 Farrow, HEp-2 및 KB에 대해서 각각 56%, 58% 및 56%의 세포증식 억제 효과를 나타내었다. bovine normal kidney cell line인 MDBK는 $500{\mu}g/m{\ell}$, $200{\mu}g/m{\ell}$, $100{\mu}g/m{\ell}$에서 각각 48%, 34%, 28%로 증식억제 효과가 나타나 정상세포에 대한 세포독성은 강하지 않은 것으로 판단되어진다.

AI 본문요약
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* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.

제안 방법

  • Clranatography를 실시하여 4부분의 분획(분획 A, B, C 및 D)으로 모았다. 분획 C는 500 의농도에서 HEp는 91%의 세포증식억제 효과가 나타났으며, MDBK는 40%의 세포증식억제율을 나타내어 정상세포보다는 종양세포에 대하여 증식억제 효과가 나타나는 것으로 판단하였다.
  • 각 종양세포주마다의 접종 농도의 세포를 접종하여 24시간 동안 배양한 후, 종양세포 증식억제물질을 처 리하고 나서 48시간 동안 배양하였다. 배양이 끝나기 4시간 전에 MTT (0.
  • 노출 5~7일 후 배지를 제거한 후 phosphate buffer saline(PBS)로 세척하여 1% methylene blue/methanol로 종양세포주를 1시간 동안 고정시켰다. 다시 증류수로 세척하여 건조시켜 배양 5~7일 후 평판에서 504 이상의 크기를 나타내는 집락을 도립현미경(Model CK, Olympus, Japan)을 사용하여 계수하였다. 시료처리 평판과 비처리 평판에 나타난 집락의 수를 비교하여 생존율을 %로 나타내었으며, 생존율이 30%이하일 때를 종양세포에 대한 증식억제효과가 있는 것으로 판정하였다(Uesato et al.
  • (7,9) 유황오리에 관한 연구는 아직까지 국내는 물론 세계적으로도 미약한 실정이며 과학적으로 밝혀진 바가 거의 없다. 따라서 본 연구에서는 유황오리 추출물로부터 항종양 활성 물질을 용매추출법과 각종 크로마토그래피를 이용하여 분리, 정제하였으며(8,10) 정제한 물질을 MIT assay 와 Clonogenic assay를 통하여 항암효과를 확인하였다.*)
  • 처 리하고 나서 48시간 동안 배양하였다. 배양이 끝나기 4시간 전에 MTT (0.5mg/i㎖)용액 50㎕를 각각 첨가한 후 37℃에서 4시간 추가 배양하여 formazan 형성을 유도시키고, 추가 배양이 끝난 후 원심분리 후 생긴 blue formaari을 용해시키기 위하여 DMSO를 각 well당 100㎕씩 첨가한 후 plate shaker (Wallac, Finland)에서 20분간 교반한 후 각 well의 흡광도를 570nm에서 측정하였다.(1,4)
  • 5anx50cm, 63-200 mesh, Merck) 컬럼 크로마토그래피에서 CHCb MeOH (6:1 V/V)를 전개용매로 하여 10㎖씩 fraction collector# 이용하여 분취하였고, 검출은 UV detector(238 UVICORD SU, LKB)를 이용하여 254run에서 검출하였다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에서 활성이 인정된 &action을 HPLC용 메탄올에 녹인후 0.2/zm disposable syringe filter(Adventec MCF) 로 여과하여 HPLC 시료로 사용하였다. HPLQGILSON, UV/VIS-151) columne Bonda pak C18(10㎖ 19x300mm, Waters)을 이용하였고, mobile phase는 gradient로 methanol을 이용하였다.
  • 활성이 인정된 100% 메탄올 용출액을 감압농축한 후 물로 치환하여 에틸아세테이트로 3회 반복 추출하였다. 에틸아세테이트 분획물을 농축하여 실리카겔(3.5anx50cm, 63-200 mesh, Merck) 컬럼 크로마토그래피에서 CHCb MeOH (6:1 V/V)를 전개용매로 하여 10㎖씩 fraction collector# 이용하여 분취하였고, 검출은 UV detector(238 UVICORD SU, LKB)를 이용하여 254run에서 검출하였다. 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에서 활성이 인정된 &action을 HPLC용 메탄올에 녹인후 0.
  • 이후 증류수, 50% 메탄올, 100% 메탄올을 이용하여 순차적으로 용출하였다. 활성이 인정된 100% 메탄올 용출액을 감압농축한 후 물로 치환하여 에틸아세테이트로 3회 반복 추출하였다. 에틸아세테이트 분획물을 농축하여 실리카겔(3.

대상 데이터

  • HEp-2(human laiynx), SNU-5 (human stomach carcinoma), SW-156 (human kidney carcinoma), KB (human epidermoid of mouth carcinoma), SK-MES-1, Calu-3, A549 (human lung carcinoma), Farrow (human melanoma), WiDr (human colon carcinoma), SK-OV-3(human ovary), Raji(human lymphoma), 3LL(mouse lung)를 사용하였고, 세포독성을 측정하기 위한 정상세포주는 MDBK (bovine kidney)를 사용하였다.
  • 2/zm disposable syringe filter(Adventec MCF) 로 여과하여 HPLC 시료로 사용하였다. HPLQGILSON, UV/VIS-151) columne Bonda pak C18(10㎖ 19x300mm, Waters)을 이용하였고, mobile phase는 gradient로 methanol을 이용하였다.
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