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문제 정의
- 또한 MYF5(myogenic factor 5)는 근육세포 분화 및 발달에 중요한 역할을 담당하는 것으로 밝혀져 있다 (4). 본 연구는 생화학적 및 생물학적 기능으로 육우의 도체 특성 및 육질에 관여하는 것으로 알려져 있는 이들 기능성 후보 유전자들의 DNA 다형을 분석하고 한우도체형질 및 육질 관련 DNA 표지인자를 개발하고자 수행하였다.
제안 방법
- 3개 후보 유전자의 유전자형이 도체중(CW), 도체율(DP), 등 지방 두께(BFT), 배장근단면 적(㎛A) 및 근내지방도(MS)에 영향을 미치는 효과를 규명하기 위하여 이들 후보 유전자의 RFLP marker 유전자형과 각도체형질과의 관련성을 통계분석하였다(Table 2). Leptin 유전자는 등 지방 두께에 유의적인 영향(P< .
- Leptin, MYF5 및 H-FABP 3개 기능성 후보 유전자의 PCR-RFLP 분석을 위해 관련 유전자의 영역에 특정 염기서열을 포함하는 primer를 이용하여 증폭한 후 PCR 증폭산물을 Bgl Ⅱ, Taq I 및 Msp I 제한효소로 각각 절단하고 polyacrylamide gel을 이용하여 전기영동 후 제한효소 인지 부위의 존재 여부에 따라 검출된 RFLP 전기영동상은 Fig. 1, 2 및 3에 각각 제시한 바와 같다. Leptin 유전자는 Fig.
- PCR cyclee 최초 94℃에서 5분간 예비가열한 후 94P에서 1분, annealing온도는 58℃(leptin과 MYF5 유전자) 또는 55℃(H-FABP 유전자)에서 1분 그리고 72℃에서 1분간의 cycle을 총 35회 반복한 다음 마지막으로 72℃ 5분간 가열하고 DNA 증폭 과정을 완료하였다. PCR 종료 후 각 후보 유전자들의 RFLP marker 분석을 위해 각각에 해당하는 제한효소로 절단하고 12-13% polyacrylamide gel을 이용한 전기영동으로 분리한 다음 ethidium bromide 또는 silver 염색법으로 DNA band를 검출하고 각 검정 개체별 RFLP marker 유전자형을 판정하였다. 육질판정 등급에 따라 고급육과 저급육으로 구분하여 선발한 두 그룹 간에 각 후보 유전자의 대립 유전자 빈도의 차이는 chi-square 검정법으로 분석하였다.
- Leptin, MYF5 및 H-FABP 3개 후보 유전자들의 DNA 다 형성은 PCR-RFLP 기법을 이용하여 분석하였고 RFLP marker 분석을 위한 제한효소 및 primer의 염기서열은 Table 1과 같다. 즉, 각 후보 유전자의 PCR 증폭을 위하여 반응액은 template DNA 50-80ng, primer 각 0.5μm dNTP 각 200pM, 10 X PCR buffer 5μl 그리고 Taq DNA polymerase limit를 첨가하여 PCR 반응액을 총 20μl로 조정하였다. PCR cyclee 최초 94℃에서 5분간 예비가열한 후 94P에서 1분, annealing온도는 58℃(leptin과 MYF5 유전자) 또는 55℃(H-FABP 유전자)에서 1분 그리고 72℃에서 1분간의 cycle을 총 35회 반복한 다음 마지막으로 72℃ 5분간 가열하고 DNA 증폭 과정을 완료하였다.
대상 데이터
- 본 연구에서 사용한 공시 재료는 능력검정 프로그램에 등록되어 있고 도체성적을 보유한 한우종 215두를 대상으로 혈액을 채취하여 genomic DNA는 Miller 등(1998)⑸ 의 방법으로 분리하였고 TE bufferdOmM Tris-HCl pH 7.4, ImM EDTA)에 용해하여 template DNA 시료로 이용하였다. Leptin, MYF5 및 H-FABP 3개 후보 유전자들의 DNA 다 형성은 PCR-RFLP 기법을 이용하여 분석하였고 RFLP marker 분석을 위한 제한효소 및 primer의 염기서열은 Table 1과 같다.
데이터처리
- 육질판정 등급에 따라 고급육과 저급육으로 구분하여 선발한 두 그룹 간에 각 후보 유전자의 대립 유전자 빈도의 차이는 chi-square 검정법으로 분석하였다. 그리고도체특성 및 육질에 대한 RFLP marker의 영향을 추정하기 위하여 SAS® 8.1 Package/PC(SAS, 1990)를 이용하여 일반 선형모형(GLM)으로 통계 분석하였다.
- PCR 종료 후 각 후보 유전자들의 RFLP marker 분석을 위해 각각에 해당하는 제한효소로 절단하고 12-13% polyacrylamide gel을 이용한 전기영동으로 분리한 다음 ethidium bromide 또는 silver 염색법으로 DNA band를 검출하고 각 검정 개체별 RFLP marker 유전자형을 판정하였다. 육질판정 등급에 따라 고급육과 저급육으로 구분하여 선발한 두 그룹 간에 각 후보 유전자의 대립 유전자 빈도의 차이는 chi-square 검정법으로 분석하였다. 그리고도체특성 및 육질에 대한 RFLP marker의 영향을 추정하기 위하여 SAS® 8.
이론/모형
- 4, ImM EDTA)에 용해하여 template DNA 시료로 이용하였다. Leptin, MYF5 및 H-FABP 3개 후보 유전자들의 DNA 다 형성은 PCR-RFLP 기법을 이용하여 분석하였고 RFLP marker 분석을 위한 제한효소 및 primer의 염기서열은 Table 1과 같다. 즉, 각 후보 유전자의 PCR 증폭을 위하여 반응액은 template DNA 50-80ng, primer 각 0.
성능/효과
- 77cm 정도 더 높게 추정되었다. MYF5 유전자는 배장근 단면적에 유의적인 영향(P< .05)을 나타내 AA 형이 98.82 oF로 BB 형의 81.94 cm2 보다 배장근단면적이 약 16.88 cm2 더 넓은 것으로 분석되었다. 그러나, 이들 유전자는 근내지방도에 유의적인 영향을 미치지 않았으며 H-FABP 유전자는 어느 도체형질들과도 통계적 유의성이 인정되지 않았다.
- 따라서 한우에서 이들 후보 유전자들은 모두 A와 B 두 개의 대립 유전자에 의해 지배되는 AA, AB 및 BB 3종류의 RFLP marker 유전자형이 확인되었다. 검정 집단 내 각 후보 유전자들에 대한 대립 유전자 빈도를 추정한 결과 leptin 유전자는 A와 B 대립 유전자 빈도가 각각 0.57과 Q.43이었고 MYF5 유전자는 각각 0.61과 0.39 그리고 H-FABP 유전자는 각각 0.90과 0.10으로 분석되었다. 한편, 육질 등급에 따라 고급육과 저급육으로 분리선발한 두 그룹 간의 대립 유전자 출현빈도를 통계분석한 결과 leptin과 MYF5 유전자에서 각각 유의차(P<.
- 3)는 AA homo형의 경우 298bp와 251bp, BB homo형은 361bp와 251bp 그리고 AB hetero형은 이들 3개의 단편을 모두 공유하는 band 양상을 보였다. 따라서 한우에서 이들 후보 유전자들은 모두 A와 B 두 개의 대립 유전자에 의해 지배되는 AA, AB 및 BB 3종류의 RFLP marker 유전자형이 확인되었다. 검정 집단 내 각 후보 유전자들에 대한 대립 유전자 빈도를 추정한 결과 leptin 유전자는 A와 B 대립 유전자 빈도가 각각 0.
- 05)을 미치는 것으로 나타났다. 즉, BB 형이 1.43cm으로 AA형의 0.66cm에 비해 등 지방 두께가 약 0.77cm 정도 더 높게 추정되었다. MYF5 유전자는 배장근 단면적에 유의적인 영향(P< .
- 2)는 AA homo형은 445bp와 96bp, BB homo형은 352bp와 96bp 그리고 AB hetero형은 445, 352 및 96bp 3개 band 로 분리되었으나 96bp 크기의 작은 단편은 가시적으로 확인되지 않았다. 한편, H-FABP 유전자(Fig. 3)는 AA homo형의 경우 298bp와 251bp, BB homo형은 361bp와 251bp 그리고 AB hetero형은 이들 3개의 단편을 모두 공유하는 band 양상을 보였다. 따라서 한우에서 이들 후보 유전자들은 모두 A와 B 두 개의 대립 유전자에 의해 지배되는 AA, AB 및 BB 3종류의 RFLP marker 유전자형이 확인되었다.
- 10으로 분석되었다. 한편, 육질 등급에 따라 고급육과 저급육으로 분리선발한 두 그룹 간의 대립 유전자 출현빈도를 통계분석한 결과 leptin과 MYF5 유전자에서 각각 유의차(P<.05)가 인정되었다.
후속연구
- leptin 호르몬은 체지방 축적과 지방대사에 관여하며 MYF5는 골격근의 분화 및 발달에 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 근육 및 지방세포 분화에 관련된 이들 두 유전자의 PCR-RFLP 유전자형은 한우의 등 지방 두께와 배장근단면적이 높은 개체 선발을 위한 DNA marker로 활용할 수 있을 것으로 기대된다.
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