초록 ▼

본 발명은 세포의 현탁액으로부터 DNA를 추출하기 위한 방법 및 장치에 관한 것이다. 상기 방법에 의하면, 중공 막 여과수단을 사용하여 DNA를 세포용해후 세포 조직파편으로부터 분리한다. 세포 현탁액은 배양 세포 또는 혈액과 같은 체액중에 함유된 세포의 현탁액일 수 있다. 상기 방법이 이온-교환 단계를 포함하여 정제된 DNA를 제공할 수도 있다. 장치(1)는 세포가 그 안에서 배양될 수 있는 용기(2)를 포함한다. 용기는 그 말단부와 연결된 중공 막 여과수단(5)을 포함한다. 상기 기술된 방법은 게놈 DNA를 세포로부터

본 발명은 세포의 현탁액으로부터 DNA를 추출하기 위한 방법 및 장치에 관한 것이다. 상기 방법에 의하면, 중공 막 여과수단을 사용하여 DNA를 세포용해후 세포 조직파편으로부터 분리한다. 세포 현탁액은 배양 세포 또는 혈액과 같은 체액중에 함유된 세포의 현탁액일 수 있다. 상기 방법이 이온-교환 단계를 포함하여 정제된 DNA를 제공할 수도 있다. 장치(1)는 세포가 그 안에서 배양될 수 있는 용기(2)를 포함한다. 용기는 그 말단부와 연결된 중공 막 여과수단(5)을 포함한다. 상기 기술된 방법은 게놈 DNA를 세포로부터 추출하기 위해 사용될 수도 있지만 플라스미드 DNA를 미생물로부터 추출하는데 특히 적합하다.

대표청구항 ▼

세포 현탁액으로부터 DNA를 추출하는 방법으로서,(1) 중공 막 여과수단(hollow membrane filter)을 갖는 여과장치에 세포 현탁액을 공급하는 단계;(2) 필요한 경우, 상기 세포가 현탁되어 있는 배지를 여거하는 단계;(3) 상기 세포에 세포용해 용액을 가하고 상기 세포를 충분한 시간 동안 항온처리하여 이로부터 DNA를 방출시키는 단계; 및(4) 상기 DNA를 함유하는 세포용해 용액을 여거하는 단계를 포함하는 방법.제 1 항에 있어서,DNA가 게놈 DNA인 방법.제 1 항에 있어서,세포 현탁액이 동물 세포의 배양액인

세포 현탁액으로부터 DNA를 추출하는 방법으로서,(1) 중공 막 여과수단(hollow membrane filter)을 갖는 여과장치에 세포 현탁액을 공급하는 단계;(2) 필요한 경우, 상기 세포가 현탁되어 있는 배지를 여거하는 단계;(3) 상기 세포에 세포용해 용액을 가하고 상기 세포를 충분한 시간 동안 항온처리하여 이로부터 DNA를 방출시키는 단계; 및(4) 상기 DNA를 함유하는 세포용해 용액을 여거하는 단계를 포함하는 방법.제 1 항에 있어서,DNA가 게놈 DNA인 방법.제 1 항에 있어서,세포 현탁액이 동물 세포의 배양액인 방법.제 1 항에 있어서,세포 현탁액이 혈액, 림프, 정액 및 뇨로부터 선택된 체액인 방법.제 1 항에 있어서,단계(2)에서 중공 막 여과수단상에 수거된 세포를 세척하는 단계를 추가로 포함하는 방법.제 1 항에 있어서,세포용해 용액이 카오트로프제(chaotrophic agent)의 완충용액을 포함하는 방법.제 6 항에 있어서,카오트로프제가 구아니딘 하이드로클로라이드, 구아니딘 티오시아네이트, 요오드화나트륨 및 과염소산나트륨으로부터 선택된 방법.제 6 항에 있어서,세포용해 용액이 세제를 추가로 포함하는 방법.제 8 항에 있어서,세제가 트윈(Tween)TM 20, 트리톤(Triton) X-100TM, 노니뎃(Nonidet)TM P-40, 브리즈(Brij) 58TM, 나트륨 데옥시콜레이트 및 N-라우로일사르코신으로부터 선택된 방법.제 9 항에 있어서,세포용해 용액이 4M 구아니딘 티오시아네이트, 0.1M 나트륨 아세테이트(pH 5.0), 5% 트리톤 X-100TM 및 3M 우레아를 포함하는 방법.제 1 항에 있어서,세포용해 용액을 여거하는 단계가 상기 장치의 유출구에 진공을 걸어줌으로써 수행되는 방법.제 1 항에 있어서,단계(3) 및 단계(4)의 반복단계를 포함하는 방법.제 1 항에 있어서,세포가 상기 여과장치에서 배양되는 방법.제 13 항에 있어서,장치에 공기를 공급하는 단계를 포함하는 방법.제 14 항에 있어서,배양액에 중공 막 여과수단을 통해 공기를 공급하는 방법.세포 현탁액으로부터 DNA를 추출하는 방법으로서,(1) 중공 막 여과수단을 갖는 여과장치에 세포 현탁액을 공급하는 단계;(2) 필요한 경우, 상기 세포가 현탁되어 있는 배지를 여거하는 단계;(3) 상기 세포에 세포용해 용액을 가하고 상기 세포를 충분한 시간 동안 항온처리하여 이로부터 DNA를 방출시키는 단계;(4) 상기 DNA를 함유하는 세포용해 용액을 여거하는 단계;(5) 단계(4)로부터의 여과액을 이온-교환 배지에 가하는 단계;(6) 상기 이온-교환 배지를 제 1 용액으로 세척하여 DNA 이외의 물질을 용리하는 단계; 및 (7) 상기 이온-교환 배지를 제 2 용액으로 세척하여 상기 DNA를 용리하는 단계를 포함하는 방법.제 16 항에 있어서,이온-교환 배지가 디에틸아미노에틸기, 4급 아미노에틸기 또는 4급 암모늄기로 치환된 불활성 지지체인 방법.제 16 항에 있어서,이온-교환 배지가 실리카인 방법.제 16 항에 있어서,제 1 용액이 DNA가 불용성인 알콜 용액인 방법.제 16 항에 있어서,제 2 용액이 DNA가 가용성인 수용액인 방법.제 16 항에 있어서,여과장치가 이온-교환 배지를 포함하는 장치에 직접 연결되어 있는 방법.미생물 배양액으로부터 플라스미드 DNA를 추출하는 방법으로서,(1) 중공 막 여과수단을 갖는 여과장치에 플라스미드 DNA를 갖는 미생물 배양액을 공급하는 단계;(2) 필요한 경우, 배양 배지를 여거하는 단계;(3) 상기 미생물에 세포용해 용액을 가하고 상기 미생물을 충분한 시간 동안 항온처리하여 이로부터 플라스미드 DNA를 방출시키는 단계; 및 (4) 상기 플라스미드 DNA를 함유하는 세포용해 용액을 여거하는 단계를 포함하는 방법.제 22 항에 있어서,미생물 배양액이 박테리아 배양액인 방법.제 22 항에 있어서,미생물이 상기 장치에서 배양되는 방법.제 22 항에 있어서,단계(2)에서 중공 막 여과수단상에 수거한 세포를 세척하는 단계를 추가로 포함하는 방법.제 22 항에 있어서,세포용해 용액이 카오트로프제의 완충 용액을 포함하는 방법.제 26 항에 있어서,카오트로프제가 구아니딘 하이드로클로라이드, 구아니딘 티오시아네이트, 요오드화나트륨 및 과염소산나트륨으로부터 선택된 방법.제 26 항에 있어서, 세포용해 용액이 세제를 추가로 포함하는 방법.제 28 항에 있어서,세제가 트윈TM 200, 트리톤 X-100TM, 노니뎃TM P-40, 브리즈 58TM, 나트륨 데옥시콜레이트 및 N-라우로일사르코신으로부터 선택된 방법.제 29 항에 있어서,세포용해 용액이 6M 구아니딘 하이드로클로라이드, 0.75% 트리톤 X-100TM 및 200 mM HEPES(pH 6.5) 또는 100 mM 트리스·HCl(pH 6.4)를 포함하는 방법.제 22 항에 있어서,세포용해 용액을 여거하는 단계가 상기 장치의 유출구에 진공을 걸어줌으로써 수행되는 방법.제 22 항에 있어서,단계(3) 및 단계(4)의 반복단계를 포함하는 방법.제 22 항에 있어서,세포가 상기 여과장치에서 배양되는 방법.제 33 항에 있어서,상기 장치에 공기를 공급하는 단계를 포함하는 방법.제 34 항에 있어서,배양액에 상기 중공 막 여과수단을 통해 공기를 공급하는 방법.미생물 배양액으로부터 플라스미드 DNA를 추출하는 방법으로서,(1) 중공 막 여과수단을 갖는 여과장치에 플라스미드 DNA를 갖는 미생물 배양액을 공급하는 단계;(2) 필요한 경우, 배양 배지를 여거하는 단계;(3) 상기 미생물에 세포용해 용액을 가하고 상기 미생물을 충분한 시간 동안 항온처리하여 이로부터 플라스미드 DNA를 방출시키는 단계;(4) 상기 플라스미드 DNA를 함유하는 세포용해 용액을 여거하는 단계;(5) 단계(4)로부터의 여과액을 이온-교환 배지에 가하는 단계;(6) 상기 이온-교환 배지를 제 1 용액으로 세척하여 플라스미드 DNA 이외의 물질을 용리하는 단계; 및(7) 상기 이온-교환 배지를 제 2 용액으로 세척하여 상기 플라스미드 DNA를 용리하는 단계를 포함하는 방법.제 36 항에 있어서,이온-교환 배지가 디에틸아미노에틸기, 4급 아미노에틸기 또는 4급 암모늄기로 치환된 불활성 지지체인 방법.제 36 항에 있어서,이온-교환 배지가 실리카인 방법.제 36 항에 있어서,제 1 용액이 DNA가 불용성인 알콜 용액인 방법.제 36 항에 있어서,제 2 용액이 DNA가 가용성인 수용액인 방법.제 36 항에 있어서,여과장치가 이온-교환 배지를 포함하는 장치에 직접 연결되어 있는 방법.세포를 배양하고 이로부터 DNA를 추출하는데 사용하기 위한 장치로서,개방 말단부, 및 중공 막 여과수단을 포함하여 용기의 내부와 외부 사이의 유체 연통을 허용하는 폐쇄 말단부를 포함하는 용기; 및 상기 폐쇄 말단부를 밀봉하기 위한 이형가능한 밀봉부를 포함하는 장치.제 42 항에 있어서,용기가 약 2 mL의 체적을 갖는 길다란 실린더인 장치.제 43 항에 있어서,중공 막 여과수단이 용기 안에서 축방향으로 연장하는 단일 원통모양의 부재인 장치.제 42 항에 있어서,장치의 폐쇄 말단부를 밀봉하기 위한 밀봉부가 뜯도록 되어 있는 호일 밀봉부 또는 나사처럼 돌려서 끼우거나 마찰로 끼워 말단부를 밀봉하는 마개인 장치.제 42 항에 있어서,용기의 개방 말단부에 이형가능한 밀봉부를 추가로 포함하는 장치.제 46 항에 있어서,이형가능한 밀봉부가 기체 투과성 마개인 장치.제 42 항에 있어서,용기의 폐쇄 말단부가 이온-교환 배지를 포함하는 여과장치와 맞물리도록 설계된 장치.제 42 항에 있어서,장치 용기가 폴리프로필렌, 폴리스티렌 및 아크릴로부터 선택된 플라스틱 물질로부터 제조된 장치.세포를 배양하고 이로부터 DNA를 추출하는데 사용하기 위한 장치로서, 제 42 항에 따른 장치를 다수 포함하는 장치.세포를 배양하고 이로부터 DNA를 추출하는데 사용하기 위한 장치로서, 용기들이 각각 길다란 실린더인 제 42 항에 따른 장치를 선형 배열로 포함하는 장치.제 51 항에 있어서,표준 8 × 12 웰 마이크로-티터 플레이트(micro-titre plates)의 웰과 정렬되도록 구성된 8개의 용기를 포함하는 장치.제 52 항에 있어서,용기들이 부서지기 쉬운 웹에 의해 연결된 장치.제 52 항에 있어서,용기의 벽의 적어도 일부분이 인접한 용기의 벽의 적어도 일부분과 인접해 있는 장치.제 52 항에 있어서,상기 배열의 각각의 용기의 폐쇄 말단부가 이온-교환 배지를 포함하는 여과장치의 배열에 맞물리도록 설계된 장치.세포를 배양하고 이로부터 DNA를 추출하기 위한 키트(kit)로서, 제 42 항, 제 50 항 및 제 51 항중 어느 한 항으로부터 선택된 장치를 하나 이상 포함하는 키트.제 56 항에 있어서,DNA를 추출하기 위한 시약을 추가로 포함하는 키트.제 56 항에 있어서,제 50 항 또는 제 51 항에 따른 장치를 수용하도록 설계된 진공 매니폴드를 추가로 포함하는 키트.제 56 항에 있어서,DNA의 이온-교환 정제를 위한 장치를 추가로 포함하는 키트.제 59 항에 있어서,이온-교환 장치가 제 50 항 또는 제 51 항에 따른 장치를 수용하도록 설계된 배열을 포함하는 키트.제 56 항에 있어서,제 50 항 또는 제 51 항에 따른 장치를 직접 또는 제 60 항에 따른 일련의 이온-교환 장치와 함께 수용하도록 설계된 진공 매니폴드를 추가로 포함하는 키트.제 61 항에 있어서,진공 매니폴드가 표준 8 × 12 웰 마이크로-티터 플레이트를 수용하도록 설계된 키트.