초록 ▼

본 발명은 재조합 대장균으로부터 인간 성장 호르몬을 별도의 활성화 공정 없이 변형체를 포함하지 않으면서 고수율 및 고순도로 정제하는 방법에 관한 것으로, (i) 인간 성장 호르몬을 페리플라즘내로 발현하는 재조합 대장균을 배양한 후 원심분리하여 세포 침전물을 얻고, (ii) 상기 세포 침전물에 수크로즈가 함유된 완충 용액을 가한 후 원심분리하여 세포 침전물을 얻고 이 세포 침전물에 증류수를 가한 후 원심분리하여 페리플라즘 단백질을 포함하는 상등액을 얻고, (iii) 상기 (ii)에서 얻은 상등액을 산 침전시켜 상등액을 분리한 후, (

본 발명은 재조합 대장균으로부터 인간 성장 호르몬을 별도의 활성화 공정 없이 변형체를 포함하지 않으면서 고수율 및 고순도로 정제하는 방법에 관한 것으로, (i) 인간 성장 호르몬을 페리플라즘내로 발현하는 재조합 대장균을 배양한 후 원심분리하여 세포 침전물을 얻고, (ii) 상기 세포 침전물에 수크로즈가 함유된 완충 용액을 가한 후 원심분리하여 세포 침전물을 얻고 이 세포 침전물에 증류수를 가한 후 원심분리하여 페리플라즘 단백질을 포함하는 상등액을 얻고, (iii) 상기 (ii)에서 얻은 상등액을 산 침전시켜 상등액을 분리한 후, (iv) 상기 (iii)에서 얻은 상등액으로 양이온 교환 크로마토그래피, 음이온 교환 크로마토그래피 및 소수성 상호작용 크로마토그래피를 차례로 수행하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

대표청구항 ▼

(i) 인간 성장 호르몬을 페리플라즘내로 발현하는 재조합 대장균을 배양한 후 원심분리하여 세포 침전물을 얻고, (ii) 상기 세포 침전물에 수크로즈가 함유된 완충 용액을 가한 후 원심분리하여 세포 침전물을 얻고 이 세포 침전물에 증류수를 가한 후 원심분리하여 페리플라즘 단백질을 포함하는 상등액을 얻고, (iii) 상기 (ii)에서 얻은 상등액을 산 침전시켜 상등액을 분리한 후, (iv) 상기 (iii)에서 얻은 상등액으로 양이온 교환 크로마토그래피, 음이온 교환 크로마토그래피 및 소수성 상호작용 크로마토그래피를 차례로 수행하는 단계

(i) 인간 성장 호르몬을 페리플라즘내로 발현하는 재조합 대장균을 배양한 후 원심분리하여 세포 침전물을 얻고, (ii) 상기 세포 침전물에 수크로즈가 함유된 완충 용액을 가한 후 원심분리하여 세포 침전물을 얻고 이 세포 침전물에 증류수를 가한 후 원심분리하여 페리플라즘 단백질을 포함하는 상등액을 얻고, (iii) 상기 (ii)에서 얻은 상등액을 산 침전시켜 상등액을 분리한 후, (iv) 상기 (iii)에서 얻은 상등액으로 양이온 교환 크로마토그래피, 음이온 교환 크로마토그래피 및 소수성 상호작용 크로마토그래피를 차례로 수행하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 인간 성장 호르몬의 정제 방법. 제 1 항에 있어서,상기 재조합 대장균이 HM10011(KCCM-10137) 또는 HM10012(KCCM-10138)인 방법. 제 1 항에 있어서, 상기 양이온 교환 크로마토그래피에서 SP-세파로스 칼럼을 사용하는 방법. 제 3 항에 있어서,상기 양이온 교환 크로마토그래피가 pH를 5.0 내지 6.0의 범위로 유지하면서 아세트산이 포함된 완충용액으로 용출하여 수행되는 것인 방법. 제 1 항에 있어서, 상기 음이온 교환 크로마토그래피에서 DEAE-세파로스 칼럼을 사용하는 방법. 제 5 항에 있어서, 상기 음이온 교환 크로마토그래피가 pH를 5.5 내지 6.6의 범위로 유지하면서 아세트산이 포함된 완충용액으로 용출하여 수행되는 것인 방법. 제 1 항에 있어서, 상기 소수성 상호작용 크로마토그래피에서 페닐-세파로스 칼럼을 사용하는 방법. 제 7 항에 있어서, 상기 소수성 상호작용 크로마토그래피가 pH를 7.5 내지 8.5의 범위로 유지하면서 수행되는 것인 방법.