초록 ▼

본 발명은 재조합 독감 바이러스(INFLUENZA VIRUS)를 제조하는 과정 중 프라이머(PRIMER)와 주형간의 결합특이성에 따른 멀티플렉스 역전사 중합효소 연쇄반응(MULTIPLEX RT-PCR)의 차이를 이용하여 재조합 독감 바이러스(INFLUENZA VIRUS)의 유전자를 스크리닝하는 방법에 관한 발명이다. 보다 상세하게는, 약독화 독감 바이러스주의 유전자와 독성 바이러스주의 대응하는 유전자의 염기서열 중 상호간의 변이가 많은 부분에 해당하는 프라이머를 제작하고 하나의 반응에서 2 내지 3개의 중합효소 연쇄반응이 동시에

본 발명은 재조합 독감 바이러스(INFLUENZA VIRUS)를 제조하는 과정 중 프라이머(PRIMER)와 주형간의 결합특이성에 따른 멀티플렉스 역전사 중합효소 연쇄반응(MULTIPLEX RT-PCR)의 차이를 이용하여 재조합 독감 바이러스(INFLUENZA VIRUS)의 유전자를 스크리닝하는 방법에 관한 발명이다. 보다 상세하게는, 약독화 독감 바이러스주의 유전자와 독성 바이러스주의 대응하는 유전자의 염기서열 중 상호간의 변이가 많은 부분에 해당하는 프라이머를 제작하고 하나의 반응에서 2 내지 3개의 중합효소 연쇄반응이 동시에 진행되도록 함으로써 약독화 독감 바이러스주의 6개의 유전자와 독성바이러스의 2개의 유전자를 갖는 6:2 재조합 바이러스를 효과적으로 스크리닝하는 방법에 관한 발명이다.

대표청구항 ▼

독감 바이러스의 8개 유전자 RNA 게놈 절편에 대하여 약독화 공여 바이러스 게놈 내부 유전자에 대해서만 PCR 산물을 생성하는 PCR 프라이머 세트를 디자인하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, PCR을 이용하여 독감 재조합 바이러스를 스크리닝하는 방법.제1항에 있어서, 스크리닝 방법이독감 바이러스의 8개 유전자 RNA 게놈 절편으로부터 약독화 공여 바이러스주 게놈에 대해서는 PCR 산물을 생성하지만 독성 바이러스 게놈에 대해서는 PCR 산물을 생성하지 않는 PCR 프라이머 세트를 디자인하는 단계, 독성 바이러스와 약독화 공여

독감 바이러스의 8개 유전자 RNA 게놈 절편에 대하여 약독화 공여 바이러스 게놈 내부 유전자에 대해서만 PCR 산물을 생성하는 PCR 프라이머 세트를 디자인하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, PCR을 이용하여 독감 재조합 바이러스를 스크리닝하는 방법.제1항에 있어서, 스크리닝 방법이독감 바이러스의 8개 유전자 RNA 게놈 절편으로부터 약독화 공여 바이러스주 게놈에 대해서는 PCR 산물을 생성하지만 독성 바이러스 게놈에 대해서는 PCR 산물을 생성하지 않는 PCR 프라이머 세트를 디자인하는 단계, 독성 바이러스와 약독화 공여 바이러스를 수정란에 감염시켜 두 종의 바이러스의 무작위 재조합을 통한 재조합 바이러스를 생산하는 단계,재조합 바이러스 RNA 게놈의 역전사를 통해 cDNA를 수득하는 단계,상기 재조합 바이러스의 cDNA와 함께, 상기 8개 유전자 RNA 절편별로 한 가지 프라이머 세트를 각각의 PCR 산물들이 구별될 수 있는 크기를 고려하여 선택한 후 8개 유전자의 PCR 반응을 수행하는 단계, 약독화 공여 바이러스에 특이적인 프라이머 세트에 의해 6개 내부 유전자(internal genes, PB2, PB1, PA, NP, M, NS) RNA 절편은 증폭되지만 외피 단백질(HA 및 NA)을 암호화하는 2개 RNA 절편은 증폭되지 않는 재조합 바이러스를 선택하는 단계를 포함함을 특징으로 하는, 공여 바이러스와 독성 바이러스간의 6:2 재조합 바이러스를 스크리닝하는 방법.제1항 또는 제2항에 있어서, 약독화 공여 바이러스가 HTCA-A101 균주(KCTC 0400 BP)인 방법.제1항 또는 제2항에 있어서, 8개 유전자에 대해 3 내지 4개의 튜브에서 2 내지 3개씩의 PCR 반응을 동시에 수행함을 특징으로 하는 멀틱플렉스 PCR을 사용하여 독감 재조합 바이러스를 스크리닝하는 방법.약독화 공여 바이러스 HTCA-A101에 특이적으로 결합하는 표 1에서 제시된 서열을 갖는 프라이머 세트.