초록 ▼

본 발명은 거짓양성반응 방지 효과가 우수한 흰반점바이러스 검출용 PCR 양성대조구 제조 방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 (1) 암피실린 내성 유전자(ampicillin resistance gene) 및 파지 f1 영역 유전자(phage f1 region gene)를 포함하는 pGEM-T easy vector DNA를 주형으로 하여 네스티드 중합효소 연쇄반응(nested polymerase chain reaction, Nested-PCR)을 수행하는 단계 및 (2) 단계 (1)를 통해 증폭된 PCR 산물을 pGEM-T eas

본 발명은 거짓양성반응 방지 효과가 우수한 흰반점바이러스 검출용 PCR 양성대조구 제조 방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 (1) 암피실린 내성 유전자(ampicillin resistance gene) 및 파지 f1 영역 유전자(phage f1 region gene)를 포함하는 pGEM-T easy vector DNA를 주형으로 하여 네스티드 중합효소 연쇄반응(nested polymerase chain reaction, Nested-PCR)을 수행하는 단계 및 (2) 단계 (1)를 통해 증폭된 PCR 산물을 pGEM-T easy vector(Promega, USA)에 클로닝하여 키메릭 플라스미드(chimeric plasmid)를 제조하는 단계를 포함하는 것을 그 구성상의 특징으로 한다.본 발명에서 제안하고 있는 거짓양성반응 방지 효과가 우수한 흰반점바이러스 검출용 PCR 양성대조구 제조 방법에 따르면, 암피실린 내성 유전자(ampicillin resistance gene) 및 파지 f1 영역 유전자(phage f1 region gene)를 포함하는 pGEM-T easy vector DNA를 주형으로 하여 네스티드 중합효소 연쇄반응(nested polymerase chain reaction, Nested-PCR)을 수행하고, 이를 통해 증폭된 PCR 산물을 각각 pGEM-T easy vector(Promega, USA)에 클로닝하여 키메릭 플라스미드(chimeric plasmid)를 제조함으로써, PCR 오염으로 인한 거짓양성 반응을 구분함으로서, 거짓양성 반응의 발생을 최소화하여 흰반점바이러스병의 정확한 진단이 가능하다.

대표청구항 ▼

(1) 암피실린 내성 유전자(ampicillin resistance gene) 및 파지 f1 영역 유전자(phage f1 region gene)를 포함하는 pGEM-T easy vector DNA를 주형으로 하여 네스티드 중합효소 연쇄반응(nested polymerase chain reaction, Nested-PCR)을 수행하는 단계; 및(2) 상기 단계 (1)을 통해 증폭된 PCR 산물을 pGEM-T easy vector(Promega, USA)에 클로닝하여 키메릭 플라스미드(chimeric plasmid)를 제조하는 단계를 포

(1) 암피실린 내성 유전자(ampicillin resistance gene) 및 파지 f1 영역 유전자(phage f1 region gene)를 포함하는 pGEM-T easy vector DNA를 주형으로 하여 네스티드 중합효소 연쇄반응(nested polymerase chain reaction, Nested-PCR)을 수행하는 단계; 및(2) 상기 단계 (1)을 통해 증폭된 PCR 산물을 pGEM-T easy vector(Promega, USA)에 클로닝하여 키메릭 플라스미드(chimeric plasmid)를 제조하는 단계를 포함하되,상기 단계 (1)은(1-1) 서열번호 1에 기재된 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 2의 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머를 포함하는 제1 프라이머 세트를 이용하여 제1 PCR 산물을 증폭하는 단계; 및(1-2) 서열번호 3에 기재된 염기서열을 포함하는 정방향 프라이머 및 서열번호 4의 염기서열을 포함하는 역방향 프라이머를 포함하는 제2 프라이머 세트를 이용하여 제2 PCR 산물을 증폭하는 단계를 포함하고,상기 단계 (2)는,(2-1) 제1 PCR 산물을 상기 pGEM-T easy vector(Promega, USA)에 클로닝하여 제1 키메릭 플라스미드를 제조하는 단계; 및(2-2) 제2 PCR 산물을 상기 pGEM-T easy vector(Promega, USA)에 클로닝하여 제2 키메릭 플라스미드를 제조하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 흰반점바이러스 검출용 PCR 양성대조구 제조 방법.