초록

본 발명은 중간엽 줄기세포를 분리하는 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로 세포 배양용기를 이용한 층분리배양법에 의해 중간엽 분리세포를 분리하는 방법에 관한 것이다.　 본 발명의 분리방법은 사람 골수에서 중간엽 줄기세포를 간편하고, 경제적이며, 오염 가능성을 최대한 줄일 수 있는 방법으로 임상시험 및 세포치료제 생산에 이용될 수 있다.

대표청구항 ▼

1) 개체로부터 골수를 채취하는 단계| 2) 채취한 골수를 배양하는 단계| 3) 단계 2)의 상층액만 새로운 용기로 이동시켜 배양하는 단계| 4) 단계 3)의 상층액만을 분리하여 코팅제가 처리된 배양용기 또는 코팅제가 처리되지 않은 배양용기에서 반복 배양하는 단계를 포함하는 중간엽 줄기세포의 층분리배양법. 　　　　　　　　제 1항에 있어서, 단계 1의 개체는 사람, 소, 돼지, 말, 개, 염소, 토끼 및 쥐 로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포의 층분리배양법.제 1항에 있어서, 단계 2 및 3의 배

1) 개체로부터 골수를 채취하는 단계| 2) 채취한 골수를 배양하는 단계| 3) 단계 2)의 상층액만 새로운 용기로 이동시켜 배양하는 단계| 4) 단계 3)의 상층액만을 분리하여 코팅제가 처리된 배양용기 또는 코팅제가 처리되지 않은 배양용기에서 반복 배양하는 단계를 포함하는 중간엽 줄기세포의 층분리배양법. 　　　　　　　　제 1항에 있어서, 단계 1의 개체는 사람, 소, 돼지, 말, 개, 염소, 토끼 및 쥐 로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포의 층분리배양법.제 1항에 있어서, 단계 2 및 3의 배양조건은 5%의 CO2 농도인 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포의 층분리배양법.제 1항에 있어서, 단계 4의　반복배양은　37℃에서 1시간 내지 3시간 배양 후 37℃에서 12 내지 36 시간 배양을 2 내지 3회 반복하고 이어서 37℃에서 24 내지 72 시간으로 배양하며, 매번 상층액을 새로운 배양용기로 이동시키는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포의 층분리배양법.제 1항에 있어서, 단계 4의 반복 배양시에 교원질(collagen), 폴리-리신(poly-lysine), 피브리노겐(fibrinogen) 또는 젤라틴(gelatin)이 코팅된 배양용기를 사용하는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포의 층분리배양법.제 1항의 층분리배양법에 의해 분리된 중간엽 줄기세포.제 6항에 있어서, 분리된 중간엽 줄기세포는 배양에 의해 연골조직, 골조직, 지방조직, 신경조직, 근육조직 또는 인대조직으로 분화되는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포.제 6항에 있어서, 분리된 중간엽 줄기세포는 배양에 의해 연골, 뼈, 지방세포, 신경세포, 근육세포 또는 인대세포로 분화되는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포.제 6항에 있어서, 분리된 중간엽 줄기세포는 CD29, CD44, CD105, 세포표면 항체들을 발현하고 CD34, HLA-DR 세포표면 항체들은 발현하지 않는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포.제 6항에 있어서, 분리된 중간엽 줄기세포는 골수이식 시 면역거부반응을 감소시키기 위해 사용하는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포.제 7항에 있어서, 상기 분화된 세포는 손상된 조직의 재생을 위해 사용되는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포.