초록 ▼

본 발명은 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질, 그 융합 단백질의 유전자가 삽입된 재조합 벡터, 및 그 재조합 벡터로 형질전환된 동물세포에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질을 이용하여 랭크(RANK) 단백질과 랭클(RANKL) 단백질의 상호작용을 분석하는 방법에 관한 것이다.본 발명에 따르면, 상기 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질을 사용하여 랭크 단백질과 랭클 단백질의 상호작용에 관하여 유세포 분석기를 통하여 간단하게 분석할 수 있다. 또한, 상기 분석방

본 발명은 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질, 그 융합 단백질의 유전자가 삽입된 재조합 벡터, 및 그 재조합 벡터로 형질전환된 동물세포에 관한 것이다. 또한 본 발명은 상기 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질을 이용하여 랭크(RANK) 단백질과 랭클(RANKL) 단백질의 상호작용을 분석하는 방법에 관한 것이다.본 발명에 따르면, 상기 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질을 사용하여 랭크 단백질과 랭클 단백질의 상호작용에 관하여 유세포 분석기를 통하여 간단하게 분석할 수 있다. 또한, 상기 분석방법을 이용하여 골흡수억제, 골형성증진, 골다공증, 골관절염, 다발성골수종, 과칼슘혈증 등 각종 골대사 이상으로 인한 질환의 치료제 개발에 있어서, 간단한 assay 를 통해 screening 을 수행할 수 있다.

대표청구항 ▼

랭크 (RANK, receptor activator of NF-kB) 단백질의 랭클 (RANKL, receptor activator of NF-kB ligand) 결합부위의 N’말단에 리더 펩타이드가 연결되고, 상기 랭크 (RANK, receptor activator of NF-kB) 단백질의 랭클 (RANKL, receptor activator of NF-kB ligand) 결합부위의 C' 부위에 인간 이뮤노글루블린 G 1 불변영역부위 (human Ig G1 Fc region) 가 연결된 것을 특징으로 하는 랭크-이뮤노글루블린(R

랭크 (RANK, receptor activator of NF-kB) 단백질의 랭클 (RANKL, receptor activator of NF-kB ligand) 결합부위의 N’말단에 리더 펩타이드가 연결되고, 상기 랭크 (RANK, receptor activator of NF-kB) 단백질의 랭클 (RANKL, receptor activator of NF-kB ligand) 결합부위의 C' 부위에 인간 이뮤노글루블린 G 1 불변영역부위 (human Ig G1 Fc region) 가 연결된 것을 특징으로 하는 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질.제1항에 있어서, 상기 랭크 (RANK, receptor activator of NF-kB) 단백질의 랭클 (RANKL, receptor activator of NF-kB ligand) 결합부위는 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질.제1항에 있어서, 상기 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질은 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질.제1항의 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질을 코딩하는 DNA를 포함하는 동물세포 발현 벡터.제4항에 있어서, 상기 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질을 코딩하는 DNA는 서열번호 3의 염기서열을 갖는 것을 특징으로 하는 동물세포 발현 벡터.제4항에 있어서, 상기 동물세포 발현벡터는 도 6의 개열지도를 갖는 재조합벡터(RANK-Ig/pLNCX2)인 것을 특징으로 하는 동물세포 발현벡터.제4항에 따른 동물세포 발현벡터로 형질전환된 동물세포.제7항에 있어서, 상기 동물세포는 CHO 세포인 것을 특징으로 하는 형질 전환된 동물세포. 서열번호 4의 랭클(RANKL, receptor activator of NF-kB ligand) 단백질을 코딩하는 뉴클레오타이드를 포함하는 도 2의 개열지도를 갖는 재조합 벡터.제9항에 따른 재조합 벡터로 형질전환된 CHO 세포.다음의 단계를 포함하는 랭크 단백질과 랭클 단백질의 상호작용을 분석하는 방법:(a) 제10항에 따른 랭클 단백질을 발현하는 동물세포를 준비하는 단계;(b) 제1항에 따른 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질에 형광신호를 표지하는 단계;(c) 상기 (a)단계의 랭클 단백질을 발현하는 동물세포와 상기 (b)의 형광신호로 표지된 랭크-이뮤노글루블린(RANK-Ig) 융합 단백질을 결합시키는 단계; 및(d) 상기 (c)의 결합에 의한 형광 강도를 유세포 분석기로 측정하는 단계.다음의 단계를 포함하는 랭크 단백질과 랭클 단백질의 상호작용 저해제의 분석방법:(a) 랭클 단백질을 과발현하는 동물세포에 임의의 약제를 처리하는 단계;(b) 상기 동물세포에 제1항의 방법으로 생산되고, FITC로 표지된 유전자 재조합 랭크 단백질을 처리하는 단계; 및(c) 약제를 처리하지 않은 대조군과 비교하여 유세포 분석의 형광 강도가 감소하였는지를 측정하여 랭클 단백질과 상호작용이 감소되었는지 여부를 결정하는 단계.다음의 단계를 포함하는 랭크 단백질과 랭클 단백질의 상호작용 촉진제의 분석방법:(a) 랭클 단백질을 과발현하는 동물세포에 임의의 약제를 처리하는 단계;(b) 상기 동물세포에 제1항의 방법으로 생산되고, FITC로 표지된 유전자 재조합 랭크 단백질을 처리하는 단계; 및(c) 약제를 처리하지 않은 대조군과 비교하여 유세포 분석의 형광 강도가 증가하였는지를 측정하여 랭클 단백질과 상호작용이 증가하였는지 여부를 결정하는 단계.