IPC분류정보
국가/구분 |
한국(KR)/공개특허
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국제특허분류(IPC8판) |
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출원번호 |
10-2007-7000516
(2007-01-08)
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공개번호 |
10-2007-0091098
(2007-09-07)
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국제출원번호 |
PCT/AU2005/000796
(2005-06-06)
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국제공개번호 |
WO2005121165
(2005-12-22)
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번역문제출일자 |
2007-01-08
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DOI |
http://doi.org/10.8080/1020077000516
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발명자
/ 주소 |
- 리메 알란
/ 덴마크, 비르케로드, 디케이-****, 퓨르소바켄 **
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출원인 / 주소 |
- 에이브이티 플라즈마 리미티드 / 오스트레일리아, 뉴 사우스 웨일즈 ****, 시드니, 그로스브너 스트리트 **
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대리인 / 주소 |
-
정홍식
(Jeong, Hong Sik)
-
서울 서초구 서초*동 ****-* 대림빌딩 *층 나우특허법률사무소
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심사진행상태 |
취하(심사미청구) |
법적상태 |
취하 |
초록
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제 1 목적에서 본 발명은 단백질을 포함하는 용액에서 단백질을 분리하는 방법에 대한 것이고, 상기 용액은 조혈장, 혈청, 혈장(plasma)으로부터 유도된 크리오수퍼네이턴트(cryosupernatant), 분할혈장(fractionated human plasma), 혈장(plasma)으로부터 유도된 크리오프리시피테이트(cryoprecipitate) 및 재조합형 배양액(recombinant broths)로 구성된 그룹 중에서 선택된다. 상기 방법은 상기 M은 매트릭스 백본이고, S는 선택적인 스페이서 암이며, L은 메르캅톤이코틴산인 리
제 1 목적에서 본 발명은 단백질을 포함하는 용액에서 단백질을 분리하는 방법에 대한 것이고, 상기 용액은 조혈장, 혈청, 혈장(plasma)으로부터 유도된 크리오수퍼네이턴트(cryosupernatant), 분할혈장(fractionated human plasma), 혈장(plasma)으로부터 유도된 크리오프리시피테이트(cryoprecipitate) 및 재조합형 배양액(recombinant broths)로 구성된 그룹 중에서 선택된다. 상기 방법은 상기 M은 매트릭스 백본이고, S는 선택적인 스페이서 암이며, L은 메르캅톤이코틴산인 리간드인 식 M-S-L을 갖는 고체 분리 매질을 제공하는 단계, 적어도 하나의 단백질이 가역적으로 상기 고체 분리 매질에 결합하도록 상기 단백질에 상기 고체 분리 매질을 접촉시키는 단계에 관여된다. 적어도 하나의 용출 단계가 상기 고체 분리 매질로부터 적어도 하나의 단백질 단편을 선택적으로 용리하도록 수행된다. 다른 목적에서, 본 발명은 인자 VIII 및/또는 인자 IX을 분리하는 방법에 대한 것이다.
대표청구항
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단백질을 포함하는 용액으로부터 단백질을 분리하는 방법에서, 상기 용액은 조혈장(CRUDE BLOOD PLASMA), 혈청, 혈장(PLASMA)으로부터 유도된 크리오수퍼네이턴트(CRYOSUPERNATANT), 분할혈장(FRACTIONATED HUMAN PLASMA), 혈장(PLASMA)으로부터 유도된 크리오프리시피테이트(CRYOPRECIPITATE) 및 재조합형 배양액(RECOMBINANT BROTHS)로 구성된 그룹 중에서 선택되고, 상기 방법은,(1) M-S-L을 갖는 고체 분리 매질(MEDIUM)을 제공하는 단계; 상기 M은 매
단백질을 포함하는 용액으로부터 단백질을 분리하는 방법에서, 상기 용액은 조혈장(CRUDE BLOOD PLASMA), 혈청, 혈장(PLASMA)으로부터 유도된 크리오수퍼네이턴트(CRYOSUPERNATANT), 분할혈장(FRACTIONATED HUMAN PLASMA), 혈장(PLASMA)으로부터 유도된 크리오프리시피테이트(CRYOPRECIPITATE) 및 재조합형 배양액(RECOMBINANT BROTHS)로 구성된 그룹 중에서 선택되고, 상기 방법은,(1) M-S-L을 갖는 고체 분리 매질(MEDIUM)을 제공하는 단계; 상기 M은 매트릭스 백본(MATRIX BACKBONE)이고, S는 선택적인 스페이서 암(SPACER ARM) 및 L은 메르캅톤이코틴산(MERCAPTONICOTINIC ACID)인 리간드이고,(2) 상기 단백질의 적어도 하나가 상기 고체 분리 매질과 가역적으로 결합하도록 상기 용액을 상기 고체 분리 매질과 접촉시키는 단계;(3) 상기 고체 분리 매질로부터 적어도 하나의 단백질 단편(FRACTION)을 선택적으로 용리하는 적어도 하나의 용리(ELUTION) 단계를 수행하는 단계;를 포함하는 단백질을 포함하는 용액에서 단백질을 분리하는 방법.제 1항에 있어서, 상기 용액은 조혈장인 방법.제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 M은 고농도 수지인 방법.제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 L은 2-메르캅톤이코틴산인 방법.제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 S는 에폭시기를 포함하는 화합물인 방법.제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 적어도 하나의 단백질 단편은 IGG, IGA, IGM, IGD 또는 IGE, 트랜스페린(TRANSFERRIN), 피브리노겐(FIBRINOGEN) 또는 이들의 유도체와 같은 면역 글로불린, 예를 들면, 안티트롬빈 III(ANTITHROMBIN III), 프로 혈액 응고 단백질(BLOOD PRO-COAGULATION PROTEIN), 항 혈액 응고 단백질(BLOOD ANTI-COAGULATION PROTEIN), 시토킨(CYTOKINE), 성장 인자(GROWTH FACTOR), 알부민(ALBUMIN) 또는 이들의 유도체와 같은 안티트롬빈(ANTITROMBIN)과 같은 플라즈마 프로테아제 억제제(PLASMA PROTEASE INHIBITOR), 혈전 용해제(THROMBOLYTIC AGENT), 항 신생 혈관 형성 단백질(ANTI-ANGIOGENIC PROTEIN), 인슐린(INSULIN) 또는 이들의 유도체, Α-1-안티트립신(Α-1-ANTITRYPSIN), Α-2-안티플라스민(Α-2-ANTIPLASMIN) 또는 이들의 유도체와 같은 Α-1-단백질 가수분해효소 억제제(Α-1 -PROTEINASE INHIBITOR) 또는 이들의 유도체, C-1 분해효소 억제제 (C-1 ESTERASE INHIBITOR), 아포지단백질(APOLIPOPROTEIN), 고밀도지단백(HDL), 피브로넥틴(FIBRONECTIN) 또는 이들의 유도체, 베타-2-글리코프로테인 I(BETA-2-GLYCOPROTEIN I), 플라스미노겐(PLASMINOGEN), 플라스민(PLASMIN), 플라스미노겐 활성제(PLASMINOGEN ACTIVATOR), 플라스미노겐 억제제(PLASMINOGEN INHIBITOR), 유로키나아제(UROKINASE) 또는 이들의 유도체, 스트렙토키나아제(STREPTOKINASE) 또는 이들의 유도체, 내적-Α-트립신 억제제(INTER-Α-TRYPSIN INHIBITOR), Α-2-매크로글로불린(Α-2-MACROGLOBULIN), 아밀로이드 단백질(AMYLOID PROTEIN), 오로소뮤코이드(OROSOMUCOID), 페리틴(FERRITIN), 프리-알부민(PRE-ALBUMIN), GC-글로불린(GC-GLOBULIN), 해모펙신(HAEMOPEXIN) 및 C3-보체(C3 -COMPLEMENT)로 구성된 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 단백질을 포함하는 방법.제 6항에 있어서, 상기 적어도 하나의 단백질 단편은 면역 글로불린, 트랜스페린, 피브리노겐 또는 이들의 유도체, Α-1-단백질 가수분해효소 억제제 및 알부민, 또는 이들의 유도체로 구성된 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 단백질을 포함하는 방법.제 1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,상기 용액은 상기 단백질의 PH가 약 3.0와 약 6.0의 사이인 것을 포함하는 방법.제 8항에 있어서, 상기 용액은 상기 단백질의 PH가 약 4.5와 약 6.0의 사이인 것을 포함하는 방법.제 1항 내지 제 9항 중 어느 한 항에 있어서,제1 용리 단계는 PH가 약 4와 약 8의 사이인 용액으로, 약 0.00005 S/CM 내지 약 0.1 S/CM 사이의 이온 강도로 제1 단백질 단편을 용리하는, 상기 고체 분리 매질을 용리하는 단계를 포함하는 방법.제 10항에 있어서,상기 제1 단백질 단편은 Α-1-단백질 가수분해효소 억제제, 알부민, 오로소뮤코이드, 및 프리-알부민으로 구성된 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 단백질을 포함하는 방법.제 10항 또는 제 11항에 있어서, 제2 용리 단계는 PH가 약 5와 약 7의 사이인 용액으로, 약 0.0001 S/CM 내지 약 0.1 S/CM 사이의 이온 강도로 제2 단백질 단편을 용리하는, 상기 고체 분리 매질을 용리하는 단계를 포함하는 방법.제12항에 있어서, 상기 용액은 방향성, 비-방향성 또는 헤테로방향성 소수성 화합물을 더 포함하는 방법.제13항에 있어서, 상기 비-방향성 소수성 화합물은 알킬 카르복시산의 염, 술폰산의 염 또는 부대전성으로 대전된 세제(DETERGENT)인 방법.제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,상기 제2 단백질 단편은 알부민 및 면역 글로불린으로 구성된 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 단백질을 포함하는 방법.제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,제3 용리 단계는 PH가 약 5와 약 9의 사이인 용액으로, 약 0.001 S/CM 내지 약 4 S/CM 사이의 이온 강도로 제3 단백질 단편을 용리하는, 상기 고체 분리 매질을 용리하는 단계를 포함하는 방법.제16항에 있어서,상기 제3 단백질 단편은 면역 글로불린, 트랜스페린 및 피브리노겐으로 구성된 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 단백질을 포함하는 방법.제16항 또는 제17항에 있어서,제4 용리 단계는 PH가 약 5와 약 9의 사이인 용액으로, 약 0.01 S/CM 내지 약 2 S/CM 사이의 이온 강도로 제4 단백질 단편을 용리하는, 상기 고체 분리 매질을 용리하는 단계를 포함하는 방법.제18항에 있어서,상기 용액은 무기산(MINERAL ACID)의 염을 더 포함하는 방법.제18항 또는 제19항에 있어서, 상기 제4 단백질 단편은 트랜스페린, 면역 글로불린, 피브리노겐 및 Α-2-매크로글로불린으로 구성된 그룹 중에서 선택된 적어도 하나의 단백질을 포함하는 방법.제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,상기 방법은 확장층 모드(EXPANDED BED MODE)에서 확장층 흡착 칼럼(EXPANDED BED ADSORPTION COLUMN)으로 수행되는 방법.제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,상기 방법은 충전층 모드(PACKED BED MODE)에서 충전층 칼럼(PACKED BED COLUMN)으로 수행되는 방법.인자 VIII 및/또는 인자 IX를 포함하는 용액으로부터 인자 VIII 및/또는 인자 IX을 분리하는 방법에서, 상기 용액은 조혈장(CRUDE BLOOD PLASMA), 혈청, 혈장(PLASMA)으로부터 유도된 크리오수퍼네이턴트(CRYOSUPERNATANT), 분할혈장(FRACTIONATED HUMAN PLASMA), 혈장(PLASMA)으로부터 유도된 크리오프리시피테이트(CRYOPRECIPITATE) 및 재조합형 배양액(RECOMBINANT BROTHS)로 구성된 그룹 중에서 선택되고, 상기 방법은, (1) M-S-L을 갖는 고체 분리 매질(MEDIUM)을 제공하는 단계; 상기 M은 매트릭스 백본(MATRIX BACKBONE)이고, S는 선택적인 스페이서 암(SPACER ARM) 및 L은 자일리엔디아민(XYLYLENEDIAMINE)인 리간드이고,(2) 적어도 인자 VIII 및/또는 인자 IX이 상기 용액 분리 매질과 가역적으로 결합하도록 상기 용액을 상기 고체 분리 매질과 접촉시키는 단계;(3) 상기 고체분리 매질로부터 비결합 단백질을 용리하는 제1 용리 단계를 수행하는 단계; (4) 상기 고체 분리 매질로부터 인자 VIII 및/또는 인자 IX를 용리하는 제2 용리 단계를 수행하는 단계;를 포함하는 인자 VIII 및/또는 인자IX를 포함하는 용액에서 인자 VIII 및/또는 인자 IX을 분리하는 방법.제23항에 있어서, 상기 인자 VIII 및 인자 IX을 포함하는 용액은 조혈장인 방법.제23항 또는 제24항에 있어서,상기 M은 고밀도 수지인 방법.제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 S는 에폭시기를 포함하는 화합물인 방법.제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,상기 제1 용리 단계는 PH가 약 5.5와 약 6.5의 사이인 용액으로, 약 0.001 S/CM 내지 약 0.02 S/CM 사이의 이온 강도로 제1 단백질 단편을 용리하는 방법.제27항에 있어서, 제2 용리 단계는 PH가 약 7와 약 9의 사이인 용액으로, 약 0.03 S/CM 내지 약 0.2 S/CM 사이의 이온 강도로 제2 단백질 단편을 용리하는 방법.제27항 또는 제28항에 있어서,상기 용액은 무기산의 염을 더 포함하는 방법.
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