초록

본원에서는, L-글루탐산 생산능을 갖고 비돌연변이 균주 또는 야생형 균주와 거의 동일한 성장율로 성장하고 비돌연변이 균주 또는 야생형 균주의 세포내 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성의 절반 미만인 세포내 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성을 가지며, α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 복합체의 E1o 서브유닛을 암호화하는 염색체성 odhA 유전자의 암호화 영역 또는 발현 조절 영역내로 돌연변이를 도입시킴으로써 수득되는 코리네형 세균이 기술된다.

대표청구항 ▼

a) 비돌연변이 균주 또는 야생형 균주의 세포내 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성의 절반 미만인 세포내 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성 및 b) α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 복합체의 E1o 서브유닛을 암호화하는 염색체성 odhA 유전자의 암호화 영역 또는 발현 조절 영역 내의 돌연변이를 포함하고, 비돌연변이 균주 또는 야생형 균주와 거의 동일한 성장율로 성장하는 L-글루탐산 생산 코리네형 세균.제1항에 있어서, odhA 유전자가 (A) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 단백질,(B) 서열번호 10의 아

a) 비돌연변이 균주 또는 야생형 균주의 세포내 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성의 절반 미만인 세포내 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성 및 b) α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 복합체의 E1o 서브유닛을 암호화하는 염색체성 odhA 유전자의 암호화 영역 또는 발현 조절 영역 내의 돌연변이를 포함하고, 비돌연변이 균주 또는 야생형 균주와 거의 동일한 성장율로 성장하는 L-글루탐산 생산 코리네형 세균.제1항에 있어서, odhA 유전자가 (A) 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하는 단백질,(B) 서열번호 10의 아미노산 서열내의 1개 또는 수개의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하고, α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 복합체의 E1o 서브유닛의 활성을 갖는 단백질, (C) 서열번호 10의 아미노산 37번 내지 1257번을 포함하는 단백질, 및 (D) 서열번호 10의 아미노산 37번 내지 1257번에서 1개 또는 수개의 아미노산이 치환, 결실, 삽입 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하고, α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 복합체의 E1o 서브유닛의 활성을 갖는 단백질로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단백질을 암호화하는 코리네형 세균.제2항에 있어서, 수개의 아미노산이 2 내지 20개의 아미노산인 코리네형 세균.제1항에 있어서, odhA 유전자가(a) 서열번호 9의 뉴클레오타이드 443번 내지 4213번을 포함하는 유전자,(b) 서열번호 9의 뉴클레오타이드 443번 내지 4213번을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 또는 서열번호 9의 뉴클레오타이드 443번 내지 4213번을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로부터 제조된 프로브와 엄중한 조건하에 하이브리드화할 수 있고, α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 복합체의 E1o 서브유닛의 활성을 갖는 단백질을 암호화하는 유전자,(c) 서열번호 9의 뉴클레오타이드 551번 내지 4213번을 포함하는 유전자, 및(d) 서열번호 9의 뉴클레오타이드 551번 내지 4213번을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 또는 서열번호 9의 뉴클레오타이드 551번 내지 4213번을 포함하는 폴리뉴클레오타이드로부터 제조된 프로브와 엄중한 조건하에 하이브리드화할 수 있고, α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 복합체의 E1o 서브유닛의 활성을 갖는 단백질을 암호화하는 유전자로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 코리네형 세균.제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 돌연변이가 티아민 피로포스페이트 결합 영역을 암호화하는 영역내로 도입되는 코리네형 세균.제5항에 있어서, 돌연변이가 서열번호 9의 뉴클레오타이드 2534번 내지 2548번을 포함하는 영역내로 도입되는 코리네형 세균.제5항에 있어서, 돌연변이가 서열번호 10의 아미노산 698번 내지 702번을 포함하는 영역내의 하나 이상의 아미노산의 결실을 포함하는 코리네형 세균.제5항에 있어서, 돌연변이가 서열번호 10에 제시된 아미노산 서열내의 698번 위치의 Lys, 699번 위치의 Leu, 700번 위치의 Arg, 702번 위치의 Tyr 및 이들의 배합물로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산의 치환을 포함하는 코리네형 세균.제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, 돌연변이가 서열번호 9의 뉴클레오타이드 1094번 내지 1111번을 포함하는 영역내로 도입되는 코리네형 세균.제9항에 있어서, 돌연변이가 서열번호 10의 아미노산 218번 내지 224번을 포함하는 영역내의 하나 이상의 아미노산의 결실을 포함하는 코리네형 세균.a) 제1항 내지 제10항 중의 어느 한 항에 따른 코리네형 세균을 배양 배지내에서 배양하는 단계 및b) 상기 배양 배지 및/또는 세균으로부터 L-글루탐산을 수거하는 단계를 포함하는, L-글루탐산의 제조방법.(a) 서열번호 11, 13 및 15로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 443번 내지 4213번을 포함하는 유전자 또는 서열번호 44, 46 및 48로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 443번 내지 4210번을 포함하는 유전자,(b) 서열번호 11, 13 및 15로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 443번 내지 4213번을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 44, 46 및 48로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 443번 내지 4210번을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 11, 13 및 15로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 443번 내지 4213번으로부터 제조된 프로브 또는 서열번호 44, 46 및 48로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 443번 내지 4210번으로부터 제조된 프로브와 엄중한 조건하에 하이브리드화할 수 있고, E2o 및 E3 서브유닛과 함께 복합체를 형성함으로써 야생형 또는 비돌연변이 균주의 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성의 절반 미만인 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성을 갖는 단백질을 암호화하는 유전자,(c) 서열번호 11, 13 및 15로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 551번 내지 4213번을 포함하는 유전자 또는 서열번호 44, 46 및 48로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 551번 내지 4210번을 포함하는 유전자,(d) 서열번호 11, 13 및 15로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 551번 내지 4213번을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 44, 46 및 48로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 551번 내지 4210번을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 서열번호 11, 13 및 15로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 551번 내지 4213번으로부터 제조된 프로브 또는 서열번호 44, 46 및 48로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 551번 내지 4210번으로부터 제조된 프로브와 엄중한 조건하에 하이브리드화할 수 있고, E2o 및 E3 서브유닛과 함께 복합체를 형성함으로써 야생형 또는 비돌연변이 균주의 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성의 절반 미만인 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성을 갖는 단백질을 암호화하는 유전자로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 돌연변이체 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 암호화 유전자.(a) 서열번호 12, 14, 16, 45, 47 및 49로 이루어진 그룹으로부터 선택된 단백질,(b) 서열번호 12, 14, 16, 45, 47 및 49로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열내의 1개 또는 수개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하고, E2o 및 E3 서브유닛과 함께 복합체를 형성함으로써 야생형 또는 비돌연변이 균주의 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성의 절반 미만인 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성을 나타내는 단백질,(c) 서열번호 12, 45, 47 및 49로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열의 아미노산 37번 내지 1256번을 포함하는 단백질, 서열번호 14의 아미노산 서열의 아미노산 37번 내지 1255번을 포함하는 단백질 또는 서열번호 16의 아미노산 서열의 아미노산 37번 내지 1254번을 포함하는 단백질, 및(d) 서열번호 12, 45, 47 및 49로 이루어진 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열의 아미노산 37번 내지 1256번을 포함하는 단백질, 서열번호 14의 아미노산 서열의 아미노산 37번 내지 1255번을 포함하는 단백질, 또는 서열번호 16의 아미노산 서열의 아미노산 37번 내지 1254번을 포함하는 단백질에서, 1개 또는 수개의 아미노산이 치환, 결실 또는 부가된 아미노산 서열을 포함하고, E2o 및 E3 서브유닛과 함께 복합체를 형성함으로써 야생형 또는 비돌연변이 균주의 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성의 절반 미만인 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제 활성을 나타내는 단백질로 이루어진 그룹으로부터 선택된 돌연변이체 α-케토글루타레이트 데하이드로게나제.