초록 ▼

본 발명은 생물학적 시료내에서의 단당세라마이드를 정량 분석하는 방법에 관한 것이다.본 발명의 방법은 내부표준물질로서 디하이드로스핑고신을 첨가함으로써 단당세라마이드를 높은 신뢰도로 정량 분석할 수 있다.또한, 고성능 박층크로마토그래피(HP-TLC)에 의한 정제과정을 통해, 백그라운드 없는 HPLC 크로마토그램을 제공할 수 있으며, 역상(reverse phase)-HPLC 방법을 사용함으로써 HP-TLC에 의해 분리되지 않는 스핑고신 및 디하이드로스핑고신을 분석대상물 단당스핑고신으로부터 분리할 수 있어 정확한 단당세라마이드의 분석이 가

본 발명은 생물학적 시료내에서의 단당세라마이드를 정량 분석하는 방법에 관한 것이다.본 발명의 방법은 내부표준물질로서 디하이드로스핑고신을 첨가함으로써 단당세라마이드를 높은 신뢰도로 정량 분석할 수 있다.또한, 고성능 박층크로마토그래피(HP-TLC)에 의한 정제과정을 통해, 백그라운드 없는 HPLC 크로마토그램을 제공할 수 있으며, 역상(reverse phase)-HPLC 방법을 사용함으로써 HP-TLC에 의해 분리되지 않는 스핑고신 및 디하이드로스핑고신을 분석대상물 단당스핑고신으로부터 분리할 수 있어 정확한 단당세라마이드의 분석이 가능하다.본 발명의 방법은 배양된 세포는 물론 동물의 조직이나 혈액 등 생체 시료내의 단당세라마이드 정량 분석에도 매우 적합하다.

대표청구항 ▼

다음의 단계를 포함하는 생물학적 시료(biological sample)내의 단당세라마이드(monoglycoceramide)를 정량 분석하는 방법: (a) 생물학적 시료에 내부표준물질(internal standard)로서 디하이드로스핑고신을 첨가하는 단계; (b) 상기 단계 (a)의 생물학적 시료로부터 지질성분을 추출하는 단계; (c) 상기 단계 (b)에서 추출된 지질성분으로부터 클로로포름, 메탄올 및 암모니아수의 혼합액을 전개 용매로 사용하여 고성능 박층크로마토그래피(HP-TLC)를 행하여 단당세라마이드 및 내부표준물질로서 첨가한

다음의 단계를 포함하는 생물학적 시료(biological sample)내의 단당세라마이드(monoglycoceramide)를 정량 분석하는 방법: (a) 생물학적 시료에 내부표준물질(internal standard)로서 디하이드로스핑고신을 첨가하는 단계; (b) 상기 단계 (a)의 생물학적 시료로부터 지질성분을 추출하는 단계; (c) 상기 단계 (b)에서 추출된 지질성분으로부터 클로로포름, 메탄올 및 암모니아수의 혼합액을 전개 용매로 사용하여 고성능 박층크로마토그래피(HP-TLC)를 행하여 단당세라마이드 및 내부표준물질로서 첨가한 상기 디하이드로스핑고신을 분리하는 단계;(d) 상기 단계 (c)에서 분리된 단당세라마이드를 탈아실화(deacylation) 반응시키는 단계; (e) 상기 단계 (d)에서 탈아실화 반응에 의해 생성된 단당스핑고신과 상기 첨가한 내부표준물질인 디하이드로스핑고신을 형광 유도체화(fluorescence derivatization) 반응시키는 단계; 및 (f) 상기 단계 (e)의 형광 유도체화 반응 생성물을 역상(reverse phase)-고성능 액체크로마토그래피(HPLC)로 분석하는 단계로서, 상기 단당세라마이드의 함량은 디하이드로스핑고신 및 단당스핑고신에 대한 역상-고성능 액체크로마토그래피의 크로마토그램의 피크 면적으로부터 산출하는 것을 특징으로 하는 단계.