초록 ▼

본 발명은 닭의 악성 전염병인 뉴캐슬병(Newcastle disease, ND) 진단에 관한 것이다.상기와 같은 본 발명에 따르면, 뉴캐슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV) HN(haemagglutinin-neuraminidase) 유전자를 포함하는 재조합 베큘로바이러스 발현벡터를 곤충세포에 형질감염시키고, 상기 곤충세포에서 발현된 NDV HN 단백질 및 이를 포함하는 혈구응집억제시험법(hemagglutination inhibition, HI법) 검사용 NDV 항원진단액을 제공함으로서, 살아있는 NDV

본 발명은 닭의 악성 전염병인 뉴캐슬병(Newcastle disease, ND) 진단에 관한 것이다.상기와 같은 본 발명에 따르면, 뉴캐슬병 바이러스(Newcastle disease virus, NDV) HN(haemagglutinin-neuraminidase) 유전자를 포함하는 재조합 베큘로바이러스 발현벡터를 곤충세포에 형질감염시키고, 상기 곤충세포에서 발현된 NDV HN 단백질 및 이를 포함하는 혈구응집억제시험법(hemagglutination inhibition, HI법) 검사용 NDV 항원진단액을 제공함으로서, 살아있는 NDV를 취급하는 과정에서 발생할 수 있는 주변 오염이나 질병 전염의 위험성을 배제할 뿐만 아니라 신속하고 경제적인 방법으로 NDV 항원진단액을 대량생산할 수 있는 효과가 있다.

대표청구항 ▼

(1) 뉴캐슬병 바이러스(Newcastle diease virus, NDV) 라소타 스트레인으로부터 바이러스 게놈 RNA를 추출하는 단계;(2) 상기 (1)단계에 의해 추출된 RNA와 5′말단의 종료코돈 상부에 HindⅢ제한효소 작용부위가 삽입된 서열 2의 리버스 프라이머(reverse primer)를 이용하여 NDV HN(haemagglutinin-neuraminidase) 단백질 유전자의 cDNA를 합성하는 단계;(3) 상기 (2)단계에 의해 합성된cDNA, 5′말단의 ATG 상부에 Xba1제한 효소 작용부위가 삽입된 서열 1의

(1) 뉴캐슬병 바이러스(Newcastle diease virus, NDV) 라소타 스트레인으로부터 바이러스 게놈 RNA를 추출하는 단계;(2) 상기 (1)단계에 의해 추출된 RNA와 5′말단의 종료코돈 상부에 HindⅢ제한효소 작용부위가 삽입된 서열 2의 리버스 프라이머(reverse primer)를 이용하여 NDV HN(haemagglutinin-neuraminidase) 단백질 유전자의 cDNA를 합성하는 단계;(3) 상기 (2)단계에 의해 합성된cDNA, 5′말단의 ATG 상부에 Xba1제한 효소 작용부위가 삽입된 서열 1의 포워드 프라이머(forward primer) 및 5′말단의 종료코돈 상부에 HindⅢ제한효소 작용부위가 삽입된 서열 2의 리버스 프라이머(reverse primer)를 95℃의 조건에서 열처리 후 PCR을 이용하여 증폭하고, DNA를 합성하는 단계;(4) 상기 (3)단계에 의해 합성된 DNA를 Xba1 및 HindⅢ로 처리하여 1748bp의 DNA 단편을 추출하는 단계; (5) 상기 (4)단계에 의해 추출된 DNA 단편을 베큘로바이러스 폴리헤드린프로모터(PPH)를 가진 pFastBacTM1 발현벡터의 멀티클로닝 부위(multicloning)에 삽입하는 단계;(6) 상기 (5)단계에 의해 제조된 NDV HN 유전자를 포함하는 재조합 베큘로바이러스 발현벡터를 Bacmid를 함유하는 DH10BAC E.coil 세포에 형질전환시켜 Bacmid와 재조합과정을 거치는 단계;(7) 상기 (6)단계에 의한 재조합 Bacmid를 추출하는 단계;(8) 상기 (7)단계에 의해 추출된 재조합 Bacmid를 곤충세포에 형질감염 시키는 단계;(9) 상기 (8)단계에 의해 형질감염시킨 곤충세포에서 NDV HN 단백질을 발현시키는 단계; 및(10) 상기 (9)단계에 의해 발현된 NDV HN 단백질을 세포파쇄용액과 초음파 처리를 통하여 곤충세포로부터 추출하는 단계;를 포함하는 NDV HN 단백질을 발현하는 재조합 베큘로바이러스를 이용한 NDV HN 단백질의 제조방법.