초록 ▼

본 발명은 항체와 유사하게 비-핵산인 특정 단백질 또는 소분자 물질에 특이적으로 결합하는 징크 핑거 단백질을 도출할 수 있는 징크 핑거 단백질 라이브러리의 설계, 구축 및 이를 이용하여 표적 분자에 대해 항체와 유사한 기능을 하는 비 항체 징크 핑거 단백질을 스크리닝하는 방법에 관한 것으로, 구체적으로는 징크 핑거 단백질의 DNA 결합 부위의 아미노산 잔기에 랜덤화를 도입하여 파지표면 제시 기술을 이용하여 징크 핑거 단백질 라이브러리를 제작하였으며, 이로부터 표적 분자인 단백질 혹은 소분자 물질에 대해 결합하는 징크 핑거 클론군을

본 발명은 항체와 유사하게 비-핵산인 특정 단백질 또는 소분자 물질에 특이적으로 결합하는 징크 핑거 단백질을 도출할 수 있는 징크 핑거 단백질 라이브러리의 설계, 구축 및 이를 이용하여 표적 분자에 대해 항체와 유사한 기능을 하는 비 항체 징크 핑거 단백질을 스크리닝하는 방법에 관한 것으로, 구체적으로는 징크 핑거 단백질의 DNA 결합 부위의 아미노산 잔기에 랜덤화를 도입하여 파지표면 제시 기술을 이용하여 징크 핑거 단백질 라이브러리를 제작하였으며, 이로부터 표적 분자인 단백질 혹은 소분자 물질에 대해 결합하는 징크 핑거 클론군을 선별하여 표적 분자에 대한 결합력을 확인하였으므로, 본 발명의 징크 핑거 단백질 라이브러리 제조 방법을 이용하여 제작한 라이브러리 및 이를 이용한 표적 분자에 대해 항체 기능을 하는 비 항체 징크 핑거 단백질의 스크리닝 방법은 징크 핑거 단백질을 기반으로 하는 유사항체 개발에 유용하게 이용할 수 있다.

대표청구항 ▼

1) 징크 핑거 단백질(zinc finger protein)의 징크 핑거 도메인의 알파-나선(α-helix) 부위의 아미노산 서열에서 알라닌(Ala, A), 아스파르트산(Asp, D), 글루탐산(Glu, E), 페닐알라닌(Phe, F), 이소루신(Ile, I), 라이신(Lys, K), 루신(Leu, L), 메티오닌(Met, M), 아스파라긴(Asn, N), 세린(Ser, S), 트레오닌(Thr, T), 발린(Val, V), 또는 타이로신(Tyr, Y)의 13개의 아미노산으로의 랜덤화, 또는 글라이신(Gly, G), 프롤린 (Pro,

1) 징크 핑거 단백질(zinc finger protein)의 징크 핑거 도메인의 알파-나선(α-helix) 부위의 아미노산 서열에서 알라닌(Ala, A), 아스파르트산(Asp, D), 글루탐산(Glu, E), 페닐알라닌(Phe, F), 이소루신(Ile, I), 라이신(Lys, K), 루신(Leu, L), 메티오닌(Met, M), 아스파라긴(Asn, N), 세린(Ser, S), 트레오닌(Thr, T), 발린(Val, V), 또는 타이로신(Tyr, Y)의 13개의 아미노산으로의 랜덤화, 또는 글라이신(Gly, G), 프롤린 (Pro, P), 시스테인(Cys, C) 및 히스티딘(His, H)을 포함하지 않도록 랜덤화하여 조작된 라이브러리를 제작하는 단계;2) 상기 단계 1)의 라이브러리를 파지미드(phagemid) 벡터에 도입하는 단계;3) 상기 단계 2)의 파지미드 벡터를 박테리아에 형질도입하는 단계; 및4) 상기 단계 3)의 박테리아와 보조 파지(helper phage)를 함께 배양한 뒤 징크 핑거(Zinc finger, ZnF) 라이브러리를 표면 제시(phage display)하는 파지 라이브러리를 수득하는 단계를 포함하는 비-핵산 표적 분자에 특이적인 클론을 포함하는 징크 핑거 단백질 라이브러리의 제조방법.