초록 ▼

본 발명은 누에형질전환 기술을 이용하여 누에 체액에서 멜리틴 항균펩타이드를 생산하는 것으로서, 본 실험에서는 누에유래의 액틴3 프로모터를 이용하여 멜리틴 항균펩타이드를 발현시켰다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 3xP3 프로모터와 EGFP 유전자를 이용하여 선발하였고, 300 개의 누에알에 미세주입하여 F1 세대에서 11 아구(bloods)의 누에형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 EGFP 형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 G2 세대 누

본 발명은 누에형질전환 기술을 이용하여 누에 체액에서 멜리틴 항균펩타이드를 생산하는 것으로서, 본 실험에서는 누에유래의 액틴3 프로모터를 이용하여 멜리틴 항균펩타이드를 발현시켰다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 3xP3 프로모터와 EGFP 유전자를 이용하여 선발하였고, 300 개의 누에알에 미세주입하여 F1 세대에서 11 아구(bloods)의 누에형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 EGFP 형광단백질이 발현되는 것을 확인할 수 있었다. 또한 G2 세대 누에형질전환체를 5령 5일 유충까지 사육 후, 체액을 채취한 후 전처리 하였다. 이 시료를 항균활성검정을 하였고, 총 10마리의 누에를 선발할 수 있었다. 이렇게 선발 된 누에는 서로 교배를 통해서 계대사육을 하였다. 이러한 과정으로 선발된 G3세대 누에형질전환체를 이용하여 앞의 과정과 동일한 방법으로 항균할성을 검정하였다. 그 결과 대조군으로 사용된 시그마사의 melittin (0.016mg/ml)과 거의 동일한 항균활성을 나타내었다. 그럼으로 이상의 결과에서 melittin 항균펩타이드를 생산하는 누에형질전환체가 성공적으로 제작되었음을 확인할 수 있었다.

대표청구항 ▼

표지 유전자 조절 프로모터, 표지 유전자, 누에 액틴3(BmA3) 프로모터 및 봉독 유래의 멜리틴(melittin) 유전자가 작동가능하게 연결된 하기 구조의 유전자 컨스트럭트를 포함하되, 상기 표지 유전자 조절 프로모터는 3xP3 프로모터이고, 상기 표지 유전자는 EGFP(green fluorescent protein) 유전자이며, 상기 멜리틴 유전자는 Gly-Ile-Gly-Ala-Val-Leu-Lys-Val-Leu-Thr-Thr-Gly-Leu-ProAla-Leu-Ile-Ser-Trp-Ile-Lys-Arg-Lys-Arg-Gln-Gl

표지 유전자 조절 프로모터, 표지 유전자, 누에 액틴3(BmA3) 프로모터 및 봉독 유래의 멜리틴(melittin) 유전자가 작동가능하게 연결된 하기 구조의 유전자 컨스트럭트를 포함하되, 상기 표지 유전자 조절 프로모터는 3xP3 프로모터이고, 상기 표지 유전자는 EGFP(green fluorescent protein) 유전자이며, 상기 멜리틴 유전자는 Gly-Ile-Gly-Ala-Val-Leu-Lys-Val-Leu-Thr-Thr-Gly-Leu-ProAla-Leu-Ile-Ser-Trp-Ile-Lys-Arg-Lys-Arg-Gln-Gln(서열번호 8)의 아미노산 서열로 이루어진 펩타이드를 발현하는 염기서열로 구성된 것을 특징으로 하는 piggyBac 재조합 발현벡터.