초록 ▼

본 발명은 등온 조건하에서 표적 핵산과 혼성화된 프로브가 절단되고 그 결과 생성된 프로브 단편이 다음 단계의 프로브와 혼성화되어 새로운 프로브 단편을 생성하는 반응이 직렬적으로 연결되어 신호증폭에 필요한 프로브 단편이 증폭되고, 그 결과 측정 신호가 증폭되어 소량의 특정 염기 서열의 핵산을 검출하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 등온에서의 지수적 교차 핵산 절단 반응을 이용한 표적 핵산 검출방법은 표적 핵산 특이적인 방법으로 신호를 증폭하기 때문에 시료 이동에 따른 오염을 예방할 수 있으며, 등온 조건하에서 증폭반응이 일어나 열순

본 발명은 등온 조건하에서 표적 핵산과 혼성화된 프로브가 절단되고 그 결과 생성된 프로브 단편이 다음 단계의 프로브와 혼성화되어 새로운 프로브 단편을 생성하는 반응이 직렬적으로 연결되어 신호증폭에 필요한 프로브 단편이 증폭되고, 그 결과 측정 신호가 증폭되어 소량의 특정 염기 서열의 핵산을 검출하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 등온에서의 지수적 교차 핵산 절단 반응을 이용한 표적 핵산 검출방법은 표적 핵산 특이적인 방법으로 신호를 증폭하기 때문에 시료 이동에 따른 오염을 예방할 수 있으며, 등온 조건하에서 증폭반응이 일어나 열순환 프로그램 및 장치가 필요없어 열순환 장치에 따른 고비용을 해결할 수 있고 자동화가 용이하다. 따라서, 신호증폭법을 이용한 임상용 표적 핵산 검출법 개발이 가능해져 저비용으로 질병 및 감염과 관련된 핵산의 조기검출, 약물에 대한 민감성, 암 치료에 대한 예후를 예측하는 데는 물론 규정된 표현형을 가져오는 유전자 변형의 검출, 유전질환 또는 질환에 대한 감수성의 진단, 유전자 발현의 평가 및 다양한 게놈 프로젝트에 응용되어 분자생물학적 연구 및 질병진단에 유용하게 사용할 수 있다.

대표청구항 ▼

1차 프로브는 표적 핵산과 상보적으로 결합할 수 있는 서열 및 1차 프로브의 절편으로 구성되며, 상기 1차 프로브의 절편은 2차 프로브와 상보적으로 결합할 수 있는 핵산 서열이고, 2차 프로브는 1차 프로브의 절편과 상보적으로 결합할 수 있는 핵산 서열 및 2차 프로브의 절편으로 구성되는 것으로서, 상기 2차 프로브의 절편은 1차 프로브와 상보적으로 결합할 수 있는 핵산 서열이고, 고상 지지체에 고정되어 있는 상기 1차 프로브 및 2차 프로브에 표적 핵산과 이중가닥핵산을 분해하는 핵산 분해 효소를 가하여,1) 표적 핵산이 1차 프로

1차 프로브는 표적 핵산과 상보적으로 결합할 수 있는 서열 및 1차 프로브의 절편으로 구성되며, 상기 1차 프로브의 절편은 2차 프로브와 상보적으로 결합할 수 있는 핵산 서열이고, 2차 프로브는 1차 프로브의 절편과 상보적으로 결합할 수 있는 핵산 서열 및 2차 프로브의 절편으로 구성되는 것으로서, 상기 2차 프로브의 절편은 1차 프로브와 상보적으로 결합할 수 있는 핵산 서열이고, 고상 지지체에 고정되어 있는 상기 1차 프로브 및 2차 프로브에 표적 핵산과 이중가닥핵산을 분해하는 핵산 분해 효소를 가하여,1) 표적 핵산이 1차 프로브와 상보적으로 결합하는 단계;2) 표적 핵산과 상보적으로 결합된 1차 프로브가 이중가닥핵산을 분해하는 핵산 분해 효소에 의해 절단되어 표적 핵산이 1차 프로브에서 분리되고 1차 프로브의 절편을 형성시키는 단계;3) 상기 단계 2)에서 생성된 표적 핵산은 다시 표적 핵산과 반응하지 않은 새로운 1차 프로브와 결합하고, 1차 프로브의 절편은 2차 프로브와 결합하는 단계;4) 1차 프로브의 절편과 상보적으로 결합된 2차 프로브가 이중가닥핵산을 분해하는 핵산 분해 효소에 의해 절단되어 1차 프로브의 절편이 2차 프로브에서 분리되고 2차 프로브의 절편을 형성시키는 단계; 및5) 상기 단계 4)의 2차 프로브에서 분리된 1차 프로브의 절편이 다시 1차 프로브의 절편과 반응하지 않은 새로운 2차 프로브와 상보적으로 결합하고, 2차 프로브의 절편은 다시 상기 단계 1) 내지 단계 3)에서 반응하지 않은 1차 프로브와 상보적으로 결합하는 단계; 를 포함하는 것을 특징으로 하는, 표적 핵산 검출 방법.