초록 ▼

본 발명은 케노데옥시콜산(CDCA) 및 관련된 화합물을 우르소데옥시콜산(UDCA) 및 관련 화합물로 전환시키는 커플링된 생체전환 방법에 관한 것이다. 이는 또한 클로스트리디움 디시실레(Clostridium difficile)로부터의 신규한 NADP+-의존성 7α-하이드록시스테로이드 데하이드로게나제(7α-HSDH), 이의 보조인자 스위치 돌연변이체(switch mutant)의 클로닝, 발현, 및 생화학적 특성화, 및 담즙산의 산화를 위한 이들의 적용에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 양태는 이. 콜라이(E. coli)의 NADP+-의

본 발명은 케노데옥시콜산(CDCA) 및 관련된 화합물을 우르소데옥시콜산(UDCA) 및 관련 화합물로 전환시키는 커플링된 생체전환 방법에 관한 것이다. 이는 또한 클로스트리디움 디시실레(Clostridium difficile)로부터의 신규한 NADP+-의존성 7α-하이드록시스테로이드 데하이드로게나제(7α-HSDH), 이의 보조인자 스위치 돌연변이체(switch mutant)의 클로닝, 발현, 및 생화학적 특성화, 및 담즙산의 산화를 위한 이들의 적용에 관한 것이다. 본 발명의 추가의 양태는 이. 콜라이(E. coli)의 NADP+-의존성 7α-HSDH의 신규한 NADP-의존성 보조인자 스위치 돌연변이체 및 담즙산의 산화를 위한 이들의 적용에 관한 것이다.

대표청구항 ▼

하기 화학식 1의 우르소데옥시콜산(UDCA) 화합물을 제조하기 위한, 커플링된 생체촉매적 방법(coupled biocatalytic process)으로서, 상기 방법은a) 하기 화학식 2의 체노데옥시콜산(CDCA) 화합물을 7α-하이드록시스테로이드 데하이드로게나제(7α-HSDH) 및 7β-하이드록시스테로이드 데하이드로게나제(7β-HSDH) 및, NAD+ 및 NADP+로부터 선택된 보조인자의 존재하에서 반응시키는 단계로서, 여기서 상기 7α-HSDH 및 상기 7β-HSDH는 NAD+/NADH 및 NADP+/NADPH로부터 선택된 동일

하기 화학식 1의 우르소데옥시콜산(UDCA) 화합물을 제조하기 위한, 커플링된 생체촉매적 방법(coupled biocatalytic process)으로서, 상기 방법은a) 하기 화학식 2의 체노데옥시콜산(CDCA) 화합물을 7α-하이드록시스테로이드 데하이드로게나제(7α-HSDH) 및 7β-하이드록시스테로이드 데하이드로게나제(7β-HSDH) 및, NAD+ 및 NADP+로부터 선택된 보조인자의 존재하에서 반응시키는 단계로서, 여기서 상기 7α-HSDH 및 상기 7β-HSDH는 NAD+/NADH 및 NADP+/NADPH로부터 선택된 동일한 보조인자 시스템을 이용하는 능력을 가지며, 여기서a1) 상기 7α-HSDH는 상기 화학식 2의 CDCA 화합물의 하기 화학식 3의 상응하는 중간체 7-케토리토콜산(7-KLCA) 화합물로의 산화를 촉진시키고,a2) 상기 7β-HSDH는 반응 단계 a1)에서 형성된 바와 같은 상기 화학식 3의 7-KLCA 화합물의 상기 화학식 1의 UDCA 화합물로의 환원을 반응 단계 a1)에서 소비된 보조인자의 재생 하에서 촉진시키는 단계; 및b) 임의로 반응 생성물을 추가로 정제하는 단계를 포함하는, 커플링된 생체촉매적 방법:[화학식 1][화학식 2][화학식 3]상기 화학식 1에서,R은 알킬, H, 알칼리 금속 이온 또는 N(R3)4+(여기서, 잔기 R3은 동일하거나 상이하고 H 또는 알킬을 나타낸다)을 나타내거나, 여기서 그룹 -CO2R은 산 아미드 그룹 -CONR1R2(여기서, R1 및 R2는 서로 독립적으로 알킬 잔기를 나타낸다)에 의해 대체되고; 여기서 R은 바람직하게는 H를 나타내고;상기 화학식 2에서,R은 그룹 -CO2R에 대해 상기 정의된 바와 동일한 의미를 가지거나 산 아미드 그룹 -CONR1R2로 대체되며,상기 화학식 3에서,R은 상기 정의된 바와 같거나, 여기서 그룹 -CO2R은 상기 정의된 바와 같은 산 아미드 그룹 -CONR1R2로 대체된다.