초록

본 발명은 CRISPR/Cas 시스템을 이용하여 표적 유전자에 대한 돌연변이가 유발된 형질전환 식물체를 제조하고, 상기 형질전환 식물체와 야생형 식물체를 교배하여 일대잡종(F1)에서 표적 유전자에 대한 동형접합 돌연변이체 또는 이대립인자성 돌연변이체를 제조하는 방법; 및 형광표지 유전자가 추가된 재조합 벡터를 이용하여 형광을 통해 분류가 가능한 웅성불임 유지친 또는 Non-GMO 식물체를 제조하는 방법에 관한 것이다.

대표청구항 ▼

(a) 표적 유전자를 인식할 수 있는 sgRNA(single guide RNA)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, Cas(CRISPR-associated nuclease) 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 형광표지 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 재조합 벡터로 이루어진 CRISPR/Cas9 운반체를 식물체 내에 형질전환시켜 형질전환 식물체를 제조하는 단계; 및(b) 모본인 상기 형질전환 식물체와 부본인 야생형 식물체를 교배하여 일대잡종(F1)을 생산하는 단계; 및(c) 상기 일대잡종(F1) 중 형광표지 단백질을 발현하는 식

(a) 표적 유전자를 인식할 수 있는 sgRNA(single guide RNA)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, Cas(CRISPR-associated nuclease) 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 형광표지 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 삽입된 재조합 벡터로 이루어진 CRISPR/Cas9 운반체를 식물체 내에 형질전환시켜 형질전환 식물체를 제조하는 단계; 및(b) 모본인 상기 형질전환 식물체와 부본인 야생형 식물체를 교배하여 일대잡종(F1)을 생산하는 단계; 및(c) 상기 일대잡종(F1) 중 형광표지 단백질을 발현하는 식물체를 선별하는 단계;를 포함하는 웅성불임 유지친(male sterile maintainer)의 제조 방법에서,상기 표적 유전자는 유전자의 발현이 저해되는 경우 식물체에 웅성불임을 유도하는 것을 특징으로 하고,상기 형광표지 단백질을 발현하는 식물체는 동형접합 돌연변이체 또는 이대립인자성 돌연변이체이며, CRISPR/Cas9 운반체를 포함하여 웅성불임계를 안정적으로 유지할 수 있는 것을 특징으로 하는, 방법.