초록

본 발명은 히알루론산(HA)를 주성분으로 하는 가교 필러(dermal filler) 제품 중에서 가교 처리된 히알루론산 조성물 중 히알루론산과 가교제 간의 가교율을 고성능 액체크로마토그래프-질량분석기(LC-MS) 및 고성능 액체크로마토그래프(HPLC) 분석법을 사용하여 간편하게 측정할 수 있는 방법에 관한 것으로, 히알루론산(HA)이 주성분인 필러 제품에 대한 과학적인 품질관리를 가능하게 할 수 있다.

대표청구항 ▼

(1단계) 시료 내 히알루론산(HA)의 농도가 최종 0.1~0.8 중량% 가 되도록 시료를 pH 5~7 완충용액으로 희석하는 단계;(2단계) 상기 1 단계의 시료에 히알루론산 가수분해효소를 40~400 U/mL이 되도록 첨가하는 단계;(3단계) 상기 2단계의 히알루론산 가수분해효소가 첨가된 시료를 37~50 ℃에서 48 ~ 120시간 동안 가수분해하여 가수분해물을 제조하는 단계;(4단계) 상기 3단계의 시료 가수분해물을 고성능 액체크로마토그래피-질량분석기(LC-MS)를 이용하여 비가교결합 및 가교결합된 성분피크를 동정하는 단계; 및

(1단계) 시료 내 히알루론산(HA)의 농도가 최종 0.1~0.8 중량% 가 되도록 시료를 pH 5~7 완충용액으로 희석하는 단계;(2단계) 상기 1 단계의 시료에 히알루론산 가수분해효소를 40~400 U/mL이 되도록 첨가하는 단계;(3단계) 상기 2단계의 히알루론산 가수분해효소가 첨가된 시료를 37~50 ℃에서 48 ~ 120시간 동안 가수분해하여 가수분해물을 제조하는 단계;(4단계) 상기 3단계의 시료 가수분해물을 고성능 액체크로마토그래피-질량분석기(LC-MS)를 이용하여 비가교결합 및 가교결합된 성분피크를 동정하는 단계; 및(5단계) 상기 4단계의 분석결과를 하기 수식 1에 적용하여 시료의 가교결합율을 측정하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 히알루론산-가교제 간의 가교결합율 측정 방법.[수식 1]총 변형도(가교결합율; t-MOD, %) = (단, 여기서, AHA는 가교되지 않은(비가교결합) 시료 가수분해물의 총 피크면적, AHA-X-HA는 교차결합(cross-link)으로 가교된 시료 가수분해물의 총 피크면적, AHA-X는 펜던트(pendent)로 가교된 시료 가수분해물의 총 피크면적이다)