초록

본 발명은 키메라 항원 수용체(CAR)를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드를 운반하는 렌티바이러스 벡터로 유전적으로 변형된 자연 살해(NK) 세포의 제조 분야에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 방법으로 수득되는 CAR-NK 세포 및 특히 암을 치료하는 방법에서 사용하기 위한, 의약에서의 CAR-NK 세포의 용도에 관한 것이다.

대표청구항 ▼

하기를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)로 유전적으로 변형된 NK-세포 집단의 제조 방법으로서, 키메라 항원 수용체는 CD44v6에 대한 것인, 방법:(i) 하기 단계에 따라 CAR을 코딩하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 운반하는 CD34+ 세포를 함유하는 중간 세포 집단을 생산하는 제1 상:a) 골수, 말초혈, 태반 또는 제대혈로 구성되는 군으로부터 선택되는 생물학적 시작 샘플을 수득하는 단계,b) 이러한 생물학적 시작 샘플로부터 조혈 줄기 세포를 단리하는 단계, c) 배양 배지 I의 존재 하에 단리된 조혈 줄기 세포를

하기를 포함하는 키메라 항원 수용체(CAR)로 유전적으로 변형된 NK-세포 집단의 제조 방법으로서, 키메라 항원 수용체는 CD44v6에 대한 것인, 방법:(i) 하기 단계에 따라 CAR을 코딩하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 운반하는 CD34+ 세포를 함유하는 중간 세포 집단을 생산하는 제1 상:a) 골수, 말초혈, 태반 또는 제대혈로 구성되는 군으로부터 선택되는 생물학적 시작 샘플을 수득하는 단계,b) 이러한 생물학적 시작 샘플로부터 조혈 줄기 세포를 단리하는 단계, c) 배양 배지 I의 존재 하에 단리된 조혈 줄기 세포를 배양하는 단계,d) 이러한 세포를 CAR을 코딩하는 적어도 하나의 폴리뉴클레오타이드를 운반하는 렌티바이러스 벡터와 인큐베이션하여 배양된 줄기 세포를 형질도입하고, 이에 따라 CAR-CD34+ 줄기 세포를 함유하는 중간 세포 집단을 수득하는 단계, 및e) 선택적으로, 배양 배지 I에서 CAR-CD34+ 줄기 세포를 함유하는 중간 세포 집단을 적어도 1일 동안 배양하는 단계로서, 배양 배지 I은 사이토카인 집합을 포함하는 기본 배양 배지이며, 상기 사이토카인 집합은 인터류킨-7 및 하나 이상의 줄기 세포 인자(SCF), flt-3리간드(FLT-3L), 트롬보포이에틴(TPO), 및 2개 이상의 과립구-대식구-콜로니-자극 인자(GM-CSF), 과립구-콜로니-자극 인자(G-CSF), 및 인터류킨-6(IL-6)을 포함하는, 단계,(ii) 하기 단계를 포함하는 제2 상:배양 배지 II에서 제1 상으로부터의 CAR-CD34+ 줄기 세포를 함유하는 중간 세포 집단을 추가 증식시킴으로써 CAR-CD34+ 줄기 세포 및 CAR-NK 전구 세포를 함유하는 세포 집단을 수득하는 선택적, 예비 단계로서, 배양 배지 II는 사이토카인 집합을 포함하는 기본 배양 배지이고, 상기 사이토카인 집합은 2개 이상의 SCF, FLT-3LP 인터류킨-15(IL-15) 및 IL-7 및 2개 이상의 GM-CSF, G-CSF, 및 IL6을 포함하는, 단계 및CAR-CD34+ 줄기 세포를 함유하는 I 상으로부터의 중간 세포 집단 또는 CAR-CD34+ 줄기 세포 및 CAR-NK 전구 세포를 함유하는 선택적 예비 단계로부터의 세포 집단을 증식시키고 CAR-NK 세포를 함유하는 세포 집단으로 분화시키는 단계로서, CAR-CD34+ 줄기 세포를 함유하는 I 상으로부터의 중간 세포 집단 또는 CAR-CD34+ 줄기 세포 및 CAR-NK 전구 세포를 함유하는 선택적 예비 단계로부터의 세포 집단을 배양 배지 III에서 배양함으로써 NK-세포를 함유하는 세포 집단을 수득하는 단계를 포함하고, 배양 배지 III은 사이토카인 집합을 포함하는 기본 배양 배지이고, 상기 사이토카인 집합은 2개 이상의 SCF, IL-7, IL-15 및 인터류킨-2(IL-2) 및 2개 이상의 GM-CSF, G-CSF, 및 IL-6을 포함하는, 단계.