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[국가R&D연구보고서] Progesterone 단일 클론항체 생산과 응용기술 개발 (I)
Study for the Production and Application of Progesterone Monoclonal Antibodies (I) 원문보기

보고서 정보
주관연구기관 한국과학기술원
Korea Advanced Institute of Science and Technology
연구책임자 최명자
참여연구자 정태화 , 최인성 , 윤도영 , 최상훈 , 강혜경 , 송은영 , 권두한
발행국가대한민국
언어 한국어
발행년월1988-12
주관부처 과학기술부
과제관리전문기관 한국생명공학연구원
Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology
등록번호 TRKO200200001465
DB 구축일자 2013-04-18
키워드 효소 면역측정법.Enzyme immuno assay.

초록 ▼

Progesterone의 3-position에 BSA를 coupling시켜 immunogen을 합성하여 Balb/c mice에 단일클론항체를 분비하는 hybridoma cell line을 확립하였다. Progesterone의 단일클론항체를 대량 확보하기 위해 hybridoma cell을 BALB/C의 복강내에 주사하여 in vivo culture하여 ascites를 대량확보한 후 단일클론항체를 분리하여 특성을 조사하였다. 생산된 항체의 isotype 는 IgG₁,IgG₂a,IgG₂b,IgM으로 각각 나타났으며 clone BE51G5

목차 Contents

  • 제 1 잘 서론...15
  • 제 2 장 실험재료 및 방법...17
  • 제 1 절 실험재료...17
  • 제 2 절 실험방법...19
  • 1. 단일클론항체의 개발...19
  • 가. 면역원의 제조...19
  • 나. 생쥐의 면역화...19
  • 다. myeloma세포분양...21
  • 라. 세포융합...21
  • 마. 하이브리도마의 선별...22
  • 바. Feeder cell제조...23
  • 사. 하이브리도마 세포의 클론링...23
  • 2. 단일클론항체의 대량생산...24
  • 3. 항체의 특성조사...24
  • 4. 항체의 분리정제...25
  • 가. 항체의 분리 정제방법...25
  • 나. agarose gel electrophoresis에 의한 순도결정...26
  • 다. 단백질 총량 결정...26
  • 라. SRID에 의한 복수중의 mouse IgG 총량 측정...27
  • 5. 면역분석법 개발...27
  • 가. Standard progesterone제조...28
  • (1) Butter Standard...28
  • (2) Serum Standard...28
  • (3) Milk Standard...29
  • 나. progesterone-HRP conjugate제조...29
  • 다. Competitive enzyme immunoassay 개발...30
  • (1) Solid phase-Ab의 Ab최적농도 조사...30
  • (2) progesterone-HRP의 최적농도 조사...31
  • (3) ANS 영향...31
  • (4) matrix 영향...32
  • 라. 표준곡선작성...32
  • 6. 분석법의 평가분석...33
  • 가. 분석감도...33
  • 나. 재현성...34
  • 다. Dilution linearity...34
  • 라. 교차반응성...34
  • 제 3장 결과 및 고찰...35
  • 제 1 절 단일클론항체의 개발...35
  • 제 2 절 항체의 대량생산...38
  • 제 3 절 항체의 특성조사...40
  • 1. Isotype 결정...40
  • 2. 항체의 역가비교...42
  • 3. Sensitivity측정...44
  • 4. Specificity조사...45
  • 제 4 절 항체의 분리정제...49
  • 1. Sepharose-CL-4B-protein A chromatography...49
  • 2. PEG 침전법...50
  • 3. Ammonium sulfate 침전법...54
  • 제 5 절 효소면역분석법 개발...57
  • 1. progesterone-HRP 제조...57
  • 2. Solid phase-Ab의 Ab최적농도 조사...57
  • 3. Substrate의 최대흡광도 선택...60
  • 4. ANS 영향 및 progesterone-HRP 최적농도 조사...61
  • 5. Standaed progesterone의 matrix영향...66
  • 6. Incubation time 조사...70
  • 제 6 절 분석법의 평가분석...70
  • 1. 표준곡선...70
  • 2. 분석감도...70
  • 3. 재현성...73
  • 4. Dilution linearity...76
  • 5. 교차반응성...76
  • 제 4 장 결론 및 건의사항...85
  • 참고문헌...88

연구자의 다른 보고서 :

참고문헌 (25)

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