초록 ▼

기본적인 동물 세포 배양 기술을 확립하였고, 세포의 기본 특성에 대하여 조사하였다. 세포 주에 따라 약간의 차이가 있었지만 쥐 하이브리도마인 HCGK의 경우 비성장 속도는 0.061h/sup -1/로 계산되었으며, 산소 소모 속도(OUR)는 배양과정중에 1-10㎍ O/sub 2//10/sup 6/ cells/h로 다양한 값의 변화를 보였다. 포도당의 소모 속도와 항체의 생성 속도는 배양 초기에 높은 값을 가지고, 시간이 경과함에 따라 낮아지는 경향을 보였으며, 포도당의 소모속도는 0.1-02㎎ glucose/10/sup 6/ cel

기본적인 동물 세포 배양 기술을 확립하였고, 세포의 기본 특성에 대하여 조사하였다. 세포 주에 따라 약간의 차이가 있었지만 쥐 하이브리도마인 HCGK의 경우 비성장 속도는 0.061h/sup -1/로 계산되었으며, 산소 소모 속도(OUR)는 배양과정중에 1-10㎍ O/sub 2//10/sup 6/ cells/h로 다양한 값의 변화를 보였다. 포도당의 소모 속도와 항체의 생성 속도는 배양 초기에 높은 값을 가지고, 시간이 경과함에 따라 낮아지는 경향을 보였으며, 포도당의 소모속도는 0.1-02㎎ glucose/10/sup 6/ cells/h로, 항체 생성 속도는 0.0-0.4 log/sub 3/(titer)/10/sup 6/ cells/h로 변화하는 양상을 보였다. 이와 같은 단위 세포당의 특성은 비성장속도와 같은 경향을 보이고 있다. 배양 배지에 증식 억제제로 hudroxy urea(HU)가 첨가되면, 세포의 증식속도는 많이 느려졌다. 0.05-0.1mM의 HU가 첨가되면 초기의 세포농도가 거의 변화 없이 배양 끝까지 계속 되었다. 이때 도달된 최고 세포농도는 control에 비해 1/3 수준이지만 항체의 농도는 비슷하거나, 40-50%정도 증가하는 경향을 보였다. 즉, 단위 생존 세포당의 항체 생산 속도인 비생산 속도가 무척 커진 것이 된다. Thymidine이 억제제로 이용될 때, 세포 농도 및 다른 세포 특성은 거의 영향을 받지 않았으나, 생산된 항체의 농도는 40% 정도 증가하였다. 이와 같은 결과를 통해 세포의 농도는 HU로 조절하고, 항체의 농도를 증가시키기 위해 thymidine을 이용할 수 있음을 알았다. 혈청 농도에 의한 영향을 조사한 바에 의하면 세포 생존에 필요한 양이 일단 공급되면, 높은 농도의 혈청이 생산성에 기여하는 바가 거의 없음을 알 수 있었다. 고혈청은 최고 세포농도를 증가시켰지만 항체의 농도 증가에는 영향을 주지 못했고, 반면에 초기의 접종농도 증가는 무혈청 배지에서의 생존력을 증가시켰다. 실관 반응기 실험에선 개발한 이중 실관 반응기와 일반 실관 반응기를 동시에 조업한 결과, 이중실관 반응기에서 세포의 활성이 두드러지게 높아졌고, 항체도 훨씬 많이 생산되었다.

목차 Contents

• 제1장 서론...19
• 제2장 하이브리도마 세포의 기본 배양 기술...24
• 제1절 재료 및 실험 방법...24
• 1. 세포주...24
• 2. 배양액...24
• a. 사용시약...24
• b. 사용기구...24
• c. 배지의 조제...25
• 3. 분석 방법...27
• a. 세포 농도 측정...27
• 가. 시약 및 기구...27
• 나. 측정 방법...27
• b. 항체 농도의 측정...28
• 가. ELISA 방법...28
• 나. SRID 방법...31
• c. 포도당의 농도 측정...32
• 4. 세포의 계대 배양 및 보관...32
• a. 계대 배양...32
• b. 동결 보관 및 해동...33
• 가. 동결 보관...33
• 나. 해동...34
• 제3장 동물 세포의 특성 및 배지의 최적화...35
• 제1절 동물 세포의 특성...35
• 제2절 배지의 최적화...39
• 1. 중식 억제제를 이용한 경우...39
• 2. 배지중 혈청 농도를 조절한 경우...51
• 제4장 실관 반응기의 개발...74
• 제5장 결론 및 건의...82
• 참고문헌...84