초록

대장균에서 유전공학기법으로 인슐린을 생산하기 위해서 사용될 숙주,벡터등은 선정하였고 인슐린유전자를 제조합 실험과 연결하여 용이하도록 설계하였다. DNA합성은 인슐린 유전자설계에 따라 phosphit triester고상법에 의하여 수행하였고,유전자조합은 인산화와 ligation을 통하여 조립하였다. 조립된 인슐린 유전자 (A,B사슬)을 각각 대장균에 도입하였고,도입된 PUC19벡터의 유전자서열을 결정하여 확인하였다.

목차 Contents

• 제1장 서 론...11
• 제2장 연구내용 및 방법...14
• 제1절 인슈린 유전자설계...14
• 제2절 oligonucleotide의 화학 합성...17
• 1. Phosphite triester 합성법...17
• 2. 탈보호반응과 전기영동 정제...17
• 3. 합성 oligonucleotides의 분석...18
• 가. 전기영동 gel상의 mobility...18
• 나. 5'-끝 분석...18
• 다. 서열분석...21
• 제3절 유전자의 조립...26
• 1. 합성 oligonucleotide의 kination...28
• 2. T4 ligase 에 의한 유전자 조립...28
• 제4절 인슈린 유전자의 클로닝...33
• 1. 실험재료...33
• 가. 균주...33
• 나. 배지 및 완충용액...33
• 다. 효소 및 chemicals...34
• 2. Plasmid 분리...34
• 가. 초원심분리에 의한 plasmid DNA의 분리...34
• 나. Rapid preparation...35
• 3. 인슈린 A,B chain유전자의 클로닝...35
• 가. 벡터조합...35
• 나. Ligation...36
• 다. Transformation...36
• 4. Recombinant DNA 분석...37
• 가. Recombinant DNA의 분석...37
• 나. Dideoxy chain termination sequencing...37
• 제3장 연구결과 및 고찰...39
• 제1절 Oligonucleotide 의 화학합성과 유전자의 소합...39
• 제2절 조합된 인슈린 A와 B chain 유전자의 클로닝...41
• 제4장 결 론...45
• 제5장 참고문헌...46