초록 ▼

○ E. coli K-12 야생형 균주와 되먹임 저해에 저항성을 가지는 E. coli B 변이주의 -glutamylcysteine synthetase 유전자의 염기서열을 분석한 결과 494번째 amino acid가 야생형 은 alanine 인데 반하여 변이주의 amino acid는 glycine 이였다. 그러므로 494와 495번째 아미 노산을 변형시킨 변이 유전자를 제조하여 변이된 효소의 활성을 조사함. ○ 부위특이적 돌연변이 방법에 의해 만든 변이주의 -glutamylcyste

○ E. coli K-12 야생형 균주와 되먹임 저해에 저항성을 가지는 E. coli B 변이주의 -glutamylcysteine synthetase 유전자의 염기서열을 분석한 결과 494번째 amino acid가 야생형 은 alanine 인데 반하여 변이주의 amino acid는 glycine 이였다. 그러므로 494와 495번째 아미 노산을 변형시킨 변이 유전자를 제조하여 변이된 효소의 활성을 조사함. ○ 부위특이적 돌연변이 방법에 의해 만든 변이주의 -glutamylcysteine synthetase 비활성도 측정 하여 야생형의 그것과 비교 분석하였다. 또한 재조합 효소의 안전성 연구를 위하여 GshI 효소를 초순수 분리하여 정제된 효소를 이용하여 구조적 특성과 반응 특성을 조사함. ○ Wild type 대장균내에 외래유전자를 gene cloning과 같은 유전공학적 기법을 이용하여 만들어낸 재조합 대장균은 wild type 대장균에 비해 글루타치온의 생산성은 높으나 삽입된 plasmid의 stability가 낮아 오랜시간 배양중에 소실되는 경우가 발생하는 문제점이 발견됨. ○ 혼합균주를 고정화하기 위한 alginate bead를 생산하기 위하여 대형 stainless steel제(내경 25 cm, 길이 30 cm) Beader를 제작함. ○ 생성된 글루타치온을 미반응 아미노산, glucose 등으로부터 분리, 회수하기 위하여 금속이온이 글루타치온과 결합하여 침전하는 현상을 이용하였는데 Fe, Co, Ni, Cu, Zn 등의 금속의 nitrate, sulfate, phosphate들에 대한 글루타치온의 침전에 대한 실험을 수행한 결과, cupric sulfate와 cupric nitrate가 90 % 이상의 침전을 보임을 확인함.

목차 Contents

• 제1장 서론...8
• 제1절 글루타치온...8
• 제2절 고농도 배양...9
• 제3절 γ-Glutamylcysteine 생산...10
• 제2장 연구추진방법...12
• 제1절 고농도 배양...12
• 제2절 혼합세포의 고정화...16
• 제3장 연구결과 및 고찰...20
• 제1절 유가식 배양에 의한 고농도 배양...20
• 제2절 ATP 재정공정...21
• 제3절 고정화 대장균과 효모의 혼합 세포계...22
• 제4장 결론...40
• 제5장 참고문헌...41
• 제6장 위탁과제...42