초록 ▼

1. 생물학적 다양성을 이용한 유용유전자원의 탐색 및 보존 110여종의 외생근균류, 30여종의 토양유래 효모류 확보. 야생곤충의 장내미생물을 탐색, 섬유질분해와 관련된 31종의 미생물을 분리 동정, 그 효능이 우수한 3종을 선별 추후의 유전자분석에 사용. 2. 신속분류체계의 개발 분류지표 유전자로 ITS 유전자의 PCR-RFLP에 의한 database 작성, Trichoderma속 균의 분류 및 토양유래 효모의 분류에 its 유전자의 RFLP 양상을 적용. 3. 유용유전자의 탐색 1) 균류의 분화관련 유전자 Flammulina ve

1. 생물학적 다양성을 이용한 유용유전자원의 탐색 및 보존 110여종의 외생근균류, 30여종의 토양유래 효모류 확보. 야생곤충의 장내미생물을 탐색, 섬유질분해와 관련된 31종의 미생물을 분리 동정, 그 효능이 우수한 3종을 선별 추후의 유전자분석에 사용. 2. 신속분류체계의 개발 분류지표 유전자로 ITS 유전자의 PCR-RFLP에 의한 database 작성, Trichoderma속 균의 분류 및 토양유래 효모의 분류에 its 유전자의 RFLP 양상을 적용. 3. 유용유전자의 탐색 1) 균류의 분화관련 유전자 Flammulina velutipes를 대상으로 differential display 방법으로 total RNA로부터 분화단계별로 mRNA의 발현 양상의 차이를 조사. 분화단계에 따라 발현강도와 발현유무의 차이를 보이는 총 73개의 특이적인 clone을 확보, 클로닝. 곤충병원성 사상균으로 부터 세포벽 합성 유전자의 일부를 확보, 그 유전자 염기서열 및 아미노산 서열을 조사하여, 이들 병원균의 분류학적 위치 분석. 2) 내열성 유용효소관련 유전자 내열성 균주인 Thermus caldophilus GK24로부터 genomic library를 제조하고, 이로 부터 찾아낸 유전자의 일차구조를 결정, 산업적으로 유용한 새로운 용도의 내열성 효소를 개발. 3) 곤충으로부터의 유용유전자 집누에나방과 흰불나방의 탈피 및 변태에 관여하는 chitinase의 cDNA의 확보, 그 염기서열 및 아미노산 서열을 조사, 생장에 따른 탈피과정에서의 발현정도 및 유무를 Southem hybridization으로 확인, 집누에나방의 chitinase를 baculovirus expression vector를 이용하여 곤충세포주에서 발현시켜 효소의 활성을 확인. 4) 당노질환모델동물의 유전적 형질검정 혈청내 생화학적 구성 성분의 비교분석에서 Glucose의 양이 유의성 있음. Total protein 및 triglycerides도 역시 모델동물 계통들이 ICR 계통에 비해 다소 차이. 비만과 직접연관되는 HDL-cholesterol과 creatinine kinase는 큰 차이를 나타내지 않음. 제한효소 절단다형질은 Xba I 만이 polymorphism을 보여, glycogen synthase cDNA와 hybridization 함으로써 당뇨질환의 모델형에 따른 대립인자 존재확인.

목차 Contents

• 세부과제 1...19
• 요약문...21
• SUMMARY...25
• Ⅰ. 서론...31
• 1. 생물다양성과 유용유전자원의 확보...31
• 2. 고등균류의 분화관련 유전자...33
• 3. 세포벽 합성 관련 유전자...34
• 4. Internal Transcribed Spacers (ITS)...38
• Ⅱ. 실험재료 및 방법...39
• 1. 근계의 탐색 및 균주확보...39
• 2. 균사체 배양 및 자실체 형성...39
• 3. DNA 및 RNA의 분리...42
• 4. mRNA differential display...44
• 5. CHS 유전자검출을 위한 primer design과 PCR 조건...47
• 6. ITS의 PCR 증폭 및 제한효소 절단다형질의 분석...48
• 7. 전기영동...50
• 8. PCR product의 cloning...50
• 9. DNA sequencing...51
• 10. 계통분류학적인 분석...51
• Ⅲ. 결과 및 고찰...53
• 1. F. velutipes의 균사체 배양 및 자실체 형성...53
• 2. F. velutipes의 분화관련 유전자 탐색...55
• 1) F. velutipes의 mRNA differential display...55
• 2) PCR product의 클로닝...58
• 3. 세포벽 합성효소의 탐색...58
• 1) CHS 유전자의 증폭...58
• 2) PCR product의 클로닝과 염기서열결정...60
• 3) CHS 유전자의 아미노산서열과 유연관계분석...64
• 4. 신속분류체계의 개발...65
• 1) Genomic DNA의 분리 및 ITS유전자의 PCR증폭...65
• 2) DNA의 제한효소 절단 다형질...65
• 3) 유전적 연관성의 분석...68
• 4) 신속분류체계의 확립...74
• Ⅳ. 참고문헌...77
• 위탁연구과제...83
• 세부과제 2...99
• 요약문...101
• Summary...105
• Ⅰ. 서론...109
• Ⅱ. 재료 및 방법...117
• 1. 유용 곤충자원의 확보...117
• 2. Total RNA의 추출...117
• 3. Genomic DNA의 추출...117
• 4. Northern Hybridization...118
• 5. Southern Hybridization...118
• 6. Chitinase 유전자의 baculovirus expression...119
• 7. Chitinase 활성의 측정...119
• Ⅲ. 결과 및 고찰...121
• 1. Chitinase cDNA 유전자의 염기서열...121
• 2. Chitinase 유전자의 Southern analysis...128
• 3. Chitinase mRNA 의 development-specific expression...128
• 4. Baculovirus expression vextor를 이용한 chitinase expression...132
• Ⅳ. 참고문헌...137
• 세부과제 3...141
• 요약문...143
• Summary...147
• Ⅰ. 서론...151
• Ⅱ. 재료 및 방법...153
• 1. 유전자의 정보검색...153
• 2. 사용균주 및 플라스미드...153
• 3. 사용시약 및 효소...154
• 4. 기기...154
• 5. 사용배지...155
• 6. DNA조작...155
• 7. PCR을 이용한 유전자 증폭...155
• 8. DNA sequencing...155
• 9. Southern hybridization...156
• 10. Colony hybridization...156
• 11. 탄수화물 분석방법...157
• 12. Agar plug의 제조...157
• 13. 제한효소의 처리...157
• 14. PFGE분석...157
• 15. Genomic library 제조.159
• 17. Enzyme preparation...159
• 18. Electroelution of protein...159
• 19. Km/ Vmax estimation...160
• 20. Cloning vector와 strategy...160
• Ⅲ. 결과 및 고찰...161
• 1. Xylose isomerase 유전자의 확인 및 클로닝...161
• 2. 탄수화물 유전자의 대장균내에서의 발현조절 및 역가확인...171
• 3. S4 DNA fragment의 cloning...171
• 4. 기타 다른 탄수화물효소 연구...179
• Ⅳ. 연구결과 및 활용에 대한 건의...193
• 1. 연구개발 결과 요약...193
• 2. 활용에 대한 건의...194
• Ⅴ. 참고문헌...195
• 세부과제 4...199
• 요약문...201
• Summary...205
• Ⅰ. 서론...209
• Ⅱ. 실험재료 및 방법...213
• 1. 공시동물...213
• 2. 혈청생리화학적 분석...213
• 3. Genomic DNA 추출...214
• 4. RFLP 분석...214
• 5. Glycogen synthase cDNA의 방사선 동위원소 표지...215
• 6. Southern blot analysis...215
• Ⅲ. 결과 및 고찰...217
• 1. 유전학적 형질검정 및 혈액생리화학적 특성...217
• 2. 분자생물학적 특성...218
• Ⅳ. 참고문헌...225