초록 ▼

경구용 바이러스 백신을 개발하고자 2가지 방향으로 실험을 진행하였다. 하나는 소장점막을 통한 침입경로를 가지는 소아마비 바이러스를 운반체로 하는 유전자 조작 기술을 이용하였고 다른 하나는 생체 고분자 물질에 의한 약물전달 체계를 이용하였다. 약독화된 소아마비 바이러스를 운반체로 이용하는 경우, 소아마비 바이러스 ?시드 일부에 B형 간염바이러스 표면항원이 발현된 recombiannt virus SBV-69를 얻었다. SBV-69는 소아마비 바이러스 및 B형 간염바이러스 표면항원으로부터 유래하는 2종류의 항원성을 모두 나타내었다.경구

경구용 바이러스 백신을 개발하고자 2가지 방향으로 실험을 진행하였다. 하나는 소장점막을 통한 침입경로를 가지는 소아마비 바이러스를 운반체로 하는 유전자 조작 기술을 이용하였고 다른 하나는 생체 고분자 물질에 의한 약물전달 체계를 이용하였다. 약독화된 소아마비 바이러스를 운반체로 이용하는 경우, 소아마비 바이러스 ?시드 일부에 B형 간염바이러스 표면항원이 발현된 recombiannt virus SBV-69를 얻었다. SBV-69는 소아마비 바이러스 및 B형 간염바이러스 표면항원으로부터 유래하는 2종류의 항원성을 모두 나타내었다.경구용 바이러스 백신 개발을 위하여 microencapsulation 기술을 이용하여 간염 B형표면항원과 oil을 배합하고 부형제를 첨가한 다음 polymer인 alginate로 피복해 미세 과립을 제조하여 기니픽에 경구 투여했을 때 주사제에 비해 25% 정도의 비교적 낮은 항체생성율을 나타냈다.

목차 Contents

• 제 1 부 유전자 조작 기술을 이용한 연구...25
• 제 1 장 서 론...27
• 제 2 장 재료 및 실험방법...45
• 제 1 절 재료...47
• 1. 일반시약...47
• 2. 방사능 동위원소 표지물질...47
• 3. DNA 및 효소...47
• 4. Nucleotide oligomer 및 primer...50
• 5. 박테리아 균주...51
• 6. 폴리오바이러스...51
• 7. 포유동물 세포...51
• 8. 배지...51
• 제 2 절 실험방법...52
• 1. Competent cell의 제조 방법...52
• 가. HB101 균주를 이용한 competent cell 제조...52
• 나. DH5$\alpha$ 균주를 이용한 competent cell제조...53
• 2. DNA Transformation...54
• 3. Colony의 선별...54
• 4. Plasmid vector 및 recombinant plasmid의 정제...55
• 가. 선별된 colony의 대량 배양...55
• 나. Cesium chloride 농도구배 초고속 원심분리에 의한 Plasmid 정제...56
• 다. Polyethylene glycol을 이용한 정제...57
• 5. Plasmid DNA fragment 의 분리...58
• 6. DNA Ligation...59
• 가. Cohesive ended DNA 의 ligation...59
• 7. Recombinant Plasmid의 구성...60
• 가. Recombinant plasmid pSBS-69의 구성...60
• (1) Subcloning vector pSA-191의 구성...62
• (2) Subcloning vector pBS-206의 구성...62
• (3) Subcloning vector pSBS-1341의 구성...62
• (4) Subcloning vector pBSKS-234의 구성...63
• (5) Subcloning vector pSBS-198의 구성...63
• (6) Recombinant plasmid pSBS-69의 구성...63
• 8. In vitro transciption...64
• 9. DNA 및 RNA transfection...64
• 10. 폴리오바이러스 및 배양 및 보관...65
• 11. 폴리오바이러스 및 SBV-69의 정제...66
• 12. 항혈청 및 폴리클로날항체...67
• 13. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)...67
• 14. 바이러스 RNA의 분리...68
• 15. Reverse transcription...69
• 16. Polymerase chain reaction(PCR)...70
• 17. DNA Sequencing...71
• 18. 전체 실험의 개략...72
• 제 3 장 실험 결과...75
• 제 1 절 키메릭 폴리오바이러스 SBV-69의 생성을 위한 pSBS-69의 구성...77
• 1. Subcloning vector pSA-191 의 구성...77
• 2. Subcloning vector pBS-206 의 구성...79
• 3. Subcloning vector pBSKS-1341 의 구성...81
• 4. Subcloning vector pSBP-234 의 구성...83
• 5. Subcloning vector pSBS-198 의 구성...85
• 6. Recombinant plasmid pSBS-69 의 구성...87
• 제 2 절 Transfection에 의한 cytopathic effect...89
• 1. DNA transfection에 의한 cytopathic effect...89
• 2. RNA transfection에 의한 cytopathic effect...89
• 제 3 절 폴리오바이러스 및 B형 간염바이러스 표면항원에 대한 폴리크로날 항체의 생산...91
• 1. 폴리오바이러스에 대한 항체의 특이성...91
• 2. B형 간염바이러스 표면항원에 대한 항체의 특이성...91
• 제 4 절 키메릭 폴리오바이러스, SBV-69의 생성...93
• 1. SBV-69 virus의 정제...93
• 2. SBV-69의 genome내에서의 B형 간염바이러스 epitope 표면항원 유전자의 확인...96
• 3. SBV-69의 항원성...101
• 가. SBV-69 바이러스에 대한 항폴리오바이러스 항체의 특이성...101
• 나. SBV-69 바이러스에 대한 항 B형 간염바이러스 표면항원 항체의 특이성...101
• 4. 항SBV-69 바이러스 항체(Anti SBV-69 virus Ab)의 B형 간염바이러스 표면항원에 대한 특이성...103
• 제 4 장 고 찰...105
• 제 5 장 결 론...111
• 참고문헌...115
• 약어목록...133
• 제 2 부 약물전달 체계를 이용한 연구...137
• 제 1 장 서 론...139
• 제 2 장 재료 및 실험방법...143
• 제 1 절 시약 및 재료...145
• 제 2 절 실험기구 및 기기...145
• 제 3 절 동물...147
• 제 4 절 Microencapsule의 제조...147
• 제 5 절 Microencapsule의 크기분포와 형태...147
• 제 6 절 역가시험...148
• 1. 표준품의 면역...148
• 2. 시료의 면역...148
• 3. 역가시험...148
• 제 3 장 결과 및 고찰...151
• 제 1 절 과립의 크기와 형태...153
• 제 2 절 역가시험...155
• 제 4 장 결론...159
• 제 5 장 참고문헌...163